发酵茶中多种真菌毒素超高效液相色谱-串联质谱法的测定

采用乙腈/水溶液(84+16)提取试样、Myco Spin 400多功能柱净化,建立了发酵茶(普洱茶、湖南黑茶和红茶)中黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2、赭曲霉毒素A(OTA)五种真菌毒素的简单、快速超高效液相色谱-串联质谱检测方法。试样以Agilent Zorbax Rrhd SB-C18柱分离,多反应监测(MRM)模式进行定量与定性分析,外标法定量。结果表明,在优化的条件下,五种真菌毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数(r)不低于0.9983,定量限(LOQ)为0.1~0.5μg/kg,低、中、高3个加标水平的平均回收率(n=3)为63.5%~125.0%,相对标准偏差(RSD)为3.9%~17.2%。该方法前处理简单、检测速度快、净化效果好、结果准确、可靠,适合发酵茶中多种真菌毒素的快速检测。     

HPLC-MS/MS法测定曲霉菌代谢物中黄曲霉毒素及同系物

建立了同时检测曲霉菌代谢物中黄曲霉毒素和同系物的高效液相色谱-线性离子阱质谱测定方法。产黄曲霉毒素B1(AFB1)寄生曲霉(菌株3.124)经PDA固体培养基培养,提取净化后经线性离子阱(QTrap)质量分析器分析(正离子模式,多反应检测),以AFB1二级碎片(MS2)信息和其同系物分子式信息预测代谢物MRM方法,检出3.124代谢物中黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、O-甲基杂色曲霉素(MST)、杂色曲霉素(ST)5种真菌毒素,并用标准品进行了确证。结果表明,AFB2和AFG2在0.5μg/L~40μg/L,其它4种代谢物在0.2μg/L~40μg/L范围内线型关系良好,相关系数均大于0.99。本方法 6种代谢物日内回收率81.3%~92.3%,相对标准偏差(RSD)为3.4%~6.2%;日间回收率82.1%~91.7%,RSD为3.8%~7.7%。该方法为快速检测霉菌代谢物中的同系物提供新的方法。     

超高效液相色谱-质谱联用法检测地理标志产品松江大米中8种真菌毒素的含量

建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法同时检测大米基质中8种真菌毒素的方法,对地理标志产品松江大米中真菌毒素的污染情况进行监测。大米样品经提取液乙腈水混合液（84:16,v:v）超声提取后,取部分提取液加入内标溶液,混匀后过多功能净化柱MycoSep229净化,采用Waters Acquity UPLC?BEH?C18色谱柱 (2.1 mm×50 mm, 1.7 μm),以0.1%（v:v）甲酸水溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,分离黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, AFB1）、黄曲霉毒素B2（Aflatoxin B2, AFB2）、黄曲霉毒素G1（Aflatoxin G1,AFG1）、黄曲霉毒素G2（Aflatoxin G2, AFG2）、伏马毒素B1（FumonisinsB1, FB1）、伏马毒素B2（FumonisinsB2, FB2）、伏马毒素B3（FumonisinsB3, FB3）、赭曲霉毒素A（Ochratoxin A, OTA） 8种真菌毒素化合物,该方法采用电喷雾离子化正离子模式,以多反应监测方式进行。AFB1、AFG1、FB1、FB2、FB3、OTA 6种真菌毒素在0.5-15μg/L范围内线性良好,AFB2、AFG2在0.125-3.75μg/L范围内线性良好,线性相关系数r均大于0.999;8种化合物定量限(limit of quantifications, LOQs)范围为0.01-0.25 μg/kg,比国标中相同方法的定量限降低2-80倍不等;在低、中、高三水平加标,其回收率均在95%~120%范围内,相对标准偏差(relative standard deviations, RSDs)为1.5%~8.9% (N=6)。本方法前处理简单,方法利用率高,结果准确可靠,利用该方法检测的20批新上市松江大米中真菌毒素污染情况比较乐观,对人体的健康危害较低。     

高效液相色谱法同时检测粮食中常见8 种真菌毒素的含量

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时测定粮食中黄曲霉毒素B1（aflatoxins,AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）、赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）、玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）、呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）和T-2毒素的检测方法。样品经乙腈-水提取后,用免疫亲和柱净化,Agilent Elipse Plus C18（100 mm×4 mm,3.5 μm）色谱柱分离,以甲醇-乙腈-水-乙酸为流动相,流速1 mL/min,柱温35 ℃,进样量20 μL,检测系统为可变波长检测器串联光化学衍生器串联荧光检测器。根据信噪比为3的峰响应值,确定各真菌毒素的检出限为：AFB1 0.446 ng/mL、AFB2 0.152 ng/mL、AFG1 0.523 ng/mL、AFG2 0.334 ng/mL、ZEN 7 ng/mL、OTA 0.7 ng/mL、DON 200 ng/mL、T-2毒素100 ng/mL。样品中各真菌毒素的平均加标回收率,玉米为80.0%～104.5%,小麦为83.2%～102.8%,方法精密度为2.6%～10.2%。从样品前处理到分析整个过程耗时约2 h。本方法简便、快速、灵敏度高,适用于粮食中多种真菌毒素的快速测定。     

啤酒酿造原料中黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A同时检测分析方法研究

研究建立同时检测啤酒及酿造原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-柱后化学衍生-高效液相色谱方法。样品经过甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱进行富集和净化,采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱,以乙腈-2%乙酸(40∶60,v/v)为流动相,等度洗脱,柱后以0.5%碘溶液衍生、改变波长荧光检测。结果表明,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A检出限分别为0.05μg/kg(AFB1)、3.19μg/kg(ZEA)和0.22μg/kg(OTA),标准曲线的线性范围分别为0.2~10.0μg/L、10.0~1000.0μg/L和5.0~50.0μg/L;在大麦样品中加标回收率为90.0%~109.5%,相对标准偏差为2.18%~4.94%。被检37个样品的真菌毒素含量检测结果表明,正常贮存下的啤酒原料均未检测出真菌毒素,但在霉变大麦样品中可以检测出少量的真菌毒素。     

多功能柱净化-超高效液相色谱串联质谱法同时测定水产品中11种真菌毒素

建立了同步测定水产品中黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-Ac DON)、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-Ac DON)、镰刀菌烯酮(Fus-X)等11种真菌毒素的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。试样样品以乙腈/水溶液(84+16)提取,Myco Spin 400多功能柱净化,Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18柱分离,多反应监测(MRM)模式进行定量与定性分析,外标法定量。结果表明,11种目标物在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数(r)≥0.9918,定量限(LOQ)为0.1~20.0μg/kg,加标平均回收率(n=3)为62.8%~115.3%,相对标准偏差(RSD)为2.6%~19.0%。该方法前处理简单、净化效果好、灵敏度高、重现性好,适合于水产品中痕量真菌毒素的多残留快速检测。     

液相色谱—串联质谱法同时检测食品中的4种黄曲霉毒素

建立同时对食品中的4种黄曲霉毒素进行定性定量分析的高效液相色谱三重四极杆质谱确证方法.样品经甲醇-水提取、免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-串联质谱进行分析测定.黄曲霉毒素在所测浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,r＞0.998,平均加标回收率在80.6％～ 100.6％,相对标准偏差(RSD)在1.1％～7.5％,AFB1、AFG1的最低检出限为0.2 μg/kg,AFB2、AFG2的最低检出限为0.05 μg/kg.该方法快速、灵敏、准确、可靠,是食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定的理想方法.     

高效液相色谱和高效液相色谱-离子阱质谱测定花生、玉米和大米中黄曲霉毒素方法比较

比较花生、玉米和大米中黄曲霉毒素(AFT)测定的两种分析方法。样品经70%甲醇溶液(含NaCl 4g/100mL)提取,自制免疫亲和柱净化。洗脱液一分为二,一份经正己烷、三氟乙酸衍生后用配有荧光检测器的液相色谱检测;另一份无需衍生用液相色谱-串联离子阱质谱检测。液相色谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限(RSN=3)分别为0.5～1.5μg/kg,相关系数在0.9979～0.9999,加标回收率50.29%～126.54%;液相色谱-串联质谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限分别为0.1～0.2μg/kg;相关系数在0.9993～0.9998,加标回收率50.38%～121.27%。结果表明液相色谱-离子阱质谱法无论在选择性还是在灵敏度上都优于高效液相色谱。     

免疫亲和柱净化-大体积流通池高效液相色谱法同时检测食品中6种黄曲霉毒素

建立了免疫亲和柱净化-大体积流通池无需衍生同时测定食品中6种黄曲霉毒素(Aflatoxins)的检测方法。样品采用乙腈-水(84:16,V/V)超声辅助提取,用免疫亲和柱净化,经过XBridge TM C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。采用乙腈-甲醇-水(15:25:60,V/V)为流动相,大体积流通池荧光检测器检测,无需衍生,外标法定量。6种黄曲霉毒素在9.5 min内有效分离,从样品前处理到结果分析整个过程小于50 min。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的检出限(LOD,S/N=3)分别为0.05μg/kg、0.02μg/kg、0.05μg/kg、0.02μg/kg、0.04μg/kg、0.03μg/kg,能够满足我国对食品中黄曲霉毒素限量的要求。6种黄曲霉毒素标准曲线线性良好,线性相关系数r2大于0.999;样品加标回收率为77.6%~90.5%,精密度RSD为2.42%~6.08%。本方法简便、准确、灵敏度高,无需衍生即可同时检测食品中6种黄曲霉毒素,适用于食品中6种黄曲霉毒素的快速定量测定。     

粮油中黄曲霉毒素检测研究

正黄曲霉毒素(AFT)是由黄曲霉和寄生曲霉在温度、湿度合适的条件下产生的真菌毒素,其存在对人体具有极强的致癌、致畸等危害,包括AFB1、AFB2、AFG 1、AFG 2等~([1,2])。全世界每年约有1/4的食品会受到黄曲霉毒素的污染,花生、玉米等原料在生产、运输中易受黄曲霉毒素的污染~([3])。现有免疫亲和柱净化-高效液     

利用液相色谱对原粮的真菌毒素检测——HPLC法测定玉米赤霉烯酮

<正>真菌毒素是一种真菌产生的有毒代谢产物。常见的污染粮食的真菌毒素包括:玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)、黄曲霉毒素B1(aflatoxins,AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)以及T-2毒素等。根据大量研究文献及实验室的长期监测数据,出现很多粮食中同时遭到多种真菌毒素污染的情况。在基层实验室检测仪器配置情况的基础上,我国     

免疫亲和层析荧光光度法测定枸杞中黄曲霉毒素

利用免疫亲和层析荧光光度法测定枸杞中的黄曲霉毒素(AFT),样品由甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释,用黄曲霉毒素免疫亲和柱净化。以甲醇洗脱,溴溶液显色,荧光光度计测定黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)含量。枸杞的最低检出限为1μg/kg,5μg/kg的加标回收率为99.6%,10μg/kg的加标回收率为114.0%。该方法准确、快速、安全。     

免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定月饼中的黄曲霉素

<正>建立了月饼中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定方法。样品用甲醇—水提取,经免疫亲和色谱柱净化,采用液相色谱法荧光检测。试验结果表明:空白样品分别按照1.0、2.0、12.5μg/kg添加黄曲霉毒素,回收率为68.7%~98.3%,方法检出限分别为0.4、0.1、0.4、0.1μg/kg。该方法灵敏度高,重现性好,适用于月饼样品     

电解水对鱼干中真菌毒素消除效果研究

本研究探讨了电解水对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)及赭曲霉毒素(OTA)5种真菌毒素标准品(50μg/L)的消除效果,进一步分析比较电解3个浓度Na C1溶液(1.5、2.0、2.5 g/L)得到的酸性电解水(Ac EW-1、Ac EW-2、Ac EW-3)及碱性电解水(Al EW-1、Al EW-2、Al EW-3),以及Ac EW-3、Al EW-3与去离子水(TW))之间对人工污染鱼干(2±0.5 g、40μg/kg)中5种真菌毒素的消除效果差异。碱性电解水能有效的消除5种真菌毒素标准品,消除率均在90%以上。Ac EW-3对鱼干中5种真菌毒素消除效果优于Ac EW-1及Ac EW-2;3种Al EW对鱼干中5种真菌毒素的消除效果无显著性差异(p0.05)。Ac EW-3与Al EW-3对鱼干中4种黄曲霉毒素的消除效果显著(p0.05)高于TW,但两者之间消除效果无显著性差异(p0.05),Al EW-3对鱼干OTA的消除效果均显著(p0.05)高于Ac EW-3及TW消除效果。因此,用碱性电解水浸泡鱼干,去除多余盐分同时,消除鱼干中可能存在的真菌毒素,减少由真菌毒素导致的食品安全问题。     

超快速液相色谱-串联质谱法测定粮食及食用油中的黄曲霉毒素

应用超快速液相色谱―串联质谱法技术,建立粮食及食用油中黄曲霉毒素的检测方法,并对宁夏市售小麦粉、玉米制品和食用油进行分析。样品经乙腈―水(20︰80)提取,免疫亲和柱净化;以甲醇–0.1%甲酸水溶液为流动相,用Atlantis T3色谱柱分离,以电喷雾正离子模式进行质谱测定。采用该方法,黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2可在6分钟内完成检测,分别以小麦粉、玉米制品和食用油为加标基质,三个加标水平下的平均回收率为75.6%~94.1%,相对标准偏差小于10.0%,检出限(S/N=3)为0.05μg/kg,定量限(S/N=10)为0.15μg/kg。该方法操作快速简单、重现性好,可用于粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检测。     

烟台市售谷类及其制品中真菌毒素污染状况调查分析

为了解烟台市谷类及其制品中真菌毒素的污染状况,采用随机采样方法,2014年4月~2017年9月在烟台辖区11个监测点采集4类225种样本,按照《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》规定的真菌毒素标准操作程序,进行15种真菌毒素的检测。结果表明,烟台市玉米及其制品、小麦及其制品普遍存在不同种类真菌毒素污染,而大米、小米均未检出,检出率为52.44%,超标率2.22%。小麦及其制品中主要检出15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyldeoxynivalenol,15-Ac-DON)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、伏马菌素B1,检出率分别为0.8%、55.2%、0.24%,伏马菌素B1仅存在小麦(原粮)中,15-Ac-DON则仅存在湿面条中。小麦及其制品中DON均有检出,均值73.86μg/kg,馒头、面条(干、湿)、面包中DON的样本检出率100%,小麦粉为40%,小麦(原粮)为20%。玉米及其制品中真菌毒素检出率为53.85%,主要存在伏马菌素(B1、B2、B3)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、DON、15-Ac-DON、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)、黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)、黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2,AFB2),检出率分别为32.97%、19.78%、26.37%、21.98%、17.58%、13.19%、8.79%、4.40%、2.20%;而T-2毒素、黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1,AFG1)、黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2,AFG2)检出率均为1.10%;玉米油中仅检出ZEN,检出率51.85%,均值126.68μg/kg。小麦及其制品和玉米其制品中均在毒素多重混合污染同一样本状况,2种及以上真菌毒素的多重污染率13.33%,3种毒素多重污染率最高为5.33%,玉米及其制品多重污染水平高于小麦及其制品。     

QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定发酵黑茶中的10种真菌毒素

建立了云南普洱茶、湖南黑茶、广西六堡茶和湖北老青茶等发酵黑茶黄曲霉毒素B1（AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-AcDON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、T-2毒素（T-2）、HT-2毒素（HT-2）、赭曲霉毒素A（OTA）等10种真菌毒素的简单、快速、高灵敏度超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品采用乙腈/水溶液（84+16）提取试样、QuEChERS净化,试样以C18柱分离,多反应监测（MRM）模式进行定量与定性分析,采用外标法定量。结果表明,在优化的条件下,10种真菌毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数（r）均不小于0.9995,定量限（LOQ）为0.1~10 μg/kg,在三个不同加标水平下平均回收率为61.9%~120.3%,相对标准偏差（RSD）为3.2%~16.1%。采用建立的方法对市面上销售的黑茶中的10种真菌毒素进行了筛查,数批产品检出真菌毒素。该方法简单、准确、可靠,可适用于发酵黑茶中多种真菌毒素的快速分析。     

山东省玉米真菌毒素污染状况调查及分析

为掌握山东省玉米的真菌毒素污染状况,评估污染带来的安全风险,为加强真菌毒素污染防控提供依据,采集了山东省玉米主产县2013年~2014年收获和储藏的玉米样品共520批次,采用液相色谱—飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q-TOF)方法检测了玉米中黄曲霉毒素(AFB_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2)、伏马毒素(FB_1、FB_2、FB_3)、呕吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的污染水平。结果表明,AFB1、AFB2、AFG1在玉米中检出率分别为18.08%、7.88%、0.77%,平均含量分别为7.62、0.60、0.05μg/kg;FB1、FB2、FB3检出率分别为92.50%、88.08%、83.85%,平均含量分别为1 798.69、531.83、197.71μg/kg;DON检出率为26.35%,平均含量为240.44μg/kg;ZEN检出率为14.62%,平均含量为74.90μg/kg;AFG2未检出。调查结果还表明,伏马毒素在所测样品中污染最为严重,超标率达33.46%;单一样品受多种毒素混合污染的情况较严重。     

超高效液相色谱-串联质谱测定芝麻酱中16种真菌毒素

建立了芝麻酱中16种真菌毒素(赭曲霉毒素A、T-2毒素、伏马菌素B2、伏马菌素B1、O-甲基杂色曲霉素、蛇形菌素、新茄镰孢菌醇、杂色曲霉素、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、曲酸、青霉酸、橘青霉素、黄曲霉毒素M1)多残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLCMS/MS)的检测方法。芝麻酱样品经乙腈-水-乙酸(80∶19∶1,体积分数,下同)溶液提取,QuEChERS方法净化后,以含0.1%甲酸的水溶液与乙腈为流动相,经ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm)分离,以多级反应监测(MRM),外标法定量。结果表明:16种真菌毒素的检出限为0.03~1.5μg/kg,定量限为0.10~4.0μg/kg;线性范围在0.10~200μg/kg内各成分的线性相关系数均大于0.991;样品在定量限1倍、2倍和10倍3个添加水平下的平均回收率为70.7%~99.2%,相对标准偏差(RSD)为3.26%~10.5%。该方法简便、灵敏、快速,可用于芝麻酱中多种真菌毒素污染的监控分析。     

高效液相色谱法对稻谷及稻谷籽粒中黄曲霉毒素的测定研究

采用免疫亲和柱净化的前处理方法,建立了用甲醇-乙腈-水(28∶17∶55体积比)三元流动相体系分离黄曲霉毒素(G2、G1、B2、B1),柱后光化学在线衍生、高效液相色谱荧光检测器测定稻谷及稻谷籽粒中黄曲霉毒素(G2、G1、B2、B1)的新方法。使用该方法可在20 m in内完成测定,4种黄曲霉毒素的线性关系r值均大于0.999。样品在不同水平的加标回收试验中,回收率为79%~108%,相对标准偏差2.2%~9.5%,黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1,的检出限均小于0.40μg/kg,黄曲霉毒素B1的检出限为0.20μg/kg。该方法灵敏度高、简单快速、准确且重复性好。同时运用该方法对稻谷籽粒中黄曲霉毒素的分布进行研究。