食品中沙门氏菌分离、鉴别方法的比较研究

目的筛选用于分离、鉴别食物样本沙门氏菌的适宜方法。方法比较了3种沙门氏菌显色培养基与亚硫酸铋(BS)琼脂、HE琼脂和木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂传统培养基的检测敏感性、特异性、准确性和食品样本的适用性。结果 3种沙门氏菌显色培养基对杂菌的抑制效果不同,但检测结果直观,检测灵敏度高;BS琼脂方法分离沙门氏菌特异性强;HE琼脂及XLD琼脂分离沙门氏菌,当样品污染菌数量多时,鉴别结果易受影响。结论建议使用传统培养基分离、鉴别沙门氏菌时,补充使用一种抑制杂菌效果好的沙门氏菌显色培养基,以提高沙门氏菌的检测效率。     

不同分离培养基检测食品中沙门氏菌效果的比较

目的基于GB 4789.4-2010沙门氏菌检验标准,比较2种沙门氏菌显色培养培养基、亚硫酸铋琼脂培养基(BS)、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基(XLD)等4种常用分离培养基对沙门氏菌的检测结果的影响。方法通过4种分离培养基对沙门氏菌的回收率和最低检出限的影响,添加柠檬酸杆菌和奇异变形杆菌对分离结果的影响,以及不同样品间检测效果的比较,对不同培养基的检测结果进行统计。结果 2种沙门氏菌显色培养基和XLD培养基的检测效果无差异,BS次之。结论在实际应用中,需要根据样品的污染程度选择单独或联合使用分离培养基,选择不同的前增菌培养时间,以提高检测的准确性。     

不同沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定

使用3种沙门氏菌(猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌)和2种干扰菌(弗氏柠檬酸杆菌和奇异变形杆菌)分别接种分离培养基,观察生长和显色情况。研究沙门氏菌和干扰菌在常规分离培养基BS、XLD、DHL、HE、BGA和显色培养基CAS上的形态特征及生化试验结果,比较分离鉴别效果。研究发现甲型副伤寒沙门氏菌具有延迟产H2S特性,弗氏柠檬酸杆菌和奇异变形杆菌均有产H2S现象,显色培养基CAS的鉴别效果最好,BGA的分离鉴别效果最差。在实际检测工作中,不能以是否产H2S作为鉴定沙门氏菌的唯一依据,利用显色培养基可以显著提高检测效率和准确度。     

铜绿假单胞菌对食品中沙门氏菌检测 干扰作用的评价

目的评价铜绿假单胞菌作为干扰菌对食品中沙门氏菌准确检出的影响。方法在无菌奶粉样品中人工污染不同浓度的沙门氏菌(1~100 CFU/10 g)和铜绿假单胞菌(0~10~6 CFU/10 g),参照GB4789.4-2010进行检测,同时利用全自动酶联免疫检测系统(VIDAS30)和全自动病原微生物检测系统(BAX Q7 System)对样品进行快速筛查,以此综合评价铜绿假单胞菌作为干扰菌对沙门氏菌检测过程的影响。结果在不同浓度的铜绿假单胞菌干扰下,VIDAS和BAX系统均能够准确筛查出沙门氏菌阳性样品;使用的3种选择性平板对沙门氏菌和铜绿假单胞菌的分离效果存在差异,XLD平板优于BS平板和科玛嘉CAS平板,其中铜绿假单胞菌和沙门氏菌在科玛嘉CAS平板上具有相似的显色情况,直接影响沙门氏菌的检测结果;BPW前增菌8 h沙门氏菌的平板分离效果优于前增菌18 h。结论研究表明,铜绿假单胞菌在选择性平板分离步骤时对沙门氏菌具有干扰作用。联合使用2种以上沙门氏菌选择培养基,才能保证沙门氏菌的准确检出。VIDAS和BAX可作为沙门氏菌快速筛查的可靠技术手段。     

显色培养基上沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定

研究比较沙门氏菌显色培养基(CAS)上干扰菌与沙门氏菌的区别,提高沙门氏菌的分离鉴定效率。使用沙门氏菌和7株干扰菌(铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌、施氏假单胞菌、荧光假单胞菌、斯氏普罗威登斯菌、摩氏摩根菌摩根亚种、粪产碱菌亚种)分别接种CAS、BS、XLD和HE培养基,观察菌落形态特征,分析生化试验结果,考察TTB和SC选择性增菌液对7株干扰菌的选择效果。7株干扰菌在CAS培养基上都是紫色菌落,仔细辨认大部分都可与沙门氏菌区分,无法从菌落形态区分的恶臭假单胞菌和荧光假单胞菌通过在BS上的生长情况或生化试验可以排除,TTB和SC选择性增菌液对7株干扰菌的选择效果各不相同,提示检测过程中TTB和SC两种增菌液须同时使用,相互补充,提高检出率。     

进口肉类中恶臭假单胞菌的分离与鉴定

目的选择具有较高选择性的培养基,分离与鉴定进口肉类中恶臭假单胞菌。方法参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学沙门氏菌检验》、SN/T2099-2008《进出口食品中绿脓杆菌检测方法》,根据VITEK2显示的结果做生化鉴定。结果在选择性较高的沙门氏菌显色培养基上生长的菌落形态与沙门氏菌极为相似,VITEK2显示结果为恶臭假单胞菌,后经生化鉴定,结果与VITEK2一致,为恶臭假单胞菌。结论沙门氏菌显色培养基难以区分假单胞菌,但是亚硫酸铋琼脂(bismuth agar,BS)却可以明显区分,所以在日常检测过程中建议不要省去BS平板,在配制BS平板时需严格按照说明进行,以保证实验效果。     

食品沙门氏菌现行国内外标准中选择性增菌和分离的等效性评估

目的评估5种现行国内与国际食品沙门氏菌标准中选择性增菌步骤的等效性。方法按照GB4789.28—2013的方法使用沙门氏菌参比菌株验证5种沙门氏菌选择性增菌液亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）、罗伯特增菌液（RV）、穆勒-考夫曼四硫酸盐新生霉素增菌液（MKTTn）、亚硒酸盐煌绿增菌液（SBG）和5种选择性琼脂平板沙门氏菌显色琼脂平板（CAS）、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂平板（XLD）、木糖赖氨酸十四烷基硫酸钠琼脂平板（XLT4）、亚硫酸铋琼脂平板（BS）和赫氏肠道菌琼脂平板（HE）的生长率（PR）和特征性生长;按照ISO 16140—2:2016和传统统计学方法设计路径,经高污染样品检测比较5种选择性增菌液和2种选择性琼脂平板的组合方法的敏感性、相对真值和可接受限值,评估10种增菌分离组合的分离敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果 SC对猪霍乱和猪霍乱沙门氏菌孔成道夫变种存在无效增殖;CAS和XLD识别伤寒和非伤寒、硫化氢差异表达沙门氏菌能力明显优于XLT4、HE、BS;84件样品（畜肉22件、禽肉32件和水产品30件）经5种增菌组合确认25件阳性（...     

不同选择性培养基中沙门氏菌和干扰菌的分离鉴定

目的提高食品中沙门氏菌的检测水平。方法将4种沙门氏菌(甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门菌双相亚利桑那亚种、沙门氏菌食品分离菌株)和6种干扰菌(铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、奇异变形杆菌、粘质沙雷氏菌和恶臭假单胞菌)分别接种到不同选择性培养基中,观察菌落形态特征及显色情况,结合生化实验和血清学实验结果比较不同选择性培养基的分离鉴定效果。结果研究发现沙门显色培养基的分离鉴定效果最好,甲型副伤寒沙门氏菌不产H_2S,而弗氏柠檬酸杆菌和奇异变形杆菌这2种干扰菌产H_2S,肠炎沙门菌双相亚利桑那亚种在沙门显色培养基中的菌落形态区别于其他沙门氏菌。结论在实际检测过程中,不能将产H_2S作为判定是否检出沙门氏菌的唯一标准。在挑取和鉴定典型、可疑菌落时必须结合不同的选择性平板和显色平板进行综合分析,不能只从单一平板上的菌落形态下结论。     

沙门氏菌在不同品牌显色培养基上的对比分析

目的对比分析不同品牌的沙门氏菌显色培养基,评判其特异性、选择性和灵敏度。方法采用不同种的沙门标准菌株及样品分离菌株,分别划线不同品牌沙门氏菌显色培养基,通过观察菌落形态,以验证其特异性、选择性、灵敏度(假阴性和假阳性)情况。结果在特异性与选择性验证试验中, A、B、C品牌沙门氏菌显色培养基不易区分恶臭假单胞菌、铜绿假单胞菌,容易与鼠伤寒沙门氏菌混淆;在假阴性试验中, A、B、C、D、E、F6种不同品牌沙门氏菌显色培养基均无差异;在假阳性试验中D、E、F品牌沙门氏菌显色培养基可以有效区别常见干扰菌泛生菌属、肺炎克雷伯肺炎亚种和奇异变形杆菌等的影响,出现假阳性的概率相对较低;亚硫酸铋琼脂平板培养基可以在实验中起到很好的排除干扰作用。结论不同品牌的同种培养基的选择性、准确率差异较大,质量优劣存在差异,实用性也有所不同,在实验时尽量选择不同品牌的培养基,避免因培养基的质量差异而出现检验结果的错判。     

能力验证中沙门氏菌的分离鉴定与血清分型

目的通过参加NIFDC-PT-098乳粉中沙门氏菌检验的能力验证,提高本实验室的检测能力,增强实验室竞争力。方法依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法,对2份样品中的沙门氏菌进行分离和血清学鉴定。并以全自动荧光免疫分析系统(MINI VIDAS)进行快速初筛,利用全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)对分离出的疑似菌进行生化鉴定。结果编号CODE423检出鼠伤寒沙门氏菌,其血清分型为O:4,5,12,H:I;1,2。编号CODE484未检出。结论本次能力验证获得满意结果,发现以国标法为基准,优先选用沙门氏菌属显色培养基平板和XLD平板为参照,同时使用VITEK2和MINI VIDAS作为辅助进行检测,综合这几种方法可确保实验结果的准确性,这为以后检验使用辅助方法检测提供了参考依据。同时本次能力验证也促进了实验室保持较高的检验水平。     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

5种分离培养基对不同样品的分离效果比较

对目标菌和非目标菌在5种分离培养基的生长特性、生理生化特性进行测试,并分别对280份实验样品进行敏感性和特异性等方面的测试,根据测试结果来评价各个培养基对不同的样品中沙门氏菌的分离效果。实验结果显示,XLD分离培养基比较适合食品样品中沙门氏菌的分离;SS培养基比较适合粪便样品中沙门氏菌的分离;BS、DHL培养基对于2种样品的分离效果相当;而CAS分离培养基对于2种样品中沙门氏菌的敏感性和特异性均比较高,对于食品样品,特异性更高,对于粪便样品,其敏感性更高。提示在实际检测中应根据样品的性质选择分离培养基或者联合使用培养基,以提高实验的准确度和阳性检出率。     

一株沙门氏菌Ⅲb 60：r：e，n，x，z15的分离、鉴定及其检测方法比较

为提高沙门氏菌Ⅲb的检测效率,按照标准GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》对3个巧克力样品中沙门氏菌进行分离鉴定,同时采用BAX Q7系统、VITEK2系统和RiboPrinter系统对检测结果进行确证,并对其不同的增菌、分离条件进行比较分析。结果表明：只有样品0716检出沙门氏菌Ⅲb 60：r：e,n,x,z15,且存在奇异变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌和摩根氏菌摩根亚种等干扰菌。亚硒酸盐胱氨酸（selenite cystine,SC）增菌液适合菌群结构简单的样品增菌;四硫磺酸钠煌绿增菌液（tetrathionate broth,TTB）和沙门菌增菌液体培养基（rappaport-vassiliadis,RV）则适合沙门菌含量较高,菌群结构复杂的样品分离沙门菌,且TTB较RV更适合沙门氏菌Ⅲb的增菌。3种全自动检测方法均分别得到与传统方法一致的检测结果;BAX Q7系统操作简便,适合巧克力样品经SC选择性增菌后初筛;VITEK2系统和RiboPrinter系统均能够对该阳性菌鉴定到种水平,且后者能给出血清型。因此,4种方法检测结果能够相互验证,该阳性样品预增菌后通过TTB增菌,木糖赖氨酸脱氧胆盐（xylose lysine desoxycholate,XLD）琼脂或沙门显色培养基分离后,经RiboPrinter系统鉴定能够更高效地筛选得到沙门氏菌Ⅲb 60：r：e,n,x,z15。     

荧光酶免疫分析仪-微生物鉴定仪在水产品沙门氏菌检测中的应用

采用全自动荧光酶免疫分析仪进行初筛,全自动微生物鉴定仪进行阳性菌株的生化性状鉴定,建立了水产品沙门氏菌的快速检测方法。经过48h增菌之后,VIDAS法可在45min之内出具结果,阳性菌株经选择性培养基分离及纯化后根据VITEK检测结果判定是否属于沙门氏菌。联用法的灵敏度为菌悬液浓度≥103cfu/mL,一般染菌样品经48h增菌之后菌悬液浓度均能达到106cfu/mL以上。采用联用法与国标法对参考菌株和124种水产品进行检测,结果完全一致。联用法快捷、有效,适用于水产品沙门氏菌的检测。     

3种快速检测柳州螺蛳粉中热损伤沙门氏菌方法的比较分析

目的比较实时荧光PCR法、全自动免疫分析仪法(vitek immune diagnostic assay system, VIDAS)和环介导等温扩增法(loop-mediatedisothermalamplification, LAMP)检测柳州螺蛳粉中热损伤沙门氏菌。方法以预包装柳州螺蛳粉为样品,利用3种热损伤沙门氏菌以人工添加的方式模拟污染样品,污染水平为4CFU/25 g和12 CFU/25 g,通过一步增菌和二步增菌后分别用实时荧光PCR、VIDAS和LAMP检测,并与国家标准法比较。结果当3种快速检测方法对只经过一步增菌的3种热损伤沙门氏菌进行检测时,7组VIDAS检测结果和2组LAMP检测结果出现假阴性;对40份模拟样品检测结果显示, VIDAS无法检测柳州螺蛳粉中低污染水平的热损伤亚利桑那沙门氏菌。结论实时荧光PCR法相对VIDAS法和环介导等温扩增法更适合基质复杂且沙门氏菌污染水平低样品的快速检测。     

能力验证样品中沙门氏菌的分离与鉴定

通过参加能力验证,提高检测技能,验证实验室的检测能力。依据GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》方法对代码为A414的样品进行沙门氏菌的检测鉴定。按照标准操作,使用TTB和SC两种增菌液,BS、XLD和沙门显色平板结合使用,通过API20E、VITEK并结合血清学试验综合判定,从能力验证样品中准确鉴定出肠道沙门氏菌亚种Ⅲa,即亚利桑那亚种,同时从样品中还检测出阴沟肠杆菌和奇异变形杆菌两种干扰菌。     

3种沙门氏菌检测方法能力验证

目的比较国标法、VETIK和荧光定量PCR法3种沙门氏菌检测方法的检测效果。方法 10份盲样经GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、实时荧光定量PCR方法和VIDAS仪器检测,生化部分用VITEK2 compact执行。结果国标法在10个盲样中检出3种血清型沙门氏菌,分别为5号样品检出阿贡纳沙门氏菌、7号样品检出蒙得维的亚沙门氏菌和肯塔基沙门氏菌。VETIK和荧光定量PCR法检出5号和7号呈沙门氏菌阳性,其他为阴性。结论 VIDAS和实时荧光PCR检测方法快速、可靠、灵敏度高,可作为传统检测方法有效补充。     

一种新型培养基在沙门氏菌检测中的效果评价

目的：评价一种新型的SX2液体培养基对沙门氏菌的增菌效果。方法：对目标菌株的灵敏度、生长率、选择性及生化反应等几个方面进行测试,根据测试结果来判断新型培养基的增菌效果。结果：新型培养基与国标推荐方法中使用的培养基的增菌效果相当。结论：此液体培养基可以作为沙门氏菌的快速检测用增菌液。     

沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单增李斯特菌选择性共增菌培养基的研制

目的:研制一种对沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、志贺氏菌(Shigella)和单增李斯特菌(Listeria monocytogens)的选择性共增菌培养基(SSSL培养基)。方法:挑选添加成分进行单因素试验,确定SSSL培养基的成分及配比,采用平板计数法验证SSSL培养基的增菌效果。结果:确立了SSSL培养基配方,目标菌在SSSL增菌培养基中培养8 h后,菌体浓度都达到了10~5～10~6CFU/m L,而且抑制非目标菌的生长。结论:SSSL培养基能用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单增李斯特菌选择性共增菌,可望与多种检测方法联用,以提高检测率和准确性。     

沙门氏菌显色培养基的质量与性能比较

<正>为了比较市面上销售的三种沙门氏菌显色培养基的质量与性能,保证检测结果的准确性,按照国家标准GB4789.28-2013和GB 4789.4-2016规定方法进行检验。检验得出CH、HK、HB三种显色培养基生长率分别为0.92、0.84、0.82,非目标菌定量结果均小于1,非目标菌定性结果能够显著区分菌落颜色,人工污染样品加入量在1~10CFU/m L时,三种培养基均能检出。三种显色培养基均满足培养基质量性能