烫伤大鼠腹腔巨噬细胞释放细胞因子作用的研究

研究严重烫伤大鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α、IL-1β、IL-10等细胞因子的作用。通过建立烫伤动物模型，使用ELISA检测烫伤大鼠血浆TNF-α、IL-1β、IL-10的水平；收集烫伤大鼠及未烫伤大鼠的腹腔巨噬细胞，分别加入LPS（脂多糖）、LPS＋DEX（地塞米松）共孵育；使用ELISA检测上清液中TNFα、IL-1β、IL-10的水平，比较两组大鼠间的差异。烫伤大鼠血浆出现高水平的TNFα、IL-1β、IL-10；接受LPS刺激后，烫伤大鼠腹腔巨噬细胞分泌的TNF-α、IL-1β和IL-10的水平明显高于对照组。DEX对烫伤组大鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的抑制减少量显著低于对照组。由研究可知严重烫伤大鼠腹腔巨噬细胞释放的细胞因子与高细胞因子血症形成密切相关；烫伤可抑制巨噬细胞对DEX的反应性。     

色氨酸酶在大肠杆菌周质中的分泌融合表达

按照大肠杆菌偏爱密码子合成编码“BspTI位点一连接肽（Gly—Ser—Gly—Ser—Gly一6His—Tag—Ek—site（Asp—Asp—Asp-Asp—Lys）”序列的DNA序列,利用重叠延伸拼接技术,将其与色氨酸酶基因TnaA拼接,利用BspTI和HindⅢ重组至pET-39二硫键形成蛋白DsbA基因的下游,转化表达宿主EscherichiacoliBL21（DE3）,成功构建分泌融合表达型色氨酸酶基因工程菌．通过摇瓶培养实验研究了诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间对色氨酸酶活性的影响．工程菌以舍2％甘油的LB为培养基,A600=0．5时,加入终浓度为0．05mmol／L的Isopropyl伊D-1-thiogalactopyranoside（IPTG）,30℃诱导培养8h,可在周质空间中表达高活性的色氨酸酶融合蛋白．在培养基中添加0．5％的甘氨酸,酶活可提高6．3倍．本实验首次实现了色氨酸酶基因的周质分泌融合表达．     

金克诱导肿瘤细胞凋亡的细胞周期特异性定性

体外培养的Molt-4细胞与不同浓度的金克孵育，通过Sub—G1法和PA法分析细胞凋亡率及细胞凋亡的周期时相性。发现浓度为1．5g／L的金克诱导G1期Molt-4细胞18h后细胞发生明显凋亡，36h后凋亡达到最高峰。金克诱导肿瘤细胞凋亡的周期时相性的阐明有助于揭示金克的抗肿瘤机制。     

突变型P53特异性活化T细胞的诱导与扩增

采用多种细胞因子诱导外周血单核细胞分化为成熟的树突状细胞（DC,Dentritic Cell）,将成熟DC与初始T细胞共培养,并连续加入DC刺激从而避免活化的T细胞凋亡。将活化的T细胞转入包被有CD3和CD28抗体的板中,使活化T细胞进一步大量扩增。流式检测多因子诱导后DC表型发现,高表达CD83、CD11c、CD11b、CD80、CD86、CCR7、CD54,低表达CD14、CD3、CD33,说明因子成功诱导单核细胞为成熟DC。流式检测扩增的活化T细胞发现高表达CD3、CD8,含有很低量的调节性T细胞（Treg）,分泌大量的IFN-γ,表明扩增出的细胞中活化T的含量很高,为临床研究提供参考。     

松江鲈鳍细胞体外培养的实验研究

利用胰蛋白酶消化法成功启动了松江鲈鳍细胞的原代培养,并通过利用不同培养基、培养温度、pH值对松江鲈鳍细胞进行体外培养实验。实验结果显示：含20%FBS的DMEM/F12（pH=7.2）是松江鲈鳍细胞体外培养的最适培养基,鳍细胞的最适培养温度为24℃。     

松江鲈鳍细胞体外培养的实验研究

利用胰蛋白酶消化法成功启动了松江鲈鳍细胞的原代培养,并通过利用不同培养基、培养温度、pH值对松江鲈鳍细胞进行体外培养实验。实验结果显示：含20%FBS的DMEM/F12（pH=7.2）是松江鲈鳍细胞体外培养的最适培养基,鳍细胞的最适培养温度为24℃。     

羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病K562细胞凋亡

观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞K562的作用效果,并探讨其机制。不同浓度羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞K562后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数（CI）,流式细胞仪（FCM）检测K562细胞凋亡率,吖啶橙（AO）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的IC50分别是8μ/mL和12．5μg/mL,联合应用时IC50下降为4μg/mL（HCPT）和3．6μg/mL（MMC）,CI=0．78,为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡。协同抑制人白血病细胞生长。     

提高西洋参细胞生长和皂甙生产的几种方法研究

以三年生西洋参根为材料进行了愈伤组织的诱导和细胞株系的筛选；同时探讨了不同培养基、不同碳源、不同添加物以及不同钙离子浓度对西洋参细胞生长和总皂甙生产的影响，试验结果发现：MS培养基有利于西洋参细胞的生长，而皂甙含量的B6培养基的培养结果为最佳，用白糖替代蔗糖（AR），可促进细胞生长及提高皂甙的产量，在MS培养基中添加2g/L酵母提取物时，细胞生长速率显著提高,细胞生长的最佳Ca^2 浓度为4.49mmol／L,而皂甙生产的最佳Ca^2 浓度为0.90mmol/L。     

半夏凝集素的分离纯化及其对HeLa细胞生长的影响

利用甘露糖-Sepharose4B亲和柱从半夏总蛋白中分离纯化得到一种12kD的半夏凝集素,经质谱分析明确其为半夏凝集素单体。将该12kD凝集素单体作用于体外培养的HeLa细胞,MTT法检测细胞活性并用倒置相差显微镜观察凝集素对HeLa细胞生长状态的影响。结果显示：低浓度（O．004、0．02、0．1mg／mL）半夏凝集素具有一定促进HeLa细胞增殖的作用;高浓度（0．5、1mg／mL）半夏凝集素有一定抑制Hela细胞增殖的作用。     

高碳水化合物条件下鼠肌GLUT4表达与CaMK／HDAC5关系的研究

观察Caffeine诱导骨骼肌细胞GLUT4表达的潜在分子调控机制是否是Caffeine—Ca2＋-CaMKII—HDAC5信号通路。8周龄雄性Wistar大鼠42只,随机分为高碳Caffeine组（HGC）、高碳KN62组（HGK）、低碳Caffeine组（LGC）和低碳KN62组（LGK）,每组12只。分别给予不同饮食加Caffeine或KN62刺激。检测caMKⅡ（Thr286）位点、HDAC5（sel498）位点和HDAC5（Ser259）位点磷酸化水平以及GLUT4蛋白表达水平。与HGc组相比LGC组GLUT4蛋白表达、CaMKⅡ（Thr286）、HDAC5（Se-98）HDAC5（Ser259）磷酸化水平都显著增加性高于HGC组和LGK组。无论是在低碳还是在高碳浓度下骨骼肌细胞GLUT4蛋白表达变化都对应着上游caMKⅡ蛋白位点（Thr286）磷酸化水平和下游HDAC5蛋白位点（Ser498）和（Ser259）磷酸化的变化,所以CaMKⅡ调节GLUT4表达的机制至少涉及到CaMKⅡ征用转录抑制子HDAC5。     

Promoting effect of IFN-g on the expression of LPS-induced IL-12 p40 and p35 mRNA in murine suppressor macrophages

We detected the expression of IL-12 p40/p35 mRNA by semi-quantitative RT-PCR and silver staining, and studied the molecular interaction between the IL-12 expression and the NF-κB activation induced by LPS and IFN-γ/LPS in murine peritoneal suppressor macrophages (MPSMs). It was found that IFN-g strongly enhanced the LPS-induced IL-12 p40 and p35 mRNA expression. Both p40 and p35 mRNA levels were approximately equal. IFN-γ also greatly promoted the LPS-induced secretion of IL-12 p70 in MPSMs. The Proteasome Inhibitor I (PSI) could block the expres-sion of IL-12 p40 and p35 mRNA, and the degradation of IkBa induced by LPS or LPS/IFN-γ. EM-SA showed that LPS could augment the NF-κB binding activity to p40 promoter DNA. However, IFN-γ could neither enhance the LPS-induced NF-κB activity nor promote the degradation of IkBa. Taken together, the data suggest: (i) IFN-γ/LPS could strongly induce the expression of IL-12 p40 and p35 mRNA; both the expression levels were equal; this phenomenon coincided with the high-level secretion of IL-12 p70 induced by IFN-γ/LPS; (ii) NF-kB signal pathway is essential for IFN-γ/LPS to induce IL-12 mRNA expression; (iii) by blocking the degradation of IkB, the PSI sup-presses the IL-12 p40/p35 mRNA expression induced by LPS and IFN-γ/LPS; (iv) NF-κB signal may not be involved in the mechanism by which IFN-γ enhanced the expression of the LPS-induced IL-12 p40/p35 mRNA.     

紫茄地上部分化学成分研究

研究紫茄地上部分的化学成分。采用硅胶柱色谱及HPLC等色谱技术进行分离,通过理化性质和波谱数据分析鉴定化合物的结构。从紫茄地上部分的石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物中分离得到16个单体化合物,分别鉴定为：β-谷甾醇（1）、二十四烷酸（2）、十六烷酸单甘油酯（3）、十八烷酸单甘油酯（4）、亚油酸单甘油酯（5）、二十二烷酸单甘油酯（6）、胡萝卜苷（7）、反式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（8）、反式对羟基桂皮酸酰对羟基苯乙胺（9）、东莨菪素（io）、N-p-coumaroyl octopamine（11）、N-trans-sinapoyhyramine（12）、N-trans-feruloyl-3-methoxytyramine（13）、（＋）-丁香脂素（14）、滨蒿内酯（15）、对香豆酸对羟基苯乙醇酯（16）。化合物扣6,15,16均为首次从该植物中分离得到。     

东紫苏的化学成分研究

从东紫苏（Elsholtiza bodinieri Vaniot）的75％丙酮水提取物中共分离得到12个化合物,根据理化性质和光谱数据分别鉴定为Massonianoside B（1）、Icariside E4（2）、1R,2R,4R-三羟基薄荷烷（1R,2R,4R-trihydroxy-menthane,3）、迷迭香酸（Rosmarinic acid,4）、迷迭香酸甲酯（Rosmarinic acid methyl ester,5）、迷迭香酸乙酯（Rosmarinic acid ethyl ester,6）、Nepetoidin B （7）、咖啡酸（Caffeic acid,8）、咖啡酸甲酯（Methyl caffeate,9）、Oresbinsin A（10）、原儿茶醛（Protocatechualdehyde,11）和3,4-二羟基-5-甲氧基苯甲醛（3,4-dihydroxy-5-methoxy-benzaldehyd,12）.其中化合物1-3和5-12为首次从该属植物中分离得到.     

Enhanced immunostimulatory properties in CpG-oligonucleotides modified by gold nanoparticles

Whether the immunostimulatory effects of CpG-oligonucleotides (CpG ODNs) could be enhanced by the use of gold nanoparticles (Au-NP) was investigated. The CpG ODNs were modified by the Au-NP (CpG / Au-NP) and their uptake and distribution in murine N9 microglial cells were studied. The immunostimulatory effects of CpG / Au-NP on N9 cells, human B cells and plamacytoid dendritic cells (pDCs) were examined. Results showed that the uptake of CpG / Au-NP in N9 cells was much higher than that of CpG ODNs and CpG / Au-NP localized in the cytoplasm of N9 cells. The amount of TNF-α and IL12p40 in N9 cells was increased greatly by the use of Au-NP. And the amount of IL-6 in B cells and IFN-α in pDCs was also significantly increased, while the activation of B cells was not changed. These results reveal that the Au-NP can be used as a delivery media for the oligonucleotides-based therapeutics.     

北野豌豆及其近缘种基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

采用改进的CTAB法,成功提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,成功建立了RAPD稳定的反应体系：总体积10μL,包括10ng的DNA,1×的反应缓冲液,1．5mmol·L^-1MgCl2,0．2μmol·L^-1引物,0．2mmol·L^-1dNTP混合物和1．0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为：先在92℃下变性3min,然后在92℃下变性1min、40℃下复性1min、72℃下延伸2min反应45个循环,最后72℃延伸10min。     

2-[1-（2-吡啶）乙氧基]乙酰胺衍生物的合成及其对小鼠学习记忆的促进作用

为探讨2-[1-（2-吡啶）乙氧基]乙酰胺衍生物对小鼠学习记忆能力的影响,使用2-乙基吡啶为起始原料,经Whol-ziegler反应得到2-（1-溴乙基）吡啶（2）,再与羟基乙酸乙酯的醇钠盐缩合得到2-[1-（2-吡啶）乙氧基]乙酸乙酯（3）;化合物3经氨解得到其酰胺（4-9）;化合物3在碱性条件下经水解,得到2-[1-（2-吡啶）乙氧基]乙酸（10）;化合物10经氯化亚砜处理后分别与取代苯胺反应,得到2-[1-（2-吡啶）乙氧基]乙酰胺类化合物（12-13）.实验设计合成的化合物中,其中8个是未见文献报道的新化合物,其结构经核磁共振谱、红外光谱等确证.药理实验表明采用通道式水迷宫法测定化合物的促小鼠学习记忆活性时,化合物8具有良好的促小鼠学习记忆作用.     

工业磷肥副产氟硅酸合成硅铝MCM-41介孔分子筛的研究

以工业副产氟硅酸为硅源,九水合硝酸铝（Al（NO₃）3·9（H2O））为铝源,十六烷基三甲基溴化铵 （CTAB）为模板剂,在溶胶混合物的组成为:n（SiO2）∶n［Al（NO₃）3·9（H₂O）］∶n（NH₃·H₂O）∶n（CTAB）= 1∶0.01-0.10∶10∶0.25-1.00∶150（摩尔比）的条件下,水热合成含铝硅基介孔分子筛Si/Al-MCM-41. 对水热合成过程中的Si/Al比,模板剂的用量,水热温度和时间等条件以及模板剂的脱除方式对分子筛结构的影响进行了研究. 并通过X射线荧光光谱仪,氮气吸脱附,透射电镜,热重分析等对样品进行表征. 结果表明:在合成条件为: n（CTAB）/n（Si）=2,水热温度70 ℃,时间5 h得到的样品的比表面积和孔体积较大,分别为1 086 m2/g和0.70 cm3/g.     

硫酸铝浸渍活性氧化铝球吸附饮水中的高浓度氟

硫酸铝浸渍活性氧化铝球（AIAA）是饮水除氟领域常用的吸附剂,它对氟的吸附性能受各种因素的影响。静态吸附通过改变AIAA质量与氟溶液体积比（m（AIAA）：V）（2～40 g.L-1）、氟的质量浓度（ρ（F））（2～100 mg.L-1）、pH值（4～10）、温度（11～33℃）和时间等实验参数,研究这些因素对AIAA吸附除氟的影响。在11～33℃的温度范围内、pH值变化为4～10之间时,当m（AIAA）：V为20 g.L-1,3 h内处理ρ（F）为10 mg.L-1水溶液其氟的去除率可达90%以上,足以保证其满足饮用水的含氟标准。利用Langmuir和Freundlich模型对吸附数据进行了拟合研究,结果表明：在ρ（F）为2～100 mg.L-1、pH=5～10、温度11～33℃范围内,Langmuir线性拟合模型是最优拟合方式;而当溶液氟质量浓度为2～1 000 mg.L-1或2～100 mg.L-1且pH为4时,Freundlich非线性拟合模型是最优拟合方式。AIAA吸附容量随溶液氟质量浓度升高、pH降低及温度升高逐渐增加。     

翼茎羊耳菊三萜类化学成分研究

研究翼茎羊耳菊(Inula pterocaula)根部三萜类化学成分,阐明其药效物质基础.采用Sephadex LH-20凝胶材料、Rp-18反向材料和硅胶进行化合物分离,利用现代光谱技术和理化性质鉴定化合物结构.并从中分离得到12个三萜类化学成分,分别鉴定为β-香树脂醇(1)、赤藓糖醇(2)、乌苏酸(3)、齐墩果酸(4)、2β,3β,23α-三羟基-28-齐墩果酸(5)、齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、齐墩果酸-3-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、2β-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-23,28-二齐墩果酸(9)、3-O-β-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖醛基-23-羟基-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖-19α-羟基-乌苏酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11),3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-20,19,24-三羟基乌苏酸(12).以上化合物为首次从该植物中得到.该研究结果可为翼茎羊耳菊的进一步研究提供依据.     

苯代谢物氢醌对人体肝细胞内DNA甲基转移酶基因和蛋白表达的影响

苯是一种具有致癌效应的环境污染物,氢醌（Hydroquinone,HQ）作为重要的苯代谢物,其介导的毒性可能是苯致癌的原因之一.越来越多的证据表明,DNA甲基化异常是致癌物质发挥毒作用的一种主要途径,HQ可以诱导人体肝细胞DNA甲基化水平改变,但其作用机制尚不清楚.为探索HQ诱导DNA甲基化改变的主要因素,本文应用RT-PCR和Western blotting技术,研究不同浓度HQ（0、5、10、25和50 μM）染毒暴露对L02肝细胞内DNA甲基化转移酶（DNMT1,DNMT3a和DNMT 3b）基因和蛋白表达的影响.实验结果表明,HQ可诱导三种酶的基因表达不同程度升高,高剂量组（≥10 μM）与对照组相比差异具有统计学意义（P ＜0.05）;0～50 μM范围内HQ可诱导DNMT1和DNMT 3b的蛋白表达呈浓度依赖性增高,25和50 μM实验组与对照组相比差异显著（P＜0.05）.这些结果表明HQ的暴露可引起L02细胞内DNA甲基化转移酶的基因和蛋白表达升高,这可能导致一些目的基因DNA甲基化发生异常,本实验从表观遗传学角度暗示了HQ影响人体早期健康的机制.