HPV16 L1基因的PCR扩增、纯化和酶切鉴定

用重组DNA技术获取人乳头瘤病毒(HPV)16型晚期基因L1.以提取的宫颈癌细胞株Caski细胞总DNA为模板,设计一对L1基因特异引物,用PCR方法扩增HPV16 L1重组基因,用柱层析技术纯化和酶切初步鉴定HPV16 L1重组基因.该方法不仅可以扩增出HPV16 L1重组基因,用层析技术纯化HPV16 L1重组基因,还能通过酶切鉴定PCR产物HPV16 L1全长基因,为HPV感染的检测诊断和宫颈癌疫苗的制备奠定基础.     

HPV16型免疫胶体金诊断试纸条的制备

建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸三钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得了稳定的金标抗体溶液。实验结果表明:第7种样品垫处理液和第7种结合垫处理液处理样品垫和结合垫组装的试纸条效果最好;试纸条检测HPV16E6蛋白为阳性,检测HPV16L1蛋白为阴性。     

表达人源PD-L1的4T1细胞系的构建

为构建稳定表达人源hPD-L1分子的小鼠乳腺癌细胞系(4T1),建立BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤模型,采用Lipofactamine 3000转染试剂将携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)和hPD-L1的质粒转入4T1细胞中,经嘌呤霉素筛选获得4T1-hPD-L1单克隆细胞系,通过流式细胞术检测细胞纯度。将构建成功的细胞系皮下植入BALB/c小鼠背部,建立乳腺癌皮下肿瘤模型。流式细胞术检测4T1-hPD-L1细胞中GFP、PD-L1双阳性率为97.0%。将4T1-hPD-L1单克隆细胞系皮下接种于BALB/c小鼠背部可成瘤。成功构建稳定表达hPD-L1分子的4T1单克隆细胞系,并建立BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤模型,为进一步研究PD-L1抗体药物提供参考。     

树突细胞辅助T细胞抗肿瘤模型的稳定性与周期解

为了研究树突细胞辅助T细胞抗肿瘤的动力学性质,根据树突细胞与T细胞杀伤肿瘤的机制,建立树突细胞辅助T细胞抗肿瘤模型.以输注活性T细胞增加率为参数,给出了无肿瘤平衡点和肿瘤正平衡点的存在条件.利用规范型与中心流形理论,得到模型的规范型、解的稳定条件与周期解的存在条件.用Matlab数值模拟展示系统出现无肿瘤现象与肿瘤周期...     

CDld基因稳定转染Panc-1细胞系的建立

实验采用PCR法获得CD1d基因片段,将其插入慢病毒pReceiver-Lv201载体（带GFP荧光）中获得EX-S0249-LV201重组质粒,经转染试剂EndoFectin-Lenti转染到293T细胞中获得慢病毒LP-S0249-LV201,用包装获得的慢病毒感染胰腺癌Panc-1细胞,在不同时间段用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,并用反转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法验证获得的表达细胞株.实验结果显示经RT-PCR和Western blotting检测证实慢病毒LP-S0249-LV201 转染至Panc-1细胞株后,该细胞株表达CD1d基因和蛋白,成功建立了稳定表达CD1d基因的Panc-1细胞系,为进一步研究CD1d基因在胰腺癌免疫基因治疗中的作用奠定基础.     

关于L1-回归影响分析的两个问题

根据有关文献中把L1-回归问题归结为线性规划问题的有关结论,给出了最优解的条件及其等价形式,并讨论了L1-回归影响分析的两个问题:某一数据点的局部变动,对参数估计值的影响;某一数据点被删除后,对参数估计值的影响.     

一种基于L1范数模型和内点理论的潮流算法

提出一种结合L1范数模型和内点理论的潮流计算方法,利用基于扰动KKT条件的原始-对偶内点算法进行一般潮流问题求解.与以前的最小潮流法相比,该方法简单、求解易于收敛、易于程序实现,便于对病态系统求解,并同时能判断潮流方程是否有解.     

采用加权L1范数稀疏模型构造DOA估计的方法

在以GPS辐射源发出信号作为探测信号的无源雷达系统中,针对回波通道内强干扰低信噪比情况下的多目标波达方向(DOA)估计问题,根据GPS辐射信号以及无源雷达系统特点,提出一种采用改进加权L1范数的约束模型构造DOA估计的方法。先采用批处理抵消算法(extensive cancellation algorithm,ECA)估计目标信号的时延和多普勒频移等参数,消除直达波和多径干扰,然后利用改进权值的L1范数作为约束条件,建立稀疏模型进行DOA估计,在低信噪比环境中无需估计干扰参数,以较低的计算复杂度进行准确DOA估计。仿真结果表明:该方法减少了计算复杂度,在相同配置下运行时间比MUSIC-like方法降低了1.18 s;同时也提高了准确性,其均方误差较MUSIC-like方法和Candes方法降低了0.5°~3.7°,低信噪比环境下分辨概率较MUSIC-like方法和Candes方法提高了0.4~0.6。     

融合蛋白sCAR-TSP-1原核表达纯化及诱导白血病细胞K562凋亡的研究

根据thrombospondin-1(TSP-1)氨基酸序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR-TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程茵。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-TSP-1。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE分析表明,有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-TSP-1对白血病细胞K562有明显凋亡作用。     

融合蛋白sCAR—TSP-1原核表达纯化及诱导白血病细胞K562凋亡的研究

根据thrombospondin-1（TSP-1）氨基酸序列（RFYVVMWK）,以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR—TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程菌。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-TSP-1。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE分析表明,有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-TSP-1对白血病细胞K562有明显凋亡作用。     

动物肝损伤模型建立的研究进展

肝损伤涉及短期内突发的肝细胞损害,其病因较多,机理复杂。动物实验是研究该病发病机制及临床前药物筛选的重要方法之一。本文基于肝损伤的模型建立,对四氯化碳、D-半乳糖胺、乙醇,以及人源性肝嵌合体小鼠等模型建立进行综述,为研究动物实验肝损伤提供有针对性的选择方法。     

稳定下调SIRT1基因表达的肝癌细胞系的构建

SIRT1(silent information regulator 1)与多种肿瘤的发病过程关系密切,但是其在肝癌中的作用尚不明确。为了研究SIRT1与肝癌的关系,通过构建慢病毒载体,病毒转染和包装,嘌呤霉素的筛选等实验方法,成功构建能稳定下调SIRT1基因表达的肝癌细胞系Hep3B和PLC/PRF/5,为后期进一步研究SIRT1在肝癌发病过程中的功能奠定了基础。     

输入方式与母语迁移对二语习得的影响

论述了输入方式和母语迁移对二语习得的影响，提出了输入什么，怎样输入以及如何抵抗母语干扰以提高二语习得水平。     

过表达Akt1细胞株的构建及鉴定

Akt1是细胞信号传导通路中的关键信号分子,具有促进细胞增殖、生长、迁移、侵袭,以及抑制细胞凋亡,抵抗化疗和放疗等重要作用。文章通过构建pLJM1-Akt1重组质粒,利用慢病毒侵染的方法将重组质粒转染至K562、Bel-7404细胞,用嘌呤霉素筛选得到Akt1稳定过表达的Bel-7404/Akt1、K562/Akt1细胞株,通过Western bloting分析细胞株中Akt1的表达情况。结果显示：Bel-7404/Akt1与K562/Akt1细胞中Akt1表达量明显高于野生型Bel-7404细胞与K562细胞,成功构建过表达Akt1的K562/Akt1、Bel-7404/Akt1稳转细胞株。Akt1过表达细胞株的成功构建为寻找和筛选高效、低毒、强特异性的Akt1抑制剂以及逆转细胞多药耐药（multidrug resistance,MDR）的研究提供了实验模型。     

基于L1范数和最小软阈值均方的目标跟踪算法

基于传统稀疏表示的目标跟踪算法无法解决跟踪过程出现的遮挡及运动模糊等问题,提出一种基于L₁范数和最小软阈值均方的目标跟踪算法。首先用主成分分析(principal component analysis, PCA)基向量建模跟踪目标的表观变化,同时对表示系数进行L₁范数约束;其次对误差项采用最小软阈值方法进行显示求解,同时对观测模型的更新上考虑跟踪目标的遮挡因素;最后在贝叶斯框架下搭建目标跟踪算法。在14个具有挑战性的跟踪视频上的试验结果表明:与其他算法相比,本研究能够克服跟踪过程中遮挡、角度变化、尺度变化、光照变化等影响跟踪性能的因素,具有较高的平均覆盖率和较低的平均中心点误差。     

有后效激励阶跃数据序列的灰色系统建模方法

为使有后效激励阶跃数据序列的建模工作更为有效简洁,基于一般的 Ｇ Ｍ（１ ,１） 模型建模方法,采用递推方法,确定有后效激励阶跃数据序列阶跃点及其以后点的阶跃值,建立了有后效激励阶跃数据序列的灰色系统预测 Ｉ Ｇ Ｍ（１ ,１） 模型,运用该模型及有关方法,通过实例预测结果,进行了对比验证．经验证,该方法的拟合精度较高,且参数估计简单,方便实用,可替代上述文献中的有后效激励阶跃数据序列的建模方法．最后应用该方法,建立了全国城市住宅市场需求模型,并对该市场进行了预测分析     

有人为差错系统的危险性建模与量化研究

根据可靠性理论建立了有人为差错情况下不可修复系统的失效模型。若与时间无关的人为差错概率已知,用此模型可进行有人为差错系统的失效分析。当人为差错概率是时间的函数时,用此模型可预测未来某一时刻有人为差错系统可能发生事故的危险性。为使所建模型具有实用性,探讨了人为差错的量化方法,提出将人为差错频率转化为差错率的计算公式,从而使所建模型用于系统危险性预测成为可能。     

有效税收筹划评估模型的构建

有效税收筹划是一种研究纳税人在现有各种约束条件下选择最有利的税收筹划方案的理论,纳税人应结合企业战略,在税收筹划时充分考虑交易各方利益、隐性税收、非税成本和筹划风险。本文基于有效税收筹划理论的四条关键思路,构建了有效税收筹划方案选择的评估模型,为企业开展税务筹划提供方法路径和技术支持。