铜绿假单胞菌WJ-1降解原油特性

从蒙古林油藏地层水中筛选和驯化得到一株兼性厌氧烃降解菌WJ-1,经生理生化测试和16S rDNA鉴定该菌株为铜绿假单胞菌。为了研究菌株WJ-1降解原油的性质,利用该菌株对新疆、中岔口、大庆江桥、蒙古林等油田的不同黏度的原油进行了微生物降解实验,分析了微生物降解作用对原油饱和烃、芳烃、非烃以及胶质和沥青质等组分在原油中相对含量、组成和结构的影响。原油棒薄层分析结果表明：微生物作用引起原油性质发生明显变化,各原油中胶质、沥青质、非烃类含量均降低10%以上;气相色谱分析结果表明：原油饱和烃中轻组分含量相对增加,重组分含量相对减少;芳香烃中的菲组分相对减少。黏度和凝固点分别平均降低45%和6℃,原油的流动性增强。多孔介质中的物理模拟实验表明：在不同黏度原油(新疆、中岔口、大庆江桥、蒙古林)的驱油实验中,菌株WJ-1能在空白水驱的基础上分别提高原油采油率4.78%、5.15%、7.39%、相似文献   

铜绿假单胞菌RhlR抗血清制备

目的在原核系统中表达铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1的调控蛋白RhlR,制备兔抗RhlR抗血清。方法构建重组表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR并转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达GST-RhlR和His-RhlR蛋白,经GST或Ni~(2+)亲和层析纯化重组蛋白。将His-RhlR蛋白免疫新西兰大白兔,制备RhlR抗血清,GST-RhlR蛋白包被ELISA板,检测效价。结果构建的表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;构建的工程菌表达的目的蛋白His-RhlR和GST-RhlR相对分子质量分别为29 000和54 000,表达量均约占菌体总蛋白的85%,纯度大于90%。制备的RhlR抗血清效价可达1∶80 000。结论获得高效价的RhlR抗血清,为PA中rhl调控系统的研究奠定基础。     

铜绿假单胞菌注射液体外抗肿瘤生物活性检测方法的建立

目的建立铜绿假单胞菌注射液(Pseudomonas aeruginosa,PA-MSHA)体外抗肿瘤生物活性检测方法。方法将系列稀释的PA-MSHA在体外直接作用于人肝癌细胞BEL-7402,光学显微镜下观察细胞的生长状态;MTT比色法检测其对细胞增殖水平的影响;对10批PA-MSHA成品分别检测3次,以半数抑制浓度(IC50)为指标,计算批内和批间变异系数(CV),验证方法的精密性。结果随着PA-MSHA稀释度的降低,光镜下贴壁的BEL-7402细胞数量逐渐减少,细胞皱缩并破碎;MTT比色结果显示,随着PA-MSHA稀释度的降低,孔内颜色逐渐变浅,BEL-7402细胞增殖抑制率逐渐升高,呈一定的剂量-效应关系;10批PA-MSHA成品3次检测的IC50值范围为(3.584～7.778)×108个/ml,批内变异系数为4.58%～24.17%,批间变异系数15.08%～16.95%,总变异系数为15.81%,均符合细胞实验变异系数应小于30%的标准;PA-MSHA成品经该方法检测后,得到的IC50值在(3.109～7.383)×108个/ml范围内时,表明成品的生物活性合格。结论建立了PA-MSHA体外抗肿瘤生物活性检测方法,该方法稳定性好、精密性高,而且具有操作简便、节约成本和时间等优点,可用于对PA-MSHA以及其他类似细菌类生物制品的体外生物活性研究。     

铜绿假单胞菌降解异丁醛的分析研究

随着微生物技术的发展,通过微生物技术治理工业生产中的“三废”已经成为未来行业发展的主流趋势。本文就微生物降解异丁醛过程开展了合理的分析,并对微生物体系进行了16-SrDNA检测,结果表明该体系中含有大量铜绿假单胞菌,可以利用碳源形成多糖类生物膜。综上所述,本文对铜绿假单胞菌在挥发性有机化合物降解中起到的作用进行合理的分析与研究。     

铜绿假单胞菌次生代谢产物的研究进展

铜绿假单胞菌可产生多种具有活性的次生代谢产物。综述了铜绿假单胞菌次生代谢产物的种类、提取方法、合成方法、作用机制及用途,指出了研究中存在的问题,展望了未来的发展方向,拟为铜绿假单胞菌次生代谢产物的科学研究提供参考。     

铜绿假单胞菌norB基因的克隆及表达

为使norB基因得到有效表达,利用分子生物学技术将铜绿假单胞菌B136-33的norB基因克隆至表达载体pET-28a上。首先,根据GenBank公布的norB基因序列及表达载体pET-28a上的多克隆位点进行引物(含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点)设计;然后以B136-33基因组为模板,扩增目的片段norB;产物经双酶切克隆至pET-28a后,化学转化至克隆菌DH5α,得到含有重组质粒的转化子DH5α-pET-28a-norB;再经双酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pET-28a-norB转化至表达菌BL21;最后,用SDS-PAGE鉴定norB基因表达产物的分子量。结果表明,norB能在BL21中得到正确有效的表达。     

铜绿假单胞菌外毒素A在生物制药中应用的研究进展

铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)是该菌分泌的外毒素之一,通过催化细胞延伸因子2(elongation factor-2,EF-2)的ADP核糖基化,抑制蛋白合成,从而导致细胞死亡,在铜绿假单胞菌导致的感染性疾病中发挥重要作用。PEA强烈的细胞毒性特点使得该毒素成为免疫毒素的重要成分之一,已广泛应用于肿瘤的靶向治疗中。此外,由于PEA可与抗原提呈细胞表面的α₂巨球蛋白受体结合,通过胞饮作用进入胞内,辅助抗原的处理和提呈,可作为分子佐剂应用于各种疫苗的研发。本文对PEA在免疫毒素及疫苗佐剂方面应用的研究进展作一综述。     

聚合酶链式反应技术检测化妆品中的铜绿假单胞菌

利用聚合酶链式反应(PCR)技术建立了一种快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。根据已报道的铜绿假单胞菌特异性基因ETA设计引物,确定引物的特异性和灵敏度;对染菌化妆品样品进行增菌检测。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有铜绿假单胞菌基因组的样品中得到条带;对染菌样品的扩增结果显示,可以在原样品的活菌浓度为6 cfu.mL-1时通过增菌12 h后检出。     

铜绿假单胞菌外毒素A基因突变体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A含量SDS-PAGE检测方法的建立及验证

目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA)含量的SDSPAGE法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋白在待测样品中的含量。对建立的方法进行专属性、准确性和重复性验证,确定检测范围,并用建立的方法检测r EPA宿主湿菌体中r EPA发酵产量及r EPA宿主菌休克液柱层析纯化样品中r EPA含量。结果 r EPA含量在100~600μg/ml范围内与其对应条带的光密度值具有良好的相关性,决定系数在0.97以上。大肠埃希菌固有组分及纯化过程中常用的添加物对r EPA含量检测均未产生明显影响,专属性较好;用建立的方法检测500、300、150μg/ml r EPA样品10次的回收率分别为(102.32±4.18)%、(102.77±4.94)%和(95.04±16.41)%,CV值分别为4.08%、4.81%和17.27%。各批r EPA发酵产量为250~500 mg/L,三步柱层析纯化后,r EPA总回收率约为50%。结论建立了测定r EPA含量的SDS-PAGE法,该方法专属性、准确性和重复性良好,为r EPA生产工艺的优化奠定了基础。     

铜绿假单胞菌TBPY与黏质沙雷氏菌SMA协同降解三溴苯酚的特性

三溴苯酚是一类难降解、对环境危害大的物质.在本课题组前期的研究基础上,本研究以自有的铜绿假单胞菌株(Pseudomonas aeruginosa,TBPY)和黏质沙雷氏菌株(Serratia marcescens AB 90027,SMA)为出发菌种,研究两菌降解TBP的协同性,同时考察相关因素对该协同降解的影响.研究结果表明,这两种微生物具有良好的协同性,两菌协同降解TBP的效果明显优于单菌.在初始pH值为6.5,接入稳定期的TBPY,TBP先经TBPY降解两天后再接入稳定期的SMA,两菌接种量比为2:1时,TBP降解效果最好,100 mg/L的TBP 5天内降解率可达到97%.本研究不仅为三溴苯酚的微生物降解提供了一个新的有效途径,也为卤代芳香化合物,乃至环境污染的生物降解提供一种新的思路.     

邻苯二甲酸二异辛酯在铜绿假单胞菌作用下的共代谢降解

选用铜绿假单胞菌为降解菌,研究了苯酚、葡萄糖、乙酸钠参与下,邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)的共代谢降解,挑选出了最佳的共代谢基质乙酸钠,并得到了最佳共代谢降解条件:p H=7、T=30℃、转速=200 rpm、共代谢基质与DEHP的浓度比=10∶1。最后对共代谢基质参与下的DEHP的降解过程进行了一级动力学拟合,拟合结果表明速率常数K苯酚K葡萄糖K乙酸钠。     

石榴皮与诃子联合制剂对铜绿假单胞菌抑菌作用的研究

目的:探讨石榴皮与诃子水煎剂单独及联合制剂对铜绿假单胞菌的体外抑菌作用,为中药联合治疗临床上铜绿假单胞菌感染提供参考数据及实验依据。方法:采用杯碟法、常量稀释法和微量棋盘法,测量抑菌圈直径和石榴皮和诃子水煎剂单独的最小抑菌浓度(MIC),计算二者连用时的抑菌指数(FIC),分析石榴皮和诃子水煎剂单独及联合制剂对铜绿假单胞菌的抑菌作用。结果:石榴皮与诃子单独制剂及联合制剂对铜绿假单胞菌有一定的抑菌作用。杯碟法结果显示,牛津杯周围可见明显的抑菌环,且抑菌环直径大小与药物浓度呈正比,其抑菌效果依次为:二者联合诃子石榴皮;常量稀释法和微量棋盘法结果显示,石榴皮水煎剂MIC为250 mg/mL;诃子水煎剂MIC为62.5 mg/mL,FIC为0.25。结论:石榴皮与诃子单独水煎剂对铜绿假单胞菌均有一定的抑菌作用,且抑菌效果强度与药物浓度呈正比;二者联合后彼此为协同效应,提示二者联合后可提高对铜绿假单胞菌的抑菌效果。     

铜绿假单胞菌对映选择性降解制备R-扁桃酸

以外消旋扁桃酸为唯一碳源,从土壤中筛选得到一株选择性降解S-扁桃酸的铜绿假单胞菌,可用于选择性降解S-扁桃酸制备R-扁桃酸。考察了温度、pH值、底物浓度等因素对S-扁桃酸降解的影响,并对发酵培养基成分及转化条件进行了优化。结果表明,在35℃、pH值8.0、底物浓度131.4 mmol.L-1的优化条件下,68 h发酵完成,R-扁桃酸收率为48.2%、光学纯度为99.2%。     

2种形态铜绿假单胞菌在氯消毒过程中消毒副产物研究

为研究悬浮和附着生长下的铜绿假单胞菌经氯消毒后消毒副产物的生成情况,以无菌生理盐水模拟悬浮生长环境,选取镀锌材料建立附着生长模型,采用UFC法进行加氯试验,气相色谱分析。结果表明,2种形态下的铜绿假单胞菌均为消毒副产物前驱物质,主要副产物包括三卤甲烷(THMs)、三氯乙腈(TCAN)和水合三氯乙醛(CH),且THMs符合TOC含量、单位耗氯量大小关系,而TCAN和CH则相反,可能是由生物膜胞外聚合物中的某种蛋白质结构引起。Br-的存在对CHCl3和TCAN产生抑制作用,转而形成更多的CHBr3和二溴乙腈,当Br-的质量浓度为2 mg/L时,CHBr3和二溴乙腈含量达到最大值,且主要影响总THMs和卤乙腈的含量,溴氯甲烷和溴氯乙腈的含量均随Br-含量的增加而先升高后降低。     

长江下游某地区饮用水中铜绿假单胞菌的赋存特征

针对长江下游某地区饮用水中铜绿假单胞菌的含量进行排摸,比较2020年1月—2022年12月铜绿假单胞菌的检测平均值,水源地Q取水与输水中铜绿假单胞菌的含量明显高于水源地C。水源地Q取水中铜绿假单胞菌平均含量达420.5MPN/(100 mL),输水中达242.0 MPN/(100 mL);水源地C取水中铜绿假单胞菌平均含量达201.4 MPN/(100 mL),输水中达82.5MPN/(100 mL)。水源地Q相关联水厂N进水铜绿假单胞菌均值含量远高于水源地C相关联水厂T进水的含量,其检测结果分别为232.1、2.1 MPN/(100 mL);水厂N进水铜绿假单胞菌的检出率达58.3%(7/12)、水厂T进水铜绿假单胞菌的检出率达50%(6/12),与水源地输水铜绿假单胞菌含量和检出率相比,显著降低。进水经给水厂处理后,水厂N、水厂T出水铜绿假单胞菌均未检出。与其他季节相比,在气温较高时(每年7月—10月),水源地铜绿假单胞菌含量显著增高,并有逐年最高值递增的趋势,当气温较高时,进水中铜绿假单胞菌含量也存在高值,建议在高温时期对铜绿假单胞菌进行持续监测。     

铜绿假单胞菌产抗菌代谢产物发酵条件的优化

以分离的铜绿假单胞菌作为实验菌株,以对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑制效果及菌体干重为评价指标,采用单因素实验、正交实验优化铜绿假单胞菌产抗菌物质的培养基组分和发酵条件。结果表明:优化的培养基组分为黄豆粉2.5 g·L~(-1)、大豆蛋白胨10 g·L~(-1)、磷酸氢二钠10 g·L~(-1),优化的发酵条件为接种量2%、初始pH值7、发酵时间96 h。     

包装饮用水中铜绿假单胞菌检测方法的比较分析

近几年随着生活节奏的加快,包装饮用水的消费量逐年增高,但其中铜绿假单胞菌的检出率较高,且危害性较大,因此包装饮用水中的铜绿假单胞菌检测至关重要.本文基于现阶段实验室所采用的细菌检测手段,阐述了生化水平、基因序列、蛋白指纹图谱等6类铜绿假单胞菌的检测方法,旨在对铜绿假单胞菌的快速分离及准确鉴定提供参考,从而更好地保障饮水...     

左氧氟沙星对铜绿假单胞菌NY3产表面活性剂特性的影响作用

利用左氧氟沙星诱变铜绿假单胞菌NY3获得NY3-1和NY3-2诱变株,通过比较所产表面活性剂的理化性能可知,诱变株和野生株所产鼠李糖脂表面活性剂的产量、成分和结构特征有明显的差异。与野生菌株相比,NY3-1产量提高19.57%,NY3-2产量降低17.60%;NY3、NY3-1、NY3-2所产鼠李糖脂的双/单糖含量比例(即为斑点密度比)分别为0.969、0.677、1.316,红外光谱图显示,NY3所产鼠李糖脂中不含CC键,而经左氧氟沙星诱导后的NY3-1和NY3-2分泌的鼠李糖脂中均含有CC不饱和键。比较ESI-MS质谱发现,3种菌株所产鼠李糖脂中都含有Rh-C10,诱变菌株所产鼠李糖脂中含有不饱和键的Rha-Rha-C10:1,且含量较高。