一株产α-淀粉酶菌株的分离筛选、鉴定及酶学性质研究

为了更加经济、更高产量的分离出高纯酶,该实验从富含淀粉的土壤中筛选出1株高产淀粉酶的菌株LZ-10,通过菌落形态观察、生理生化特性实验、16S rDNA序列和gyrB基因序列分析对其进行鉴定。采用硫酸铵盐析,DEAE-52阴离子交换纤维素纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白分子质量。结果表明,菌株LZ-10鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。纯化后的淀粉酶比活力为59.91 U/mg,纯化倍数为4.53,回收率为60.5%,分子质量为55.4 kDa。对其酶学性质进行研究,得出菌株LZ-10所产淀粉酶最大酶活力为41.6 U/mL,最适作用温度为50 ℃,在50～70 ℃温度环境下其稳定性较高;最适pH值为7.0,在pH=5.0～7.0的环境条件下稳定性较高;Ca2+、Mg2+、Na+、K+对淀粉酶有激活作用;乙二胺四乙酸（EDTA）、Fe2+、Zn2+对淀粉酶有抑制作用。     

产淀粉酶芽孢杆菌的分离鉴定、高温驯化及酶学性质研究

该研究从酱香型高温大曲中筛选出产淀粉酶芽孢杆菌，对筛选菌株进行形态学观察、分子生物学鉴定以及高温驯化，并针对驯化前后所产淀粉酶进行酶学性质研究。结果表明，分离筛选到的产淀粉酶菌株Amy Z5为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，在45℃培养条件下生物量及淀粉酶活性有较大幅度降低。菌株Amy Z5经高温驯化，生长温度提高至45℃，并缩短对高温环境的适应期，培养3 h时OD_{600 nm}值即提高4.2倍。高温驯化后的菌株HTAmyZ5所产淀粉酶的最适反应温度从40℃提高至70℃，最适反应pH仍为3，在20～90℃及pH 1～7条件下酶活均能保持在60%以上，pH 9时仍有40%的酶活；最高酶活性提高了3.1倍，达到322.1 U/m L；但稳定性受到高温环境影响略有下降。该研究对酱香型大曲微生物高温发酵、原料高效持久利用及关键香气成分的形成均具有一定的参考意义。     

枯草芽孢杆菌变异菌株的α-淀粉酶分离纯化及酶学性质的研究

从枯草芽胞杆菌变异菌株培养得到的α—淀粉酶,通过硫酸铵沉淀,DEAE-葡聚糖凝胶A-50,葡聚糖凝胶G-100以及超滤浓缩等操作,获得该酶的纯样品,该酶的分子量、等电点分别为52.5KD、pI 4.6。该酶的最适pH和温度分别为pH6.0及65℃,稳定pH范围为pH4.5～7.5,而且在50℃时该酶活力较稳定。Ca~(2 )、Mg~(2 )、Li~ 对酶活有激活作用,而Ag 、Al~(3 )、Cu~(2 )、Fe~(2 )、Zn~(2 )、Mn~(2 )、Ni~(2 )和CO~ 对酶活有抑制作用。另外,该酶对可溶性淀粉的分解限度为42.8％,由此可估计该酶属于糖化型α—淀粉酶。     

酸性α-淀粉酶生产菌株的筛选及酶学性质研究

从土壤中筛选到一株产酸性α-淀粉酶的野生菌株N7,此菌株具有较高的产酶活性。通过菌落形态、菌体特征观察和16SrDNA序列比对,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。其酶学性质研究表明,菌株代谢产酶的反应最适温度为53℃,最适作用pH值为4．6,在pH3．0～10．0之间,具有较好的酸稳定性。     

一株耐酸性α-淀粉酶高产芽孢杆菌的选育和鉴定

从某柠檬酸厂分离到1株耐酸性α-淀粉酶的生产菌株YC,经16S rDNA法鉴定为蜡状芽孢杆菌.通过紫外诱变及紫外-硫酸二乙酯(DES)复合诱变,选育到1株产酶稳定的正向突变株YC-UV9-D13,连续传种10代后测定其酶活仍达250.77U/mL,比野生茼株提高了4.9倍,为工业化推广奠定了良好的基础.     

一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选及酶学性质研究

从酿造大曲中筛选到高产α-淀粉酶菌株A-5-3,对其进行生物学鉴定,鉴定结果为黑曲霉;对其发酵液进行酶学性质初步研究,结果表明:该酶的最适pH值为3.6,最适温度为70℃,热稳定性良好。在pH3.0~5.0之间,具有很好的酸稳定性且为非Ca2+依赖型水解酶,在工业生产上有良好的应用前景。     

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF（苯甲基磺酰氟）及DTT（二硫苏糖醇）对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。      

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF(苯甲基磺酰氟)及DTT(二硫苏糖醇)对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。     

产普鲁兰酶蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及酶学性质研究

利用选择性培养基从广西南宁淀粉加工厂附近土壤中分离出一株具有产普鲁兰酶能力的野生菌株GXBC-2。该菌株革兰染色为阳性,形成芽孢,菌体细胞杆状,结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定该菌株为Bacillus cereus GXBC-2。对该菌所产普鲁兰酶的性质研究表明:酶的最适反应温度为50℃,在30～50℃范围内稳定,最适pH为7.0,稳定pH范围为6～8.5。产物经HPLC分析证明,该酶能水解普鲁兰糖产生麦芽三糖,对可溶性淀粉不起作用,所以该酶属于I型普鲁兰酶。     

耐高温α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及发酵条件与酶性质研究

从西藏八宿温泉附近土壤中 ,分离到一株能在 5 .5℃生长并分泌高温α- 淀粉酶的菌株 ,其生长pH 5 . 0～11. 0 ,最适生长pH 7. 0～ 8. 0。该菌株经初步鉴定为地衣芽孢杆菌 ,命名为BacilluslicheniformisZ - 8。在 4 5℃ ,10 %装液量 ,16. 0r/min条件下振荡培养 4 8h后 ,发酵液酶活可达 2 1. 2× 10 .4UV/mL。发酵培养基的组成成分为黄豆粉 0 . 5 %、麸皮 1%、可溶性淀粉 0 . 2 5 %、pH 8. 8。对该酶的性质研究表明 ,其最适作用pH为 6 . 0 ,最适反应温度为 95℃ ,95℃下保温 6 0min处理后酶活仅损失 5 . 4 % ,对Ca2 + 没有依赖性。     

白腐乳中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定

从白腐乳中分离到1株杆菌LX,经生理生化和16S rDNA分子生物技术鉴定,该菌株被鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus).采用BCET-RPLA试剂盒对菌株培养液进行了肠毒素检测,结果表明厌氧培养时产肠毒素检测为阴性,而好氧培养时菌株产肠毒素检测为弱阳性.研究表明在白腐乳的生产与保藏中,应注意蜡状芽孢杆菌的存在及其对食用安全性的影响.     

菌株F21来源α-淀粉酶的酶学性质研究

该研究对菌株F21所产的α-淀粉酶进行纯化和酶学性质研究。 通过硫酸铵盐析、疏水层析等方法纯化后,α-淀粉酶酶活达到 4 616.3 U/mL。 酶学性质研究表明,该酶最适pH值为4.8,最适温度为55 ℃,且酶在pH 4.0～9.0及低于45 ℃的条件下稳定性较高;Ca2+ 对酶活有较强激活作用,Fe2+及Fe3+对酶活有较强的抑制作用。     

蜡状芽孢杆菌CZ磷酸甘露糖异构酶基因的克隆表达及酶学性质研究

将蜡状芽孢杆菌CZ中的磷酸甘露糖异构酶基因（pmi）进行克隆,并在大肠杆菌中进行异源表达。将PCR扩增得到的pmi基因与p ET-22b（+）表达载体进行连接,转入大肠杆菌BL21（DE3）中,构建重组菌株BL21-p ET22b（+）-pmi,并成功表达了重组磷酸甘露糖异构酶。结果显示:克隆得到pmi基因序列全长为948 bp,编码315个氨基酸。通过镍柱His Trap HP亲和层析法纯化得到具有活性的重组酶,其蛋白分子大小约为40.8 ku。酶学性质结果显示:该酶的最适反应温度为35℃,在30⁴0℃酶活力相对稳定;最适p H为7.0,在弱碱性条件下保存12 h后仍存有50%以上酶活力;不同低浓度的金属离子Ni²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺均对该酶表现出不同程度的激活作用,其中Mn²⁺对该酶激活作用最显著,当其浓度为1 mmol/L时,激活作用最大,而Co²⁺对其有明显的抑制作用。      

脂环酸芽孢杆菌α-葡萄糖苷酶固定化及酶学性质研究

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体,优化脂环酸芽孢杆菌α-葡萄糖苷酶的固定化条件,探讨固定化对酶性质的影响。结果表明:当戊二醛浓度0.2mol/L、戊二醛交联时间12h、交联pH7.5和交联温度15℃时,酶的固定化效果最佳。此时,固定化酶的最适pH4.5,最适反应温度55℃,在pH4.5～8.0范围酶的活性不受损失。当温度为65℃时,固定化酶的活力接近100%。酶储存3周以上,可以保持80%以上的活力。重复使用6次后,酶活保持在80%左右,说明固定化酶优化了游离酶的部分酶学性质,具有一定的应用价值。     

Bacillus subtilis UN13产α-淀粉酶酶学性质研究

对Bacillus subtilis UN13所产生的α-淀粉酶酶学性质进行初步研究.结果表明:该酶是一种中温酸性α-淀粉酶;其最适温度为50 ℃,在40～60 ℃范围内稳定性较好;最适pH为5.5,在pH值为5.0～7.5范围内较稳定;Ca2+和Mn2+对该酶有激活作用, Cu2+,Zn2+,K+和EDTA 则抑制该酶的活性;动力学研究表明该酶的Km值为1.7039 mg/mL,Vmax值为3.1615 mg/min·mL.     

高温α-淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从酒厂高温曲中筛选到一株产高温α-淀粉酶的野生茼株，经初步鉴定为链霉菌，命名为Streptomycessp．1109。在45℃条件下，该茵株固体发酵产酶活力达到169．13u／g。通过酶学性质研究，该酶反应最适温度为85℃，最适pH为6．5，具有较高的热稳定性。     

产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定

从土壤中分离筛选出产淀粉酶的菌株,经淀粉培养基初筛后,采用DNS法对发酵提取的粗酶液进行总酶活和α-淀粉酶活力的测定,通过形态观察和生理生化反应对筛出的菌株进行鉴定。结果表明:分离到4株产淀粉酶芽孢杆菌,测得其透明圈直径与菌落直径比值在1.7~3.5之间,其中有2株菌株产淀粉酶能力较高,总酶活达到19.760 U/mL和15.432 U/mL;4株芽孢杆菌所产α-淀粉酶酶活在6.4 U/mL~10.4 U/mL之间。经鉴定,1株为枯草芽孢杆菌,3株为蜡样芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的产淀粉酶能力优于蜡样芽孢杆菌。     

产β-内酰胺酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

该文对上海临港地区分离的1株产β-内酰胺酶的菌株的酶学性质进行研究,并初步提高了酶液保存稳定性。通过结合抗生素平板法初筛和碘量法(定性)复筛,获得产β-内酰胺酶的菌株。通过形态学、生理生化试验和16S rRNA序列分析确定该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),命名为Bacillus cereus B03。酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0,该酶在4～20℃、pH 5.0～7.5内稳定性较好。Mg~(2+)、Fe~(2+)和Mn~(2+)对酶有不同程度的激活作用,其中Mg~(2+)对酶的激活作用最强。Cu~(2+)、Al~(3+)和Fe~(3+)对酶有不同程度的抑制作用,其中Al~(3+)对酶的抑制作用最强。K~+、Ca~(2+)、Zn~(2+)对酶活力的影响作用不是很大。在无菌粗酶液中添加50 g/L NaCl或100 g/L甘油后,由原酶液的保存5 d剩余相对酶活力93%左右延长到了30 d,稳定性效果提升了6倍。菌株B03所产β-内酰胺酶的酶学性质初步研究表明,该酶具有进一步研究和应用的价值。     

中温α-淀粉酶高产菌株的选育及其粗酶性质

以从自然界中筛选的野生芽孢杆菌XLG-1为出发菌株,通过紫外线诱变及紫外线-氯化锂复合诱变筛选出高产中温α-淀粉酶的优异菌株XLG-51,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。初步研究了其所产的α-淀粉酶的酶学性质:通过SDS-starch-PAGE电泳与酶谱分析得该酶分子质量为60 ku左右,最适作用温度为60℃,最适作用pH范围为5.0～6.5,且在最适条件下具有较强的稳定性。以该菌株为生产菌进行5 L罐发酵实验,产酶达5298 U/mL。