一株广谱拮抗细菌的鉴定、发酵条件及其抗菌物质性质

[目的]菌株S46是一株对多种植物病原菌有较好拮抗作用的细菌,为有效防治植物病害,进行菌种的鉴定、发酵培养工艺及抗菌物质性质研究。[方法]通过培养特性、形态特征、生理生化特性和16S rDNA同源性序列分析明确菌株的分类地位;通过发酵单因素实验和各因素正交试验确定菌株的发酵工艺;通过热、酸碱、紫外和日光等处理测定明确活性物质的稳定性。[结果]鉴定菌株S46为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli),其对多种植物病原菌有拮抗作用,最适发酵培养基配方为大豆粉10g/L,玉米粉15g/L,蔗糖15g/L,磷酸氢二钾1 g/L,酵母粉5g/L;最适培养条件为接种量6%,发酵时间72 h,装瓶量30 mL/250mL,初始pH值7.0,转速180 r/min,温度30℃。该菌株发酵液有较好的热稳定性、紫外光和日光稳定性,但对强酸、强碱和有机试剂都较敏感。[结论]为植物病害的防治提供新的生物防治资源。     

生防菌株NJ13对人参灰霉病室内毒力及田间防治效果

[目的]明确生防菌株NJ13对人参灰霉病的室内毒力及田间防治效果。[方法]采用菌丝生长速率法测定生防菌株NJ13对人参灰霉病菌的抑制效果,茎叶喷雾法进行了人参灰霉病的田间药效试验。[结果]室内毒力测定结果表明,NJ13菌株发酵液抑菌效果最好,其抑菌率最高达到91.95%,EC50值为0.0054cfu/mL。显微观察发现NJ13菌株能够抑制灰霉病菌菌丝生长,导致菌丝溶解和生长畸形。田间试验结果表明含有1.0×10~8～2.0×10~8cfu/mL的NJ13菌株发酵液防治效果达69%以上,最高达73.86%。[结论]生防菌株NJ13具有防治人参灰霉病的应用前景。     

生防菌株NJ13与化学农药复配对人参黑斑病的联合毒力及田间防效

[目的]明确NJ13菌株与化学农药复配对人参黑斑病菌的联合毒力和田间防治效果。[方法]生长速率法测定生防菌株及与化学农药复配对人参黑斑病菌的室内毒力及联合毒力,通过显微观察确定生防菌株对人参黑斑病菌菌丝生长的抑制效果,喷雾法评价生防菌株NJ13分别与2种化学药剂复配对人参黑斑病的田间防治效果。[结果]研究表明,NJ13菌株对人参黑斑病菌抑制效果最好,EC_(50)值为0.0047 mg/L。与嘧菌环胺不同配比对病原菌的联合毒力较单剂均具有增效作用,其中增效最佳配比为2∶3,共毒系数为6751.4,与苯醚甲环唑的不同配比中,除1∶1(体积比)联合毒力为拮抗作用,其他配比均为增效作用,最佳配比为2∶3,共毒系数为4166。NJ13菌株分别与50%嘧菌环胺WG、10%苯醚甲环唑WG复配对人参黑斑病的田间防治效果均高于单剂处理,防效达到87.97%和89.33%。[结论]生防菌株NJ13对人参黑斑病菌具有较好的抑制作用,分别与嘧菌环胺、苯醚甲环唑复配对人参黑斑病的联合毒力和田间防效具有增效作用。     

吸水链霉菌A03抗菌活性产物发酵条件的优化

[目的]吸水链霉菌A03是自主分离的高效拮抗菌株,其活性代谢产物对多种植物病原真菌具有强烈抑制作用;为了建立其高产发酵工艺,并为过程放大提供技术参数,利用正交设计和单因素试验对其发酵培养基和培养条件进行优化。[结果]获得的最适发酵培养基配方(g/L):葡萄糖5,可溶性淀粉5,黄豆粉10,磷酸二氢钾0.5,碳酸钙1,七水硫酸镁0.1;最优培养条件:液体种子菌龄40 h,500 mL摇瓶装液量80 mL,接种量为体积分数12%,摇床转速180 r/min,培养温度28℃,发酵周期216 h;发酵液抑菌直径达3.04 cm。[结论]成功建立了该菌株的小试发酵工艺,发酵水平提高了52.0%,发酵周期缩短30.77%。研究结果为其发酵代谢调控和过程放大提供了基本参数。     

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FS6摇瓶发酵条件优化

[目的]对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FS6的摇瓶发酵工艺进行优化。[方法]通过对发酵培养基成分和发酵条件的单因素试验和正交试验,测定生防菌株FS6对人参立枯丝核菌的抑菌效果和菌体生长量,来确定其最适发酵培养基和发酵条件。[结果]最适摇瓶发酵培养基配方为葡萄糖30 g,酵母浸粉40 g,Mg SO_4·7H_2O_2 g,甘油10 m L,K_2HPO_42 g,H_2O 1000 m L;最优培养条件为接种量6%,摇瓶装液量50 m L/250m L,摇床转速160 r/min,初始p H值6.0,培养温度28℃,培养时间12 h。[结论]解淀粉芽孢杆菌FS6在最适摇瓶发酵培养基及发酵条件下,对人参立枯病菌的抑菌活性最好,为该菌株的工业化生产奠定了基础。     

拮抗菌株JA38对人参锈腐病室内毒力及田间防治效果

[目的]明确菌株JA38对人参锈腐病的室内毒力及田间防治效果。[方法]采用菌丝生长速率法测定菌株JA38对人参锈腐病菌的室内抑制效果,灌根法进行了人参锈腐病的田间药效试验。[结果]室内毒力测定结果表明:当菌株JA38发酵液浓度为10~9cfu/mL,其抑菌率达100%,EC_(50)值为1.4×10~6cfu/mL;且对人参锈腐病菌的产孢量、孢子萌发、菌丝生长均有抑制作用;显微观察发现菌株JA38能够导致人参锈腐病菌菌丝断裂、分支增多和生长畸形。田间试验结果表明:含有0.25×10~7~1.0×10~7cfu/mL的JA38菌株发酵液防治效果达40.96%~60.77%。[结论]生防菌株JA38具有较好防治人参锈腐病的应用前景。     

普那霉素发酵工艺研究

以RP59500为试验菌株,在15 L发酵罐内,研究了普那霉素的发酵工艺。通过单因素条件试验确定了其生物合成的最适温度、接种量。优化了其发酵培养基,并进行了发酵中间补料试验,确定了最佳补料工艺。试验结果表明：以3%淀粉、1.7%蔗糖、1%黄豆粉、1.5%酵母粉、0.5%葡萄糖、0.01%KH2PO4、0.2%MgSO4、0.2%泡敌和0.4%CaCO3的发酵培养基配方,以接种量4.0%,26℃下发酵,在发酵21 h时补加氨基酸,普那霉素的发酵效价达3 000 U/mL。     

一株人参广谱拮抗菌株的筛选、鉴定及抗菌物质性质

[目的]筛选出对人参7种病原菌都具有很好抑菌效果的菌株,明确菌株种类和产生的抗菌物质性质,为进一步研究应用奠定基础。[方法]采用平板对峙培养法筛选获得1株广谱抑菌菌株LG2,通过形态学、生理生化和16S r RNA序列分析鉴定其种类;采用热、酸碱、蛋白酶和紫外照射处理,测定明确LG2产生的活性物质性质;通过田间试验测定发酵液对人参灰霉病的防治效果。[结果]通过筛选获得1株广谱抑菌菌株LG2,鉴定其为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);通过混菌法测定其产生抗菌物质具有很好的耐热、耐酸碱、耐蛋白酶和抗紫外线的性质;田间试验证明,LG2发酵5倍稀释液对人参灰霉病的防治效果达73.99%,与对照药剂50%嘧菌环胺WG 0.67 mg/L的防效相当(74.13%)。[结论]获得1株具有很好应用前景的菌株LG2。     

海洋沉积物中拮抗菌的筛选及发酵特性研究

采用打孔注射法从海洋沉积物中筛选出对水产动物常见病原菌有较强拮抗作用的菌株,并进一步研究拮抗菌的发酵特性和抗生素敏感性。结果表明:从511株海洋沉积物菌株中筛选出63株能明显抑制病原菌的菌株,其中,菌株ZDB4对副溶血弧菌的拮抗作用较显著,初步鉴定为Glutamicibacter arilaitensis Re117;菌株H77对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较显著,初步鉴定为Bacillus vallismortis;菌株3hcxs9对鲍曼不动杆菌的拮抗作用较显著,初步鉴定为Bacillus flexus;菌株P85对哈维氏弧菌的拮抗作用较显著,初步鉴定为Staphylococcus arlettae。拮抗菌的发酵特性实验显示,菌株3Ha23的高温耐受性较好,初步鉴定为Bacillus zhangzhouensis;菌株P89的酸度耐受性较好,初步鉴定为Bacillus zhangzhouensis。药敏性实验显示,菌株X6对常用抗生素的耐药性较好,对所选22种抗生素中的15种耐药,初步鉴定为Bacillus toyonensis。该研究为微生物制剂在水产养殖中的应用提供了参考。     

复合微生物杀菌剂对黄瓜灰霉病的防治

[目的]对防治黄瓜灰霉病复合微生物杀菌剂进行研究。[方法]采用平板对峙法对菌株进行亲和性测定;通过测定微生物发酵滤液对灰霉病原菌孢子、菌丝等影响,确定最佳配比;盆栽试验确定制剂防病促生效果。[结果]菌株D1、BSD-2、ch2-22具有协同增效作用,发酵液以体积比5∶4∶1配比,活芽孢数为1.5×10~7 cfu/mL时,对黄瓜灰霉病防治效果达86.25%,并具有促生作用。[结论]复合微生物杀菌剂对黄瓜灰霉病具有较强防病促生作用,具有开发成新型生物农药的潜力。