骨髓基质细胞对放射损伤复合烧伤小鼠粒单系祖细胞…

研究骨髓基质细胞对放射损伤复合烧伤小鼠粒单系祖细胞的。结果表明：（１）基质细胞培养上清液可支持少量粒单系祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ０生长；而骨髓贴壁细胞层对ＣＦＵ－ＧＭ有明显刺激生长作用。（２）加入外源性粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）时，未见到基质细胞对粒系祖细胞生长的 影响。（３）烧伤、放射损伤、放射烧伤复合伤伤后３￣５ｄ，均见到ＣＦＵ－ＧＭ生长受抑制。损伤后仍能见到基质细胞对粒系细胞生长的刺     

放射损伤对骨髓基质细胞支持小鼠粒-巨噬系祖细胞生长的影响

为阐明放射损伤时骨髓造血基质细胞支持粒－巨噬系祖细胞造血能力的变化。采用小鼠骨髓基质细胞体外融合培养和粒－巨噬系祖细胞集落（CFU－GM）培养法,观察5Gy照射对基质细胞支持小鼠CFU－GM生长的影响。结果表明,经5Gy照射后,骨髓基质细胞支持正常粒－巨噬系祖细胞造血的能力明显下降,以伤后3－5d最为显著,伤后10d仍未恢复至正常;当骨髓基质细胞和粒－巨噬系祖细胞均受到致伤因素作用时,照射组的CFU－GM形成能力下降更为明显,至正常对照组的10％以下。说明放射损伤后骨髓基质细胞的功能受到了不同程序的损伤,因此,在治疗由此所引起造血功能障碍的同时,应加强促进基质细胞修复的措施,可能会取得更满意的疗效。     

小鼠骨髓基质祖细胞低剂量辐射效应研究

采用体外单层和半固体培养方法,研究小鼠骨髓细胞在受到０、２５、５０、７５、１００ｍＧｙ照射后,骨髓基质祖细胞的形成、特性及功能变化。结果表明：各照组组ＣＦＵ－Ｆ有不同程度增多,５０、７５ｍＧｙ组有显著意义;ＣＦＵ－Ｆ基支对粒系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ＿ＧＭ）的支持作用增加;ＣＦＵ－Ｆ基质层对骨髓细胞的粘附能力在５０、７５ｍＧｙ组有显著提高。结论是骨髓基质祖细胞低剂量照射时具有兴奋效应。     

γ 照射复合热烧伤时对染色体畸变影响的实验研究

100—600拉德~(60)Coγ线和该剂量复合15%二度烧伤各组,伤后24小时,单纯烧伤和对照组之间,放烧复合伤和单纯照射组之间,染色体畸变无显著性差异,经回归分析表明,不仅模式相同而且同一指标的回归方程式几乎相等,大鼠复合15%二度烧伤对骨髓细胞染色体畸变没产生影响,因此,染色体畸变分析有作为放烧复合伤时生物剂量仪的可能性。     

辐射对小鼠骨髓基质细胞分泌血管内皮生长因子的影响

摘要为研究γ射线对小鼠骨髓基质细胞中血管内皮细胞生长因子（Vascular endothclia growth factor,VEGF）的影响,使用不同剂量（0、2．5、5、10Gy）的γ射线全身照射C57BL／6J小鼠。分别用逆转录多聚酶链反应（Reverse transfer polymcrasc chain reaction,RT-PCR）和酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbcnt assay,ELISA）法研究了照射后体外培养3、6、10d的骨髓基质细胞中mRNA和培养上清中的VEGF水平。结果发现,对非照射组,随着骨髓基质细胞体外培养时间的延长,其VEGF在基因和蛋白水平都显著升高。受到5Gy或10Gy射线照射后,VEGF随时间变化的总趋势与非照射组相同。在各时间点照射组的VEGF基因表达均高于同时点的非照射组。照射组培养6d上清液中VEGF含量高于同时点的非照射组;而在第10d时,却显著低于同时点的非照射组。分析其原因是因为受到照射后培养10d的骨髓基质细胞数已显著低于非照射同时点的细胞数,其培养上清中VEGF的减少与分泌VEGF的总细胞数减少有关。结果说明,5Gy或10Gy射线会引起骨髓基质细胞VEGF的表达增强。这一现象提示VEGF的表达升高可能是机体的一种代偿性反应,有利于机体造血的重建。辐射后,小鼠骨髓中VEGF的改变与骨髓基质的损伤、造血恢复的关系值得进一步研究。     

小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对受致死剂量照射小鼠造血重建的影响

为观察小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）及骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）混合输注对受致死剂量照射 小鼠造血重建的影响,给予受致死剂量照射的 Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠输注同基因 ＢＭＣ１×１０７个及经体 外扩增的同基因原代 ＢＭＳＣ ２×１０５个,并与单纯骨髓移植组进行了比较。结果表明,移植后第 １４天外周血白细胞、血小板回升较快,第 １５天、第 ２０天粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系 祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ、 ＣＦＵ－Ｅ）、造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）明显高于后者,第 ２０天已达正常。说明原 代ＢＭＳＣ不仅可以移植,而且能够加快造血重建;提高移植效果。     

60Co γ射线照射对培养小鼠骨髓基质细胞IL-6表达的影响及机制研究

观察了^60Coγ射线照射对培养小鼠骨髓基质细胞（BMSCs)的白细胞介素－6（IL－6）mRNA及蛋白表达的影响。采用Dexter方法体外培养小鼠BMSCs,8.0Gy^60Coγ射线照射后用放射免疫法测定培养上清液中IL－6的浓度,应用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）的方法检测IL－6的mRNA表达,同时与NF－KB抑制剂PDTC或地塞米松预处理的BMSCs相比较。结果表明,培养小鼠BMSCs在正常情况下低表达IL－6,辐射后2h时其mRNA水平表达升高,4h时达峰值,之后开始下降;其蛋白表达在2h时开始升高,8－12h时达峰值,24h时基本恢复正至正常水平;而BMSCs在受照射前2h用PDTC或地塞米松预处理后,辐射并不引起IL－6mRNA表达的改变。结果显示,^60Coγ射线照射能够激活培养小鼠BMSCs细胞IL－6基因的转录,使细胞分泌IL－6增多,其机制可能与照射引起的NF－KB活化有关。     

维生素D保护γ射线引起的骨髓基质细胞凋亡

本实验利用骨髓基质细胞（Bone marrow stromal cell，BMSC）克隆形成法、流式细胞仪分析BMSC凋亡、Western—blot分析BMSC内caspase，3蛋白表达研究维生素D对γ射线引起的BMSC损伤的保护作用。小鼠在6Gy的γ射线照射前48h每天皮下注射0．06251ag的1，25二羟基维生素D。结果发现，照射引起小鼠骨髓成纤维细胞集落形成单位（CFU—F）数显著减少。维生素D处理使照射后小鼠的CFU-F与对照组在同一水平。照射使BMSC凋亡率及其caspase-3蛋白的表达显著上升，而维生素D处理可以显著改善这种效果。这些资料说明维生素D具有保护照射引起的BMSC凋亡的作用。     

小鼠免疫器官（胸腺、脾脏和淋巴结）成克隆基质祖细胞辐射敏感性的研究

用体外液体单层培养技术研究了小鼠胸腺、脾脏和淋巴结成克隆性基质祖细胞（ＣＦＵ－Ｆ）的辐射敏感性：胸腺ＣＦＵ－Ｆ的Ｄ０值为２．３Ｇｙ，ｎ值为１．５，脾脏为２．８Ｇｙ和１．２，雨淋巴结的则为２．７Ｇｙ及１．４。脾致密型ＣＦＵ－Ｆ亚群的Ｄ０值为２．１Ｇｙ，ｎ＝１．５；而松散型ＣＦＵ－Ｆ亚群的Ｄ０＝４．４Ｇｙ，ｎ＝１．２。这为大剂量辐射损伤混输基质细胞以提高受体免疫造血功能，提供了实验依据。     

WR—2721药对放烧复合伤预防效应的实验观察

研究ＷＲ－２７２１对放烧复合伤的预防效果及其对造血功能的保护作用。结果证明，ＷＲ－２７２１能明显提高放烧小鼠的活存率，并延长死亡动物的活存时间。用ＷＲ－２７２１预防后，放烧小鼠的ＬＤ５０由对照组的５．１９Ｇｙ增大到０．５３Ｇｙ，ＤＲＦ为１．８４，ＷＲ－２７２１对放烧小鼠的预防作用以２００ｍｇ／ｋｇ照射前立即给药效果最好。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子在放烧复合伤中的治疗作用

研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对受６．０Ｇｙγ射线照射复合１５％Ⅲ度体表烧伤小鼠的造血刺激作用。结果表明：放烧复合伤后,造血功能严重受损,外周血白细胞数明显减少,以伤后３￣５ｄ最低。     

混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。     

电离辐射对小鼠骨髓造血细胞周期进程的影响

采用流式细胞术（ＦＣＭ）观察了Ｘ射线全身照射后小鼠骨髓造血细胞周期进程的时程变化和剂量效应关系,为探讨电离辐射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响。结果显示,２ＧｙＸ射线全身照射后１２ｈ,骨髓细胞出现Ｇ１期细胞百分数升高（ｐ〈０．０５）,４ｈＳ期细胞百分数下降（ｐ〈０．０５）,Ｇ２＋Ｍ期细胞百分数于后４ｈ和１２ｈ升高（ｐ〈０．０５）。量效研究显示,０．５～６Ｇｙ照射后１２ｈＧ１期细胞百分数高于对照组,其中     

辐射损伤后造血细胞增殖能力的变化

辐射损伤后，存活的造血细胞的增殖丰伤后造血功能的状态和预后。本实验以辐射损伤小鼠为模型，用ＢｒｄＵ掺入法和ＣＦＵ－ＧＭ培养等方法，观察到４－１０Ｇｙ射一全身照射后４ｈ骨髓细胞的的增殖指数就显著下降，在观察时间内一直处于较低水平（仅为对照组的２０％或更低）。在４－１０Ｇｙ照射后４ｈ或更长，几乎看不到骨髓造血细胞的ＣＦＵ－ＧＭ集落，推测存在一个“成集落休克期”。可见，射线在损伤造血细胞的同时，还明显抑     

不同剂量X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞术研究了不同剂量X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。结果表明，0．075GyX射线全身照射后2－72h骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；2．0Gy全身照射后4h骨髓细胞便开始出现明显的G2阻滞，12h同时出现G1、G2阻滞，而后很快恢复到假照水平。不同剂量（0．05Gy-6.0Gy）全身照射后12h量效结果表明，低剂量范围内（0．05－0．2Gy）骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；较大剂量范围内（0．5Gy-6.0Gy）照射后出现明显的G1、G2阻滞，S期细胞百分数减少。提示低剂量全身照射后骨髓细胞周期进程未检测出变化；而较大剂量全身照射后，骨髓细胞出现DNA合成抑制，G1和G2阻滞。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞CDK4表达的影响

采用流式细胞术和Northern blot检测X射线全身照射后小鼠骨髓细胞CDK4转录水平和蛋白表达的变化。结果表明,2GyX射线全身照射后4－48h CDK4 mRNA转录水平及蛋白表达均明显下降;0.5-6Gy X射线全身照射后12h CDK4 mRNA水平及蛋白表达亦呈降低改变。结果提示,CDK4在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞G1期阻滞中可能起重要作用。     

致死剂量辐射诱导小鼠骨髓细胞凋亡特征的研究

经＾６０Ｃｏ γ射线以不同剂量全射照射２１３只ＬＡＣＡ小鼠,于照射后４周内分批 杀,将骨髓标本分别进行Ｈ．Ｅ染色,半薄及超薄切片,并通过原位末端标记和ＤＮＡ交电泳观察其生化特性。结果表明：射后６ｈ,各一组小鼠骨髓造血细胞出现凋亡明显增多,且剂量赵大,凋亡细胞越多。凋亡的细胞形态上表现为染色质深度缩、边移,呈半月型,环状或不规则状,核碎片喜讯发小体形成,电泳下可见ＤＮＡ梯状图谱。在２．５～７．０Ｇ６