PEG/盐双水相体系萃取小麦酯酶的研究

采用PEG/NaH2PO4双水相体系分离提取小麦中的植物酯酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度、pH、无机盐类型及浓度对萃取效果的影响进行了分析.确定了双水相组成体系为:23%PEG1000(质量比)和16%NaH2PO4(质量比),pH=4,在此体系中小麦的植物酯酶主要分布在上相,分配系数K=4.33,纯化倍数达到2.85,回收率95%.     

双水相体系萃取粗状假丝酵母脂肪酶的研究

通过比较不同无机盐与PEG组成双水相体系对粗状假丝酵母脂肪酶的萃取效果,系统地研究了脂肪酶在PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配行为,考察了PEG:分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度和体系pH对脂肪酶分配系数和萃取率的影响,并通过响应面分析法进一步优化了萃取条件.结果表明最佳萃取条件为:PEG2000浓度18.3%,(NH_4)_2SO_4浓度17.4%,pH8.0,室温条件下其分配系数可达到13.3,纯化倍数达到1.53,萃取率达到92.2%.     

双水相体系萃取超氧化物歧化酶(SOD)的研究

采用PEG/硫酸铵双水相体系对啤酒酵母中SOD进行萃取研究。以酶的纯化倍数和回收率为指标,探讨了无机盐种类、PEG分子量、PEG浓度、硫酸铵浓度以及pH对SOD萃取效果的影响。结果表明:PEG4000浓度为14%,硫酸铵浓度为24%,pH 7.5时,下相中SOD回收率达73.4%,纯化倍数达1.76。回收率较PEG/磷酸钾盐缓冲液体系高了37.97%,纯化倍数较PEG/磷酸钾盐缓冲液体系高了21.38%。     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

响应面法优化黑豆酯酶的双水相萃取工艺

采用双水相萃取技术对黑豆酯酶进行分离纯化,优化黑豆酯酶在聚乙二醇4000/硫酸铵双水相体系中的分配行为。首先,制作PEG4000/(NH4)2SO4双水相相图;然后考察PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系p H值3个因素对黑豆酯酶萃取率的影响;最后采用Box-Behnken中心组合试验设计对黑豆酯酶双水相萃取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:PEG4000质量分数为28%、萃取体系p H为7.30、(NH4)2SO4质量分数为17%。此条件下黑豆酯酶萃取率为(93.95±0.24)%,黑豆酯酶酶比活力达到7.893 U/mg。与粗酶液纯度相比,黑豆酯酶双水相萃取工艺提纯倍数为7.363倍。该结果为黑豆酯酶的提纯和进行有机磷农药残留的检测提供科学依据。     

双水相萃取法提取米糠脂肪酶研究

该实验采用双水相萃取法提取米糠脂肪酶,通过确定米糠脂肪酶最佳提取条件,为日后大规模生产提供理论依据。用蒸馏水对米糠脂肪酶粗提取实验,通过单因素实验确定最佳提取工艺参数:料液比1∶15,提取温度40℃,提取pH 7.0,提取时间1 h。双水相萃取对粗酶液纯化实验,对影响双水相萃取各种因素进行探讨,并通过正交实验优化提取条件,于PEG浓度22.5%,硫酸铵浓度20%,pH 7.0条件下进行双水相萃取,脂肪酶纯化倍数最高。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

盐析和双水相萃取法纯化细菌木聚糖酶的比较

通过对比硫酸铵盐析和双水相萃取两种木聚糖酶初级纯化方法的纯化效率,确定更加适于Paenibacillus sp.B1709木聚糖酶初级纯化的方法。结果显示,双水相萃取较盐析具有更好的木聚糖酶纯化回收效果,并对其主要实验参数进行优化,得出双水相萃取最佳条件为:聚乙二醇(PEG)4000 Da,浓度22%,最佳成相盐(NH₄)₂SO₄,最适浓度18%,最适pH6.0,NaCl 2%。在此条件下,可实现分配系数9.90,酶活力回收率为90.84%,纯化倍数6.13。实验结果显示双水相萃取相较于盐析在大规模纯化尤其针对复杂纯化目标时具备一定技术的优势。     

双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

双水相纯化淀粉糖化酶的影响因素研究

以四种不同的淀粉糖化酶发酵液为研究对象,用纯化倍数作为参考指标。在单因素实验基础上,选取四种分子量的聚乙二醇(PEG600、PEG800、PEG1000、PEG2000)、三种盐(MgSO4、(NH4)2SO4、KH2PO4)和四种发酵的淀粉糖化酶酶液(米根霉、根霉、酒精酵母、酯化酵母)为自变量。得到最佳的提取条件为:米根霉在PEG1000浓度为15%(均为质量浓度),MgSO4浓度为22.86%,纯化倍数可达3.35;其酒精酵母和酯化酵母在PEG1000浓度均为15%,(NH4)2SO4浓度分别为15.73%和13.33%,得到纯化倍数为1.82、1.50;根霉在PEG2000浓度为15%,盐(NH4)2SO4添加14.37%,纯化倍数达2.07。该方法在淀粉糖化酶含量有差异的情况下,能保存酶活去除杂蛋白,分离出淀粉糖化酶。     

应用响应面法优化木聚糖酶的双水相萃取条件

采用响应面分析法优化短小芽孢杆菌木聚糖酶在PEG2000/K2HPO4双水相体系中的萃取条件。确定最佳萃取条件为NaCl 6%、PEG 2000 18%、K2HPO4 10%。在最佳萃取条件下得木聚糖酶分配系数为3.38,蛋白分配系数为0.13,纯化倍数为7.93,回收率为84.24%。考察了萃取酶液的部分酶学性质,其最适温度为50℃,最适pH为7.0。     

响应面法优化植物乳杆菌素的双水相萃取条件

采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系研究发酵上清中植物乳杆菌素的萃取条件.通过单因素试验考察不同PEG分子质量、PEG浓度、硫酸铵浓度、离子强度等对细菌素纯化系数及萃取率的影响.在此基础上,用响应面法对系统进行优化.试验结果表明,植物乳杆菌素萃取的最佳条件为PEG4000-硫酸铵体系,PEG 18%,硫酸铵20%、氯化钠1%,萃取pH 3.75.     

双水相体系萃取纯化紫甘蓝色素

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系萃取纯化紫甘蓝中的花青素。通过单因素实验优化了硫酸铵、PEG、粗提液的质量分数和体系的pH,通过正交实验确定各因素对花青素选择性系数的影响程度,粗提液的质量分数 pH硫酸铵的质量分数 PEG的质量分数。实验最佳提取条件为:粗提液的质量分数为12%,硫酸铵质量分数为20%,pH为3.5,PEG的质量分数为15%,花青素的选择性系数为750.26。     

PEG/盐双水相萃取食用色素柠檬黄的研究

采用PEG/盐双水相体系萃取食用色素柠檬黄。考察了成相物质对柠檬黄吸光度的影响,在此基础上考察了PEG相对分子量、PEG浓度、盐的种类及浓度、pH对萃取效果的影响,确定了萃取柠檬黄的最佳条件:18%PEG2000,15%(NH4)2SO4,pH为6。该体系对柠檬黄色萃取效果不受外加无机盐的影响,但表面活性剂的存在对萃取效果有较大影响。     

双水相萃取长鱼蛋白酶的工艺研究

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系以分离纯化长鱼蛋白酶。通过研究不同成相盐及其浓度、不同PEG分子量及其浓度和不同p H对双水相萃取长鱼蛋白酶的影响。结果表明,最优化的双水相体系为25%PEG1000、20%(NH4)2SO4和p H7.0,在此条件下长鱼蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为90.5%和4.40。     

双水相法萃取黑曲霉C2J6脂肪酶条件的优化

为提高黑曲霉C2J6发酵液中脂肪酶的分离纯化效率,采用PEG2000/(NH_4)_2SO_4双水相法进行萃取。探讨PEG2000质量浓度、(NH_4)_2SO_4质量浓度、p H、Na Cl质量浓度对脂肪酶萃取的影响,利用Box-Behnken响应面法优化萃取条件。结果表明:在PEG2000质量浓度35%、(NH_4)_2SO_4质量浓度21.60%、p H 6.90的条件下,脂肪酶萃取率高达85.92%,酶活力47.53 U/mL,比粗酶活力提高了3.02倍。此法简捷、高效,为黑曲霉脂肪酶的进一步纯化奠定基础。     

双水相萃取鼠李糖乳杆菌生物胺氧化酶条件的优化

采用聚乙二醇/硫酸铵体系对生物胺氧化酶进行萃取。通过聚乙二醇的分子质量和质量分数、(NH4)2SO4的质量分数、体系p H值以及温度单因素实验,初步确定最优值,再用Box-Behnken响应面进一步优化实验并进行结果分析,得到最佳实验条件为:质量分数为25%的PEG2000、质量分数为10%的(NH4)2SO4、p H值为7.5、温度为30℃,实验的萃取率为96.5%,纯化倍数为2.38。     

生姜蛋白酶的双水相法萃取研究

以生姜为原料,研究双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件。利用单因素试验与正交试验进行优化,得到最佳萃取方案为PEG分子量为4000,PEG浓度为20%,缓冲盐pH为6.5,缓冲盐浓度为10%。此双水相体系的上相酶活回收和纯化倍数都是最高,分别达279.05%和1.86。     

双水相萃取技术提取牛乳过氧化物酶

利用双水相萃取技术从牛乳乳清中提取乳过氧化物酶。以乳过氧化物酶酶活回收率和纯化倍数为指标,研究双水相体系的盐相、PEG分子质量、PEG浓度、硫酸镁含量及体系pH值对乳过氧化物酶分布在上相或下相的影响。研究结果表明,当双水相体系的pH值为8.5时,选择10%硫酸镁和16%PEG 6 000,可将乳过氧化物酶富集在盐相,乳过氧化物酶的酶活回收率和纯化倍数分别为153.59%和1.99倍。