代代花总黄酮对3T3-L1细胞增殖活性的影响

本文研究了代代花总黄酮抑制3T3-L1细胞增殖及诱导其凋亡的作用。不同浓度的代代花总黄酮作用于3T3-L1细胞24 h之后,采用MTT法检测代代花总黄酮对细胞增殖的抑制作用;使用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率;PI标记法检测了代代花总黄酮对细胞周期的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;荧光定量PCR检测了凋亡相关基因的m RNA水平表达。结果表明,高浓度(300μg/m L和400μg/m L)的代代花总黄酮可显著抑制3T3-L1细胞增殖,细胞的抑制率分别为38%和63%,且细胞形态发生了明显变化,并显著升高了细胞内ROS浓度。细胞凋亡实验结果显示,代代花总黄酮可诱导3T3-L1细胞早期凋亡和晚期凋亡,100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L代代花总黄酮处理组的细胞早期凋亡率分别为4.6%、15.7%和22.5%;晚期凋亡率分别为14.4%、8.3%和32.2%。而细胞周期实验则表明,处理后3T3-L1细胞G0/G1期细胞数比例从58.9%下降到51.4%,而相应的S期细胞数比例呈小幅度增加,G2/M期细胞数比例变化不明显。凋亡相关基因p21及p53的m RNA表达明显升高及促凋亡基因bax与抗凋亡基因bcl-2比例的升高使3T3-L1进入细胞凋亡程序。     

3T3-L1前脂肪细胞在功能性成分评价中的应用

脂肪细胞的增殖与分化异常是导致人类肥胖、心血管疾病和Ⅱ型糖尿病等的发生的主要原因,而3T3-L1前脂肪细胞是国际上公认的研究脂肪代谢的细胞模型,因此脂肪细胞的增殖与分化已成为研究的热点。本文主要论述3T3-L1前脂肪细胞的体外培养、增殖与分化及调控及其在功能性成分的评价中的应用,以期为预防和治疗肥胖及糖尿病等并发症提供一定的理论参考。     

白藜芦醇通过降低LYRM1 mRNA表达抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖

目的：观察白藜芦醇（resveratrol,Res）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响,并探讨其机制。方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行培养,分别设置对照组以及25、50、75、100 μmol/L的Res干预组,噻唑蓝比色法观察不同剂量干预对细胞增殖活性的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中LYR Motif containing 1（LYRM1）基因mRNA的表达情况;Western blotting实验检测细胞中促凋亡蛋白Bak和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果：Res干预可使3T3-L1前脂肪细胞增殖活性降低;细胞中LYRM1 mRNA水平降低,Bak蛋白表达含量升高,Bcl-2蛋白表达含量降低,均具有剂量依赖效应。结论：Res可以抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,这可能与Res降低细胞内LYRM1 mRNA表达,影响线粒体功能并启动凋亡程序有关。     

苦瓜提取物抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪沉积研究

研究表明苦瓜具有一定减肥效果,但其确切分子机理尚未阐明,因此本实验研究苦瓜正丁醇提取物抑制脂肪沉积活性及其作用机制。针对3T3-L1脂肪细胞,利用噻唑蓝法检测苦瓜正丁醇提取物对细胞活性影响;采用油红O染色检测苦瓜正丁醇提取物对细胞脂肪沉积的影响;利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测苦瓜提取物对脂肪沉积转录因子和脂肪酸代谢关键基因mRNA转录水平调控作用。结果表明：相对空白对照组,苦瓜提取物能明显减少3T3-L1细胞脂肪沉积,抑制转录因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表达,对脂肪酸代谢基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表达抑制明显（P＜0.05）。总之,苦瓜正丁醇提取物对脂肪沉积具有一定抑制作用,可能通过下调脂肪沉积相关基因mRNA转录水平表达起作用。     

芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

发酵糙米乙醇提取物改善3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢

探讨发酵糙米乙醇提取物(FBREE)对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响。高浓度葡萄糖加胰岛素刺激诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。不同浓度FBREE处理细胞24 h后检测培养液中葡萄糖,游离脂肪酸(FFA),甘油,甘油三酯(TG),肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素6(IL-6)水平。实时定量PCR检测细胞氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ),CAATT增强子结合蛋白(C/EBPα),固醇调节元件结合蛋白(SREBP1c),葡萄糖转运蛋白4(GLUT4),脂肪酸结合蛋白(a P2),蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B),葡萄糖转运蛋白(GLUT-4),激素敏感脂肪酶(HSL)和TNF-α,IL-6,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和C反应蛋白(CRP)的m RNA表达。FBREE具有促进细胞葡萄糖利用,降低细胞内TG含量,减少FFA及甘油溢出的能力。与模型组细胞相比,高浓度FBREE(100μg/m L)处理的细胞中TG和FFA水平分别下降52.44%和37.83%。FBREE同时能减少模型细胞TNF-α和IL-6的分泌,高浓度FBREE(100μg/m L)分别抑制TNF-α(21.18%),IL-6(31.39%),MCP-1(40.09%)和CRP(41.73%) mRNA表达。此外,FBREE有效降低细胞中PPARγ,C/EBPα,SREBP1c,PTP1B,a P2和HSL的m RNA表达,上调GLUT-4m RNA表达。结果提示,FBREE能有效促3T3-L1脂肪细胞消耗葡萄糖,分解TG,减少FFA和甘油溢出;调控细胞糖、脂代谢来改善胰岛素抵抗,并降低胰岛素抵抗所致炎症水平的升高。     

胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

为建立胰岛素抵抗脂肪细胞模型,以3T3-L1前脂肪细胞为研究材料,通过3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素联合诱导其分化为3T3-L1脂肪细胞,通过葡萄糖消耗实验研究胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的作用浓度和时间关系,发现10-7mmol/L胰岛素诱导处理48h是3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的最适条件,该细胞模型的胰岛素抵抗状态可维持48h。通过高浓度胰岛素成功诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,具有建模周期短、重复性好、操作简便的优点,该细胞模型可以用于抗胰岛素抵抗天然产物的筛选研究。     

素馨花水提物及其主要成分对3T3-L1细胞成脂分化的影响

该研究探讨素馨花水提物（WE）及其化学成分在3T3-L1前脂肪细胞上的降脂作用。通过将3T3-L1细胞诱导为成熟脂肪细胞,油红Ｏ染色定量和检测甘油三酯（TG）含量判断素馨花样品对脂滴的抑制作用;液质联用仪分析WE中化学成分;MTT检测素馨花及其成分对3T3-L1细胞增殖的影响;Western Blot检测AMPK、C/EBPα、FAS、ACC、CPT1、Bax、Bcl-2等蛋白表达。结果发现,WE能剂量依赖性抑制脂滴形成,其中高浓度WE（500 µg/mL）能降低中性脂质含量23.59%,降低TG含量30.20%,在脂肪积累早期作用最显著,并证明其活性成分主要是橄榄苦苷,含量为13.77%。WE及橄榄苦苷能激活AMPK（123.19%和115.98%）和其下游靶点ACC（451.06%和1 050.0%）的磷酸化、下调其下游靶点FAS（81.72%和60.50%）的蛋白表达,减少脂肪形成,提高CPT1（164.84%和292.19%）蛋白的表达,加快脂肪酸氧化;抑制C/EBPα（68.97%和34.57%）的表达,影响3T3-L1细胞分化;上调Bax（154.60%和139.37%）、下调Bcl-2（41.10%和45.62%）蛋白的表达,诱导脂肪细胞凋亡。结果提示,WE能在3T3-L1细胞分化过程早期抑制细胞生长、分化和脂肪合成并促进脂肪酸氧化从而有效抑制脂质积累,机制上可能通过调控AMPK和Bax/Bcl-2通路。     

发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂代谢的影响

研究乳酸菌发酵大麦提取物(LFBE)对3T3-L1前脂肪细胞分化及其脂代谢的影响与作用途径。利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum dy-1)发酵大麦获得LFBE,采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量;凯氏定氮法测定蛋白质含量与苯酚硫酸法测定多糖含量;采用CCK-8法检测细胞增殖能力和油红O染色法分析前脂肪细胞的分化程度;采用Realtime PCR法检测LFBE对脂代谢关键基因转录水平的调控作用。结果表明,与未发酵大麦提取物相比,LFBE中总酚含量增加了20.88%;LFBE中蛋白质含量从发酵前的13.93%增加至34.94%;多糖含量从未发酵时的64.94%下降至35.43%。与未发酵大麦提取物组相比,LFBE能够有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长,其IC_(50)约为560μg/mL;与模型组和未发酵大麦提取物组相比,400μg/mL LFBE能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,抑制率达到58.85%。与模型组相比,LFBE能显著抑制脂代谢关键基因C/EBPα、PPAR-γ、SREBP-1c、PTP1B和aP2的mRNA表达水平,上调GLUT4的mRNA表达水平(p0.05)。LFBE可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并通过调节脂代谢相关基因的转录水平抑制其分化,表明其可能具有预防肥胖的作用。     

猫豆乙醇提取物对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

探讨猫豆乙醇提取物(MPEE)对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响。用含高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素的DMEM培养基制备胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞模型。模型细胞经不同浓度MPEE处理24 h后检测培养液中的葡萄糖消耗量、游离脂肪酸(FFA)、甘油、三酯甘油(TG)及肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素6(IL-6)水平。实时定量PCR(q RT-PCR)检测细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT-4)、激素敏感脂肪酶(HSL)和炎性介质[TNF-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、C反应蛋白(CRP)]的m RNA表达。MPEE可促胰岛素抵抗模型细胞对葡萄糖的消耗,降低细胞中TG含量,减少FFA和甘油溢出。同时,MPEE还能抑制模型细胞TNF-α和IL-6分泌,及炎性介质(TNF-α、IL-6、MCP-1、CRP)的m RNA表达。此外,MPEE能上调细胞中GLUT-4的表达,并降低HSL的m RNA表达。结果显示,MPEE可有效刺激3T3-L1脂肪细胞消耗葡萄糖,促TG分解,减少FFA和甘油的溢出。调控细胞糖、脂代谢来改善胰岛素抵抗,并降低胰岛素抵抗发生时的炎症水平。     

大叶紫薇总三萜对脂肪细胞葡萄糖和脂肪代谢的影响

为探讨大叶紫薇中总三萜对3T3-L1细胞葡萄糖和脂肪代谢的影响,探讨大叶紫薇中总三萜可能的降血糖作用机制。通过检测大叶紫薇中总三萜对3T3-L1葡萄糖的消耗,油红O染色并通过比色定量分析脂肪含量。结果表明:大叶紫薇中总三萜具有促进脂肪细胞葡萄糖消耗及抑制脂肪形成的作用。大叶紫薇中总三萜具有降血糖的作用。     

不同茶多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用比较

本实验利用小鼠3T3-L1前脂肪细胞对绿茶多糖（green tea polysaccharides,GTP）、红茶多糖（black tea polysaccharides,BTP）和乌龙茶多糖（oolong tea polysaccharides,OTP）的减肥作用进行评价。使用气相色谱对GTP、BTP、OTP的单糖组成进行分析。采用噻唑蓝染色法测定3?种茶多糖（tea polysaccharides,TPs）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活力的影响。使用流式细胞仪检测3?种TPs对3T3-L1前脂肪细胞细胞周期的影响。采用传统“鸡尾酒”法诱导3T3-L1细胞分化成脂后,测吸光度并计算其分化率。采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶（glycerol phosphate oxidase-peroxidase,GPO-PAP）法测定细胞中甘油三酯（triglyceride,TG）含量的变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术测定与脂质代谢相关基因的表达量。结果显示3?种TPs均能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化（P＜0.05）。添加100?μg/mL的TPs能使细胞分化率显著下降至（62.00±6.61）%（GTP）、（82.95±4.25）%（BTP）、（97.24±5.80）%（OTP）。另外,在细胞培养至第5天检测表明,这3 种TPs显著促进G0/G1期细胞数量的累积,细胞比例分别为（68.52±2.28）%（GTP）、（67.11±1.68）%（BTP）、（59.69±1.35）%（OTP）。RT-PCR分析结果显示TPs可以调控相关脂肪细胞因子的表达。在本研究中,在3T3-L1前脂肪细胞中GTP的减肥作用强于BTP和OTP。TPs的加入上调脂联素的表达从而激活腺苷酸活化蛋白激酶信号通路调控相关脂肪细胞因子的表达,并最终抑制TG的合成与3T3-L1前脂肪细胞的分化。     

大叶紫薇总三萜对3T3-L1细胞葡萄糖和脂肪代谢的影响

为了解大叶紫薇中总三萜对3T3-L1细胞葡萄糖和脂肪代谢的影响,研究了大叶紫薇中总三萜可能的降血糖作用机制.采用葡萄糖氧化酶法检测3T3-L1葡萄糖的消耗作用,使用油红O染色并通过比色定量分析3T3-L1细胞的脂肪含量.结果表明:大叶紫薇中总三萜具有促进脂肪细胞葡萄糖消耗、抑制脂肪形成及降血糖的作用.     

白藜芦醇对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢的影响

目的：研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对胰岛素抵抗状态下3T3-L1 脂肪细胞葡萄糖代谢的影响,并探讨其分子机制。方法：用地塞米松诱导3T3-L1 细胞建立胰岛素抵抗模型,用不同剂量Res 进行干预,添加或不添加胰岛素刺激,测定各组细胞的葡萄糖消耗量,实时荧光定量PCR 检测各组细胞的脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)和抵抗素(resistin)mRNA 表达,Western blotting 检测腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的蛋白质表达及磷酸化水平。结果：各组细胞经胰岛素刺激,0.01、0.1、1μmol/L 的Res 组的葡萄糖消耗量分别是对照组的1.3、1.5、1.4 倍(P ＜ 0.05),添加Res 可促进脂联素、瘦素mRNA 的表达,降低抵抗素mRNA表达,增加AMPKα的磷酸化水平。结论：Res 可以明显改善胰岛素抵抗状态下3T3-L1 细胞葡萄糖代谢。其机制可能是通过增加脂联素、瘦素表达,降低抵抗素表达从而介导AMPKα磷酸化实现的。     

Tea catechins modulate the glucose transport system in 3T3-L1 adipocytes

In this study, we investigated the effects of tea catechins on the translocation of glucose transporter (GLUT) 4 in 3T3-L1 adipocytes. We found that the ethyl acetate fraction of green tea extract, containing abundant catechins, most decreased insulin-induced glucose uptake activity in 3T3-L1 cells. When the cells were treated with 50 μM catechins in the absence or presence of insulin for 30 min, nongallate-type catechins increased glucose uptake activity without insulin, whereas gallate-type catechins decreased insulin-induced glucose uptake activity. (-)-Epicatechin (EC) and (-)-epigallocatechin (EGC), nongallate-type catechins, increased glucose uptake activity in the dose- and time-dependent manner, whereas (-)-catechin 3-gallate (Cg) and (-)-epigallocatechin 3-gallate (EGCg), gallate-type catechins, decreased insulin-induced glucose uptake activity in the dose- and time-dependent manner. When the cells were treated with 50 μM catechins for 30 min, EC and EGC promoted GLUT4 translocation, whereas Cg and EGCg decreased the insulin-induced translocation in the cells. EC and EGC increased phosphorylation of PKCλ/ζ without phosphorylation of insulin receptor (IR) and Akt. Wortmannin and LY294002, inhibitors for phosphatidylinositol 3'-kinase (PI3K), decreased EC- and EGC-induced glucose uptake activity in the cells. Cg and EGCg decreased phosphorylation of PKCλ/ζ in the presence of insulin without affecting insulin-induced phosphorylation of IR, and Akt. Therefore, EC and EGC promote the translocation of GLUT4 through activation of PI3K, and Cg and EGCg inhibit insulin-induced translocation of GLUT4 by the insulin signaling pathway in 3T3-L1 cells.