大鲵皮胶原蛋白肽的抗原反应特性研究

目的 探讨用酶法提取大鲵皮胶原蛋白肽,并确定大鲵皮胶原蛋白肽的抗原性,为进一步研究大鲵皮胶原蛋白肽的生物相容性提供依据。方法 采用酶法提取获得大鲵皮胶原蛋白肽,并对得到的胶原蛋白肽进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析确定其分子量分布范围。将得到的胶原蛋白肽与弗氏佐剂混合乳化后经免疫程序免疫ICR小鼠,采用抗体酶联免疫试剂盒检测小鼠血清中IgG、IgA、IgM以及IgE含量。结果 所得到的大鲵皮胶原蛋白为I型胶原蛋白,酶解后的胶原蛋白肽分子量均小于10 kDa,多数肽分子量集中在2000~5000 m/z,检测血清中IgA、IgG、IgM和IgE 4种免疫球蛋白的浓度范围分别是71.63~85.90 μg/mL、705.19~857.04 ng/mL、71.63~85.90 ng/mL与224.54~261.0 μg/mL。结论 大鲵皮胶原蛋白肽对ICR小鼠呈现出较弱的抗原性。     

非变性I型胶原蛋白对免疫低下大鼠免疫功能的调节作用

该研究旨在观察非变性I型胶原蛋白（Non-denatured type-I collagen,NDC-I）对免疫低下模型大鼠免疫功能的调节作用。动物实验采用腹腔注射环磷酰胺法建立免疫低下大鼠模型,观察NDC-I对大鼠的胸腺指数和脾脏指数,白细胞计数和分类,血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）,脾脏和胸腺的乳酸脱氢酶（LDH）活性和组织形态学变化。结果显示,在给予NDC-I干预30 d后,与模型组比较,NDC-I组胸腺指数上升（p<0.05）,白细胞计数显著提高（p<0.01）,血清中IgA、IgG、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ和TNF-α含量为43.32 µg/mL、283.32 µg/mL、1827.17 ng/L、135.97 pg/mL、113.87 ng/L、2302.44 pg/mL、469.91 ng/L,水平显著升高（p<0.01）,脾脏中LDH活性显著上升（p<0.01）,脾脏和胸腺组织病理学损伤减轻。结果证明,NDC-I对环磷酰胺致免疫低下大鼠的免疫功能具有一定的调节作用,也为胶原蛋白等相关功能产品的综合开发与充分利用提供了参考依据。     

牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立

将牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛IgG单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛IgG单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中IgG质量浓度,该方法在7.8～1 000 ng/mL范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/mL,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%～102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。     

菊糖酸奶对小鼠免疫器官指数和血清免疫球蛋白的影响

以脾脏指数、胸腺指数、体质量及免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）IgG、IgA、IgM含量为评价指标,研究菊糖酸奶对小鼠免疫器官指数和血清免疫球蛋白的影响。结果表明：菊糖能够刺激酸奶中乳酸菌的增加。与普通酸奶相比,菊糖酸奶能够更好地提高小鼠免疫功能,经相关性分析发现IgG、IgA与酸奶中乳酸菌的含量显著相关。由此可见,菊糖刺激了酸奶中乳酸菌的增加,从而增强了酸奶对机体免疫功能的影响。在菊糖添加量为50 g/L时,菊糖酸奶对小鼠的免疫增强效果最好。     

仿生石斛多糖对小鼠免疫器官的调节作用

该研究主要通过水提醇沉法提取林下仿生石斛多糖（bionic Dendrobium polysaccharide,BDP）,探讨其对免疫抑制小鼠淋巴器官发育的免疫调节机制。利用环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）建立免疫抑制模型,将6周龄C57BL/6J小鼠随机分为模型组、阳性对照组（左旋咪唑组）、仿生石斛多糖组（剂量为120 mg/kg）,另设健康小鼠作为空白对照组,各组小鼠灌胃相应的药物10 d,检测免疫脏器系数、观察淋巴结的组织病理学变化,酶联免疫吸附试验（enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA）法检测血清中免疫细胞因子白介素2（interleukin-2,IL-2）和白介素6（interleukin-6,IL-6）以及免疫球蛋白 G（immunoglobulin G,IgG）和免疫球蛋白 M（immunoglobulin M,IgM）。结果表明,BDP可以提高免疫抑制小鼠的体重以及免疫脏器系数,改善环磷酰胺造成的肠系膜淋巴结损伤,提高血清中相关免疫球蛋白IgG和IgM的分泌,增加血清中细胞因子IL-2、IL-6的分泌,维持机体的免疫稳态。     

直接酶联免疫吸附法检测猪血清IgG的影响因素

直接酶联免疫吸附法检测猪血清中G型免疫球蛋白（IgG），最小检测量为10ng，最适检测范围纯IgG为10～60ng，猪血清IgG为10～40ng。酶标抗体最适稀释度为1／3500。酶标板内与酶标板间平行测定变异系数均小于5％。     

黄酒多糖对免疫缺陷小鼠血清免疫相关因子的影响

研究黄酒多糖对免疫缺陷小鼠血清免疫因子的影响。选择健康昆明小鼠,适应性喂养4 d后,分成5 组：空白组、环磷酰胺（cyclophosphamide,CY）模型组、CY＋黄酒多糖（低、中、高剂量）组,每组10 只。黄酒多糖按高、中、低3 个剂量（50、100、200 mg/（kg·d）,均以体质量计）给小鼠灌胃,1 次/d,连续给药14 d,空白组和CY模型组给予生理盐水。第19天除空白组,其余4 组腹腔注射环磷酰胺,连续4 d。处死小鼠,眼眶取血,测定血清中白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）、补体（C3、C4）水平。结果表明,与CY组相比,黄酒多糖能提高IL-6、IFN-γ、TNF-α、免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）和补体（C3、C4）水平,并且随着低中高剂量效果依次增加。由此说明,黄酒多糖能提高免疫缺陷小鼠的免疫功能。     

大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子（BBI）单克隆抗体（mAb）,以50 μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到分泌BBI mAb的稳定杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备BBI mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明：1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度（IC50）为868.58 ng/mL。经细胞融合筛选得到5株杂交瘤细胞,其中3B7-B10 mAb效价达到1 ∶ 4.096×105以上,亚型为IgG1型,IC50为83.07 ng/mL,具有亲和力较高且特异性强的优点,表明所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立大豆及其制品中BBI的免疫学检测方法提供良好的抗体基础。     

HPLC检测大鼠组织样品中花椒麻素方法的建立

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠组织样品中花椒麻素含量的方法。方法：采用Intersil ODSSP C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）为分析柱,流动相甲醇-水（70∶30,V/V）,流速0.5 mL/min,检测波长 254 nm。结果：心、肝、脾、肺、肾脏、脑、胃、小肠、脂肪、肌肉、皮肤、睾丸及前列腺的线性范围分别为 0.1～10 μg/mL（r=0.998 6）、0.1～50 μg/mL（r=0.999 9）、0.1～10 μg/mL（r=0.999 7）、0.1～10 μg/mL （r=0.998 9）、0.1～20 μg/mL（r=0.999 3）、0.1～10 μg/mL（r=0.999 5）、0.1～100 μg/mL（r=0.999 9）、 0.1～50 μg/mL（r=0.998 2）、0.1～20 μg/mL（r=0.995 6）、0.1～10 μg/mL（r=0.998 8）、0.1～10 μg/mL （r=0.999 7）、0.1～10 μg/mL（r=0.999 8）及0.1～10 μg/mL（r=0.999 8）。方法平均回收率大于 82%,日内日间变异均小于11%,稳定性良好。结论：本方法准确、快速、重复性好,适用于大鼠组织样 品中花椒麻素含量的测定。     

木薯淀粉介导肠道菌群加剧小鼠肥胖症的机制

肥胖症是体内脂肪过度积累而导致超重的一种慢性代谢疾病.木薯淀粉属于可消化淀粉,目前对其研究多集中于对结构的解析和体外功能评价方面.本研究基于小鼠肥胖模型,采用高通量测序技术研究造模肥胖小鼠摄入木薯淀粉后血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),免疫指标免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM...     

壳聚糖-活性红4缔合体系的荧光猝灭与共振瑞利散射光谱分析及其在壳聚糖定量分析中的应用

在弱酸性Britton-Robinson缓冲体系中,壳聚糖对活性红4存在荧光猝灭作用,在激发波长（λEx）/发射波长（λEm）=285 nm/341 nm处,在0.050～2.00 μg/mL质量浓度范围内,其荧光猝灭程度与壳聚糖质量浓度呈良好的线性关系。线性方程为ΔF=68.78c＋2.648（c,μg/mL）,R2=0.999 2,检出限为0.039 μg/mL。在相同的介质环境中,壳聚糖-活性红4离子缔合体系于波长342 nm处产生强烈的共振瑞利散射特征峰,共振瑞利散射强度与壳聚糖质量浓度c呈良好线性关系,在0.050～6.00 μg/mL质量浓度范围内,线性方程为：ΔI=681.31c＋114.95（c,μg/mL）,R2=0.999 1,检测限为0.033 μg/mL。据此,建立以活性红4为探针定量分析壳聚糖的2 种新方法：荧光猝灭法和共振瑞利散射法。同时,将2 种方法就壳聚糖分子质量对测定结果准确性的影响进行研究。将2 种新方法应用于实际样品的定量检测,测定结果基本一致,且回收率结果令人满意。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测鱼中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物

采用超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鱼中孔雀石绿（malachite green,MG）、隐性孔雀石绿（leuco malachite green,LMG）、结晶紫（crystal violet,CV）、隐性结晶紫（leuco crystal violet,LCV）4 种物质残留。样品加入内标物D5-MG、D6-LMG、D5-CV、D6-LCV,经乙腈提取、离心、过中性氧化铝柱,氮气吹至近干,50%乙腈溶液定容,上机测定。MG和LMG线性范围为1～50 ng/mL,CV和LCV线性范围为1～100 ng/mL。4 种物质的检出限均为0.05 μg/kg,定量限均为0.15 μg/kg。在50、100、200 ng/mL 3 个添加水平下,回收率在87.80%～110.82%之间,相对标准偏差均小于等于4.32%（n=6）。该方法灵敏、准确、可靠,可以同时测定鱼中MG、LMG、CV、LCV残留。     

高效液相色谱法检测鲫鱼不同组织中的胶原蛋白含量

为提高水产品胶原蛋白的利用率,采用柱前衍生-高效液相色谱法对鲫鱼鱼皮、鱼肉、鱼鳞、鱼鳔组织中的羟脯氨酸含量进行检测,再将羟脯氨酸含量换算成相应胶原蛋白的含量。鲫鱼样品经盐酸110 ℃水解18 h,丹磺酰氯衍生,采用高效液相色谱-紫外法进行检测。色谱柱：反相C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：A为甲醇,B为四氢呋喃-甲醇-0.05 mol/L乙酸钠（1∶15∶84,V/V）溶液,采用梯度洗脱;流速1 mL/min;柱温40 ℃;检测波长254 nm。结果表明：羟脯氨酸在20～400 μg/mL范围内呈现良好的关系（R2=0.999 8）,最低检测限为0.18 μg/g,不同水平的平均回收率为80.22%～83.33%,相对标准偏差范围为0.31%～1.84%。实际样品分析显示,鱼皮、鱼肉、鱼鳞、鱼鳔组织中胶原蛋白含量分别为106.62、24.75、166.94、115.05 mg/g。本实验建立的分析方法简便快捷、具有较好的灵敏度和可靠性,可用于水产品不同组织中胶原蛋白的定量分析。     

肉鸭表皮组织中脱氢枞酸残留的SPE-HPLC检测方法

建立经松香脱毛处理的肉鸭表皮组织中残留脱氢枞酸的固相萃取-高效液相色谱检测方法。肉鸭表皮组织中的脱氢枞酸用乙腈提取,经C18固相萃取小柱净化,以0.003 mol/L磷酸溶液-甲醇（13∶87,v/v）为流动相,采用反相C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱分离,以紫外检测器（检测波长212 nm）进行检测。结果表明：该方法检测脱氢枞酸线性范围为0.1～10 mg/L,检测限为0.10 μg/g,定量限为0.33 μg/g。在低中高3 个添加量范围内回收率为80.8%～91.8%。实际样品分析显示,肉鸭表皮中脱氢枞酸含量最高达10.06 μg/g。所建立的分析方法简便快捷、具有较好的灵敏度和可靠性,可用于肉鸭表皮组织中脱氢枞酸残留量的分析。     

固相萃取-高效液相色谱法检测肉鸭表皮组织中的松香酸

采用高效液相色谱法对肉鸭表皮组织中的松香酸含量进行检测。肉鸭表皮组织中的松香酸用乙腈提取,经C18固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-紫外法进行检测。色谱柱：反相C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：0.003 mol/L磷酸溶液-甲醇（8∶92,v/v）;流速：1 mL/min;检测波长：240 nm。结果表明：方法线性范围为0.1～10 mg/L,检出限为0.10 μg/g,定量限为0.33 μg/g。在0.5～50 μg/g的添加范围内回收率为82.2%～88.0%。实际样品分析结果显示,松香脱毛处理的肉鸭表皮中松香酸含量高达14.52 μg/g。本实验建立的分析方法简便快捷、具有较好的灵敏度和可靠性,可用于肉鸭表皮组织中松香酸的定量分析。     

不同提取方法对罗非鱼皮胶原蛋白理化特性的影响

以罗非鱼皮为研究对象,分析热水法提取、酸法提取及超声波辅助酶法提取对鱼皮胶原蛋白理化特性的影响。结果表明：3 种提取方法所得胶原蛋白紫外光谱吸收特性峰在220～232 nm之间;提取方法对羟脯氨酸和脯氨酸含量影响差异不显著,但热水提取可显著提高鱼皮胶原蛋白的凝胶强度,酸法提取可显著提高鱼皮胶原蛋白的特性黏度;3 种鱼皮胶原蛋白的变性温度都在31 ℃附近,提取方法对变性温度影响差异不显著;热水法提取胶原蛋白的等电点（pI 5.9）低于其他方法所得胶原蛋白（pI 7附近）。     

高效离子交换色谱法测定半乳糖、葡萄糖、乳糖及低聚半乳糖含量

建立离子色谱法定量测定以乳糖为原料、使用β-半乳糖苷酶生产的低聚半乳糖产品的方法。样品前处理过程中用体积稀释法代替质量稀释法,采用高效CarboPac PA20阴离子交换色谱柱和积分安培法检测,并对淋洗液组成进行优化。优化后的方法加标回收率90.58%～99.45%,相对标准偏差为3.54%。半乳糖、葡萄糖、乳糖的方法检出限分别为0.24、0.59、0.75 μg/g。半乳糖和葡萄糖在0.2～7 μg/mL、乳糖在0.6～10 μg/mL的范围内,其质量浓度与峰面积线性关系良好,相关系数在0.999 2～0.999 9之间。用此方法测定6 种原料低聚半乳糖,目标组分总含量为95.84%～101.19%。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中雷公藤红素和雷公藤次碱

建立了一种超高效液相色谱-串联质谱同时检测蜂蜜中雷公藤红素和雷公藤次碱的快速分析方法。样品用水溶解后,乙腈盐析提取,采用Hypersil GOLD C18柱（50 mm×2.1 mm,1.9 μm）分离,电喷雾离子源正离子多反应监测模式串联质谱进行检测。结果表明：雷公藤红素和雷公藤次碱在0.01～20 ng/mL范围内具有较好的线性关系,相关系数均大于0.997。该方法定量限均为0.05 μg/kg。在0.05 μg/kg和1.0 μg/kg添加量条件下,雷公藤红素和雷公藤次碱的回收率为69.9%～101.5%,相对标准偏差均不大于10%（n=6）。本方法快速、灵敏、准确,适用于蜂蜜中雷公藤相关物质残留的定性、定量检测。     

催化动力学光度法测定啤酒中痕量甲醛

在硫酸介质中,甲醛能催化过氧化氢氧化结晶紫的褪色反应,其褪色程度与甲醛的含量呈正比,以此建立一种测定啤酒中痕量甲醛的新方法,研究影响该反应速率的条件。结果表明,最佳实验条件下,甲醛在质量浓度0.4～2.0 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。方法的检出限为0.35 μg/mL,对质量浓度1.6 μg/mL甲醛标准溶液进行11 次平行检测,得到相对标准偏差为1.03%,该方法的灵敏度高、选择性好,适用于啤酒中痕量甲醛的检测,加标回收率为98.6%～104.6%,结果令人满意。     

超高效液相色谱法测定芒果中啶酰菌胺和吡唑醚菌酯

建立芒果中杀菌剂啶酰菌胺和吡唑醚菌酯残留检测的超高效液相色谱方法。芒果样品经乙腈提取,氨基(NH2)固相萃取柱净化,以乙腈和水为流动相梯度洗脱,采用双波长紫外检测器检测,外标法定量。结果表明:啶酰菌胺和吡唑醚菌酯含量分别在0.10~4.00μg/mL和0.02~1.00μg/mL质量浓度范围内与色谱峰面积呈现良好的线性关系,决定系数R2均大于0.999,方法的检出限均为0.002 mg/kg,分别从3个不同添加水平检测结果可以看出,方法的回收率在76.00%~103.00%之间,相对标准偏差为1.07%~13.28%。