二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

二烯丙基二硫抑制HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达调控

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达的影响。方法采用MTT和细胞记数法分析DADS对细胞生长的影响、蛋白印迹法检测细胞内c-myc蛋白表达水平。结果 DADS能抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05),DADS(20μmol/L)作用12 h后能下调c-myc蛋白的表达水平。结论 DADS抑制HL-60细胞增殖,其机制可能与下调c-myc表达水平密切相关。     

体外RNA干扰下调DEPTOR表达对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响

目的:研究探讨应用RNA干扰技术构建人DEPTOR基因的shRNA慢病毒载体,鉴定在多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞上的沉默效果,并评价DEPTOR对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法:设计4个DEPTOR siRNA序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的hU6-MCS-CMV-EGFP(GV115)-shRNA慢病毒载体。重组质粒经PCR测序鉴定后,脂质体介导下转染293T细胞,Western blot检测DEPTOR的表达,筛选出干扰效果最佳的GV115-shRNA。将筛选的GV115-shRNA与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。将病毒颗粒感染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平及Western blot方法从蛋白水平检测DEPTOR的沉默效果。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测骨髓瘤细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot分析cleaved caspase-3和cleaved PARP的变化。结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,成功筛选出最有效抑制DEPTOR表达的shRNA2序列,包装病毒后滴度达到1×109TU/ml。慢病毒感染RPMI-8226细胞后可表达EGFP,Real-time PCR和Western blot检测DEPTOR的表达明显下降。下调DEPTOR基因可显著减慢骨髓瘤细胞的生长速度(P<0.05),肿瘤细胞的凋亡率上升(P<0.01)。DEPTOR shRNA上调cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达,下调Bcl-2及PI3K/Akt信号通路的表达(P<0.01)。结论:成功构建了DEPTOR shRNA重组慢病毒载体,其转染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞后显著抑制了DEPTOR的表达。DEPTOR shRNA可以有效地诱导骨髓瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖。PI3K/Akt信号通路可能参与了其凋亡过程。     

基于PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨非小细胞肺癌Treg细胞上调的分子机制

目的:通过观察肺癌患者Treg细胞PTEN-PI3K-AKT信号通路分子的表达变化,探讨肺癌患者Treg细胞上调的作用机制。方法:选择30例非小细胞肺癌为研究组,30例健康人作为对照组,采用流式细胞术检测各组人群外周血Treg细胞表达变化;运用免疫磁珠法分选外周血单个核细胞中Treg细胞,Western-blot、Real-time PCR技术检测Treg细胞PI3K、AKT、PTEN蛋白及PTEN mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA的表达情况。结果:研究组外周血Treg细胞占CD+4T细胞的比例(Treg/CD4=4.53%±1.85%)明显高于对照组(Treg/CD4=1.87%±0.93%),差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,研究组PI3K、AKT蛋白表达明显升高,PTEN表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,研究组PI3K mRNA、AKT mRNA表达明显升高,PTEN mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺癌患者外周血Treg细胞水平明显升高,其机制可能与PTEN表达下调进而激活PI3K-AKT信号通路相关。     

miR-26a通过调节MTDH基因表达抑制CAOV3细胞系生长

目的检测miR-26a在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-26a调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法运用qRT-PCR检测52例卵巢癌及相应癌旁组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a mimics转染卵巢癌细胞CAOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对CAOV3细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在52例卵巢癌组织中表达下调;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制人CAOV3细胞的生长(P<0.05)。结论 miR-26a通过调节MTDH基因的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

姜黄素抑制膀胱癌T24细胞增殖及Hsp90α的表达

目的探讨姜黄素对膀胱癌T24细胞增殖以及热休克蛋白90α(Hsp90α)表达的影响。方法培养T24细胞株,分别用不同浓度姜黄素(0,5,10,15,20μmol/L)处理细胞24小时和20μmol/L姜黄素分别处理细胞不同时间(0,6,12,24,48小时),采用四唑盐(MTT)比色法,检测T24细胞的生长抑制率,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测Hsp90α基因mRNA的表达,以蛋白免疫印迹法(Western blotting),检测Hsp90α蛋白质的表达。结果姜黄素处理后的T24细胞代谢MTT能力降低,细胞生长抑制率明显增加;细胞Hsp90α基因mRNA和蛋白质的表达均下调,并且这些效应呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论姜黄素可能通过调控Hsp90α的表达而抑制T24细胞的增殖。     

PTEN/NF-κB/Caspase信号通路对K562/ADM细胞阿霉素耐药逆转机制的研究

目的:探讨PTEN/Akt/NF-κB信号通路对阿霉素耐药慢性粒细胞白血病细胞系K562/ADM细胞耐药逆转的分子作用机制。方法:将携带有野生型PTEN基因及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)或空载体(Ad-GFP)腺病毒转染K562/ADM细胞,在转染3d内联合应用不同浓度阿霉素(ADM),观察PTEN基因对阿霉素的协同抑制作用,根据IC50计算药物逆转倍数。通过MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测转染效率、细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、NF-κB、I-κB、P53基因水平变化,Western blot检测PTEN、Akt、p-Akt、P65蛋白质水平变化。结果:Ad-PTEN-GFP转染与阿霉素联合作用后,K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性增加,细胞增殖明显受抑,凋亡率明显高于Ad-GFP与阿霉素联合作用组,耐药逆转倍数为3.8倍。与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP转染K562/ADM细胞3d后PTEN蛋白表达明显增加,p-Akt与P65蛋白表达明显下调,NF-κB mRNA表达水平下调,I-κB mRNA无明显改变,P53 mRNA表达轻度升高、Caspase-3/7活性增强。PTEN mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平负相关(r=-0.968,P<0.05),NF-κB蛋白活性与Caspase-3/7活性负相关(r=-0.986,P<0.05)。结论:野生型PTEN可能通过抑制PI3K/NF-κB/Caspase信号传导通路,逆转K562/ADM细胞的多药耐药。     

GRIM-19表达对子宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的:通过体内和体外实验探讨GRIM-19表达对子宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法:采用脂质体转染法将GRIM-19重组质粒转染HeLa细胞,建立稳定表达GRIM-19的细胞株;采用RT-PCR和Western印迹法检测HeLa细胞转染GRIM19重组质粒前后GRIM-19 mRNA和蛋白水平的表达情况;应用MTT法检测各组细胞增殖水平,并将HeLa/con、HeLa/GRIM-19细胞接种到裸鼠皮下以检测荷瘤情况;同时对移植瘤检测其GRIM-19 mRNA及其下游STAT3 mRNA的表达水平.结果:建立稳定表达GRIM-19基因的HeLa/GRIM-19细胞株.RT-PCR结果显示GRIM-19基因在HeLa/GRIM-19细胞中mRHA表达明显增加,Western 印迹法检测同样发现GRIM-19蛋白的表达显著升高,而STAT3的表达明显受到抑制.MTT检测结果显示HeLa/ GRIM-19细胞增殖较HeLa/con明显减慢(P<0.05),其接种后肿瘤生长速度亦明显减慢(P<0.01).移植瘤的RT-PCR结果表明GRIM-19表达升高、STAT3表达降低.结论:GRIM-19的表达可以抑制子宫颈癌细胞的增殖,可能作为子宫颈癌治疗的一个新靶点.     

黄芪多糖对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对人骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响。方法采用密度梯度离心法分离人MSC,分别采用四氮唑兰盐(MTT)法、细胞流式术检测不同浓度APS对MSC的细胞增殖、细胞周期的影响,RT-Real Time PCR测定不同浓度APS对MSC表达干细胞生长因子(SCF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平的影响。结果成功分离得到MSC,不同质量浓度APS可促进MSC增殖(P<0.05),其中1 mg/mL APS的作用最为明显。对照组MSC基本都处于静止期,不同质量浓度APS处理的MSC处于S期及G2/M期细胞比例较对照组明显增高(P<0.05),且APS可显著上调MSC对SCF,VEGF mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪多糖可促进人骨髓间充质干细胞增殖,并显著上调SCF,VEGFmRNA的表达。     

人脑胶质瘤干细胞增殖中NOTCH信号的调控作用

目的:探讨人脑胶质瘤干细胞增殖中NOTCH信号的调控作用。方法:采用免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞株中提取、分离人脑胶质瘤干细胞,对细胞进行体外培养,采用荧光定量PCR、免疫组化等方法检测相关指标,观察人脑胶质瘤干细胞增殖中NOTCH信号通路的调控作用。结果:正常脑组织的NOTCH-1蛋白累积光密度值为(294.9±29.5),低度及高度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白累积光密度值分别为(5046.0±120.9)和(11 026.2±169.1)。低度及高度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白表达水平较正常脑组织患者明显提高,且高度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白表达水平较低度恶性胶质瘤患者明显提高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在CD133+胶质瘤细胞中,NOTCH-1、HES-1及CBF-1基因的表达水平较CD133-胶质瘤细胞明显提高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NOTCH-1基因在人脑胶质瘤中呈高水平表达;在人胶质瘤干细胞增殖过程中,NOTCH-1、CBF-1和HES-1等关键基因呈高表达,NOTCH信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖过程中起着重要调控作用,值得深入研究。     

CYFRA21-1、CEA、NSE和CA125联合检测在非小细胞肺癌中的诊断价值

目的:探讨细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原125(CA125)联合检测在非小细胞肺癌(NSCLC)中的诊断价值。方法:选取2010年1月-2015年6月本院收治的NSCLC患者92例和肺部良性病变患者95例作为研究对象,92例NSCLC患者根据病理类型的不同分为肺鳞癌组42例和肺腺癌组50例。采用电化学发光法测定所有患者的CYFRA21-1、CEA、NSE及CA125水平。结果:NSCLC组CYFRA21-1、CEA、NSE及CA125均明显高于肺部良性病变组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肺鳞癌以CYFRA21-1敏感性和特异性最高,分别为71.40%和89.10%;肺腺癌以CEA敏感性及特异性最高,分别为60.00%和84.30%。CYFRA21-1对NSCLC诊断的敏感性为46.53%,特异性为85.26%;CEA对NSCLC诊断的敏感性为42.58%,特异性为81.05%;NSE对NSCLC诊断的敏感性为57.43%,特异性为76.85%;CA125对NSCLC诊断的敏感性为48.51%,特异性为66.32%;四项指标联合检测则敏感性为93.26%,特异性为98.25%。结论:CYFRA21-1、CEA、CA125和NSE对NSCLC的早期发现、早期诊断具有一定价值,四者联合检测有明显的互补性,可以显著提高NSCLC的诊断率。     

西药药剂的合理应用及管理

目的:浅析西药药剂的合理应用以及管理措施。方法:选择本院药剂科2012年1月-2013年2月100张西药药剂处方做为研究对象。根据处方应用中出现的问题给予相应的西药药剂管理措施,然后考核。再于2013年3月-2014年4月抽取100张西药药剂处方,比较分析经过管理及应用后的实际用药情况。结果:给予合理管理应用前临床合理用药率为70%,经过合理的管理应用后临床合理用药率为93%,考核后的临床合理用药率明显优于考核前,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:对西药药剂进行合理的应用管理后,可以明显提高临床合理用药率。     

《中国药典》治疗跌打损伤中药及中成药组方规律分析

目的:基于中医传承辅助平台软件(V2.5)和Excel软件,归纳分析《中国药典》(2015版)中以中医药治疗跌打损伤的组方规律。方法:统计《中国药典》(2015版)中具有治疗跌打损伤的单味中药和中成药,筛选并建立方剂数据库,运用中医传承辅助平台软件和Excel软件挖掘其中的用药规律。结果:筛选治疗跌打损伤中成药方剂29首,涉及中药149种。方中活血化瘀、消肿止痛药物出现频次最高,其中乳香-没药为出现频次最高的药物组合,占总方剂的51.7%。进而得到核心组合3个,新处方3首。结论:通过中医传承辅助平台和Excel软件对《中国药典》(2015版)数据库筛选出的治疗跌打损伤的单味中药以及中成药组方进行分析,得出组方以活血化瘀、消肿止痛为主,进而揭示其组方规律,为临床治疗提供理论基础。     

发挥中西医优势治疗肺癌

近年来,肺癌的发病率和死亡率逐年上升,已居各种恶性肿瘤之首,是严重危害人类健康的重大疾病之一。近半个世纪以来,肺癌诊疗方法有了长足的发展,疗效也不断提高,但远未达到基本控制该病的目标。中医药参与下的肺癌综合治疗是我国恶性肿瘤治疗的特色之一,大量研究表明,将中医和西医的理论、治疗方法有机结合起来,互相取长补短,充分发挥两者之长,在提高中晚期肺癌疗效、延长患者生存期及维护和改善生存质量方面,可取得比单纯中医或西医治疗更佳的疗效,使"带瘤生存"成为可能。     

小学高年级学生记叙文习作升格化修改初探

小学高年级习作教学在语文教学中占有重要地位。结合记叙文升格化修改的教学实践案例,总结得出"中心、选材、立意、详略、语句、感情标点"六个主要要素和"习作展示—师生会诊—对症下药—升格提升"四个基本操作步骤,并就记叙文升格化修改的评价与效果作了统计分析,旨在让学生在习作的升格化修改中学会习作,在自我修改和相互修改的过程中切实提高自己的习作能力。     

红外热成像与中医

利用红外热成像技术观察舌像、脉像、手像、耳像、面像等局部热成像表现,观察这些局部热成像与全身证候的关系,并联合利用其他结构性成像检查同时进行观察,另外还可以配合红外热断层和红外热层析的开发研究进行临床观察。这样,就有可能得到在生理状态下全身脏腑组织功能活动代谢热的立体红外热成像,通过这样的成像就可以观察脏腑组织之间是如何协调统一的。从而得到在病理状态下病变脏腑组织异常活动代谢热的立体红外热成像,通过这样的成像就可以观察脏腑组织之间的协调统一是如何遭到破坏的,以及活动异常的脏腑组织功能是如何通过治疗重新达到协调统一的。从而促进中医基本理论水平的提高,促进临床辨证施治水平的提高。     

中西医治疗卵巢早衰的研究进展

卵巢早衰(POF)指女性40岁以前发生的排卵和卵巢分泌激素功能的停止,低雌激素(E_2<25pg/mL)和高卵泡刺激素(FSH>40 IU/L)、黄体生成素(LH>30 IU/L)的状态,诊断以至少半年或以上闭经多次发生为标准。POF是妇科内分泌领域的常见病。由于POF病因多且确切发病机制尚不明确,因此治疗上分歧众多,还没有明确有效的、针对恢复卵巢自然功能的治疗措施。本文从中西医两种角度对卵巢早衰的治疗效果进行综述,旨在为卵巢早衰的临床治疗提供参考。     

木香在中医药与民族医药中的临床应用比较

木香是传统中药和民族药。尽管在中药和民族药中,来源相同,药用部位,性状鉴别特征及产地分布也一致,但由于医学理论体系的不同,在对木香的性味、主治功效的认识上和临床应用及用法用量上既有相通之处又有各自的特点。本文从药性、功效主治、临床应用、用法用量等方面,比较木香在中医药及藏医药、蒙医药、傣医药和维医药中的异同,并列举一些现代研究进展,以期各医药体系能在保持各自特色的基础上,相互借鉴,拓宽木香的临床应用,并为开展现代研究提供参考。     

初中政治探究式教学策略浅析

目的:观察中西医结合在宫腔镜电切术后预防宫腔粘连及提高受孕率的临床疗效。方法:对60例患者采用宫腔镜电切术,将其分为对照组与治疗组各30例。对照组术后口服雌孕激素人工周期药物治疗3个月;治疗组在对照组的基础上,服用补肾活血类中药。比较两组治疗效果。结果:治疗组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后3月宫腔粘连及月经改善情况、术后随访受孕率相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中西医结合在预防宫腔镜电切术后宫腔粘连、提高受孕率方面具有明显优势,有较好的应用前景。     

重力高阶导数的正演研究

重力勘探作为一种位场勘探方法,由于体积效应或异常叠加效应,资料的解释往往精度差,也难以深度定位。因此,资料处理解释中的一个主要工作就是进行异常分离,以便突出异常的有用信息,区分不同异常源。高阶导数作为其中一种方法,能分离叠加异常,突出浅而小的地质体。