浅谈芒果基因组DNA的提取

芒果是重要的经济果树之一,富含多酚、多糖、单宁等其他次生代谢干扰物质,因此其基因组DNA的获取和纯化较为困难。笔者对芒果基因组DNA提取方法进行了探讨,常用的获取方法有SDS法、CTAB法和试剂盒法,而CTAB法提取效果较好。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、Trizol法以及EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明:改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S条带亮度是18S条带亮度的2倍,将其反转录获得的c DNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述:EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

一种提取真菌基因组DNA的新方法

真菌基因组高通量测序对DNA纯度和含量要求较高,通过月桂酸钠法、CTAB法和酶裂解法分别提取真菌基因组DNA,然后进行琼脂糖凝胶电泳和Nanodrop 1000测定DNA浓度和纯度,结果证明月桂酸钠法提取的真菌基因组总DNA更适合应用于真菌基因组高通量测序。     

植物组织总RNA提取方法的比较

本文综述了植物组织总RNA提取方法比较与难点对策分析。植物组织总RNA提取方法有化学试剂提取和试剂盒提取两种。化学试剂提取法有强变性剂法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、Li Cl-尿素法、阴离子去污剂法、皂土法、硅藻土-苯酚法。其中,除皂土法和硅藻土-苯酚法是近年提出的较新的植物组织总RNA提取方法外,其余的都被广泛应用。本文可为植物组织总RNA提取方法研究提供参考。     

梅叶绿体分离与测序方法优化

叶绿体基因组是研究进化关系的理想基因组。为了获得最适合梅(Prunus mume)叶绿体提取及测序方法的方案,以梅品种‘龙眼’新鲜幼叶为试验材料,比较叶绿体试剂盒,高盐-低pH配合Percoll密度梯度以及改良高盐-低pH3种方法分离叶绿体的效果。结果表明改良高盐-低pH法提取梅cpDNA的OD260/OD280值为2.043,质量浓度为5 286.4ng/ul,是3种方法中最适合梅叶绿体提取的方法。此外,通过比较直接与拼接2种测序方法得到的‘龙眼’梅叶绿体基因组差异,发现两者的显著差异为直接测序法测得基因组在IR区112～118kb区间有一段冗余序列,基因组重排相似度高于99%。综合考虑,梅叶绿体最佳提取方法为改良高盐-低pH法,直接测序法获得的信息量较大但增加了提取叶绿体DNA的成本。     

HBV感染者DNA模板库的制备

目的:提取乙型肝炎病毒感染人群基因组DNA,并制备成DNA模板供予HBV感染相关的基因多态性研究之用。方法:收集HBV感染人群抗凝全血,采用盐析法提取基因组DNA。结果:收集的HBV感染人群包括无症状携带者、慢性肝炎、重型肝炎、肝硬化以及肝癌,同时收集了一部分健康献血员病例。结论:模板库中主要为HBV持续感染病例,采用盐析法提取的DNA纯度高且稳定。     

巴西甘蔗DNA导入甘蔗03-75品系的SRAP分子验证

利用SDS方法提取纯化供体巴西甘蔗B8总DNA,通过悬浮共培养方法将巴西甘蔗DNA转入到桂热甘蔗03-75品系中,筛选获得转化的甘蔗植株。对转化植株、供体和受体进行SRAP分子验证。结果表明,用琼脂糖凝胶电泳从112对引物组合中筛选出13对扩增多态性好、条带清晰、稳定好的引物组合,再通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步筛选出4对较好引物组合,选择引物M5E8组合对巴西甘蔗、转化植株和桂热甘蔗03-75品系进行SRAP检测,转化植株检出带有供体差异条带,证明巴西甘蔗DNA导入了桂热甘蔗03-75品系,引起了甘蔗基因组的变化,说明通过悬浮共培养方法进行甘蔗总DNA导入是可行的。     

血液基因组 DNA 提取方法的改良

目的：探讨改良血液样品基因组 DNA 的提取方法，制备纯化的高分子量 DNA。方法将312份新鲜血液样品随机分为2组：A 组（90份）和 B 组（222份）。A 组采用常规基因组 DNA 提取方法。B 组采用改良的基因组 DNA提取方法，其基因组 DNA 提取方法改良之处：1）在血液样品中加入细胞裂解液 CL 后采用手工震荡，并离心2 min 40 s；2）震荡混匀后将样品分装成3管，然后将缓冲液 GS 加入第1管吹打溶解后吸取上清，并加入第2管，再吹打溶解后吸取上清加入第3管，继续吹打溶解；3）加入缓冲液 GB 后再58℃水浴过夜16 h。结果改良的血液样品 DNA 提取方法能够提高产率，提高纯度，获取更多高分子量的 DNA，相对于常规基因组 DNA 提取方法有显著提高。结论改良的血液基因组 DNA 提取方法操作简便，能有效地避免操作导致 DNA 链断裂，提高 DNA 的完整性及纯度。     

几种单头螨线粒体基因组提取方法的比较

目的:比较几种单头螨线粒体基因组提取方法。方法:参考文献的方法,分别用酚氯仿抽提法、Chelex-100抽提法和蛋白酶K法提取单头螨的总DNA,用COⅠ引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,比较不同抽提方法的结果。结果:酚氯仿抽提法未能扩增出目的基因,而Chelex-100抽提法和蛋白酶K法均成功扩增出了目的基因。结论:Chelex-100抽提法和蛋白酶K法均可用于单头螨线粒体基因的提取,前者获得的模板量大于后者,但是提取效率小于后者。     

一种新型的油樟叶片总RNA提取方法

以油樟叶为试材,比较Trizol法、皂土法、CTAB法、Tris-SDS-异硫氰酸胍法等传统方案提取总RNA,发现效果都不理想。本文针对油樟叶片富含油脂、多酚、多糖的特点,开创性地使用了一种改良的总RNA提取流程:首次增加预处理液、乙酸乙酯抽提来减少油脂、多酚和多糖对裂解液粘稠度的影响,提取过程中使用二氯甲烷代替三氯甲烷增加对疏水性杂质的清除效果,使用混合型高盐溶液多次脱糖,结果表明使用改良的新型方法获得的油樟叶片总RNA条带清晰无明显降解,测得的A260/A280和OD260/OD230均在2.0左右,产物得率约580μg/g,通过RT-PCR扩增出了油樟18S rRNA基因序长为113bp的特异条带,说明这种改良的新型方法获得的RNA完整性、纯度和产率都远高于常规RNA提取方法,研究探索出一种新型油樟叶片总RNA的提取方法。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础。不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系。无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化。文章综述了几种有效能评价体系的测定技术。     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。