酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

蚕蛹蛋白酶解制备抗氧化肽的初步研究

将蚕蛹通过粉碎和丙酮脱脂后,得到蚕蛹蛋白粉.用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶酶解蚕蛹蛋白粉,以DPPH清除能力为指标对酶解过程进行分析,结果表明胃蛋白酶对蚕蛹蛋白有较好的酶解效果.然后通过正交优化胃蛋白酶的酶解条件,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性.     

缫丝蚕蛹蛋白酶法水解条件优化

目的:利用酶水解缫丝蚕蛹蛋白,拟为其深度开发利用提供参考。方法:利用蛋白酶水解缫丝蚕蛹蛋白,并用分光光度法测定各指标。结果表明:单酶水解时,实验所用的8种酶中以蚕蛹蛋白水解专用酶的水解度最高,最佳水解条件是底物浓度7%,温度53℃,pH7.2,加酶量3%,水解度达到21.44%。     

多指标评价酶解蚕蛹蛋白产物的抗氧化活性

以DPPH·清除率、O_2~-·清除率、还原能力和金属离子螯合力等4种常用的体外抗氧化模型,研究蚕蛹酶解产物的抗氧化活性。研究结果表明:8种酶解产物中,碱性蛋白酶酶解产物的综合抗氧化能力较好,DPPH·清除率为38.91%;O_2~-·清除率为43.69%;还原能力为1.982;金属离子螯合力为0.624。     

蚕蛹蛋白酶解产物体外抗氧化和降血压活性筛选及响应面工艺优化

以蚕蛹蛋白为原料,使用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶对其进行酶解,采用1,1-一苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH自由基)法、超氧阴离子自由基(O2－ ·)法、羟自由基( ·OH)法和血压紧张素转化酶(ACE)法对酶解产物进行抗氧化和降血压活性分析,筛选同时具有较强抗氧化和降血压活性的酶解产物,并确定获得较强活性时的水解度,再通过响应面对该水解度下酶解工艺条件进行优化。结果表明：碱性蛋白酶在水解度为20%左右时获得的水解产物抗氧化和降血压效果较好,并由响应面分析结果表明酶解温度和加酶量之间存在显著的交互作用,同时得到最佳酶解工艺条件为：酶解温度51℃,pH值为9.05,加酶量为0.38%,酶解时间3h,在此条件下,水解度为20.53%,再通过实验验证其误差值小于5%,说明采用响应面试验设计方法对蚕蛹蛋白酶解体系进行优化具有较好的可靠性。此时酶解产物的DPPH自由基抑制率为51.2%,ACE抑制活性为50.3%。     

椰肉蛋白酶解及其产物的抗氧化活性研究

将新鲜椰肉粉碎脱脂,利用碱溶酸沉法制备椰肉蛋白。用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、Papain木瓜蛋白酶酶解椰肉蛋白,以DPPH自由基清除能力和水解度为指标对酶解过程进行分析,筛选出最适合制备抗氧化酶解物的酶为Alcalase碱性蛋白酶。然后采用单因素及多指标正交实验设计优化Alcalase碱性蛋白酶酶解条件,其中酶解温度和底物浓度对DPPH自由基清除率影响最大。优化后的制备参数为:酶解温度50℃,pH值10.5,加酶量14000 U/g,酶解时间7 h,底物浓度2%,该条件下水解液中蛋白含量为15.8 mg/mL,水解度和DPPH.清除率分别为29.16%和89.07%,椰肉蛋白酶解物显示出较强的抗氧化活性,接近同一浓度下谷胱甘肽的抗氧能力,比同浓度Vc的DPPH自由基清除率高3.33倍。     

沙虫蛋白酶解产物抗氧化与免疫调节活性的研究

采用复合蛋白酶对沙虫(Sipunculus nudu)进行酶解,得到沙虫蛋白酶解产物(SNPH),并对其氨基酸组成进行了分析。采用高效液相凝胶色谱法对SNPH的相对分子质量分布进行了测定。采用紫外分光光度法测定SNPH对DPPH自由基,羟基自由基、超氧阴离子的清除能力及其还原能力。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SNPH在对刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响。结果显示SNPH中必需氨基酸和疏水氨基酸含量较高,小分子肽含量较高,相对分子质量在120~1800之间的物质占85.11%。抗氧化活性实验显示SNPH对DPPH自由基,羟基自由基和超氧阴离子具有较强的清除效果,且清除率与浓度存在一定的量效关系。免疫调节活性试验表明SNPH对Con A和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖具有协同刺激作用。SNPH具有较好的抗氧化和免疫调节活性。     

羊肺蛋白酶解工艺优化及体外抗氧化活性研究

为优化羊肺酶解工艺及探讨酶解物体外抗氧化活性,采用中性蛋白酶酶解羊肺,以水解度为评价指标,在单因素试验的基础上,运用响应面法优化酶解工艺。结果表明:羊肺的最佳酶解条件为酶解温度50℃,加酶量1 700U/g,水料比2∶1(mL/g),酶解时间4h。在最优条件下,进行3次验证性实验,测得实际水解度为18.89%,与理论水解度(18.19%)相比误差较小。体外抗氧化结果表明:羊肺酶解产物具有一定的抗氧化活性,其还原力的吸光值为0.472,清除DPPH·、·O_2~-和·OH的IC_(50)值分别为67.00,40.07,31.88mg/mL。     

纤维素酶对蚕蛹蛋白酶解的促进作用

在木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白过程中,加入纤维素酶可提高水解液中9%～11%氨态氮含量,与不加纤维素酶的对照处理之间有明显的差异显著性(p<0.05)。其作用效果与纤维素酶加入的先后顺序有关。双酶作用的酶解液中,氨基酸与蚕蛹总蛋白比值与木瓜蛋白酶单酶酶解液中的相比提高了8.28%。     

干茧缫丝蚕蛹食用品质评价

目的：分析不同地区市售干茧缫丝蚕蛹的感官、营养与卫生指标,对其品质进行评价,为干茧缫丝蚕蛹的开发利用提供依据。方法：感官评分和测色仪测定蚕蛹感官指标,化学法测定干茧缫丝蚕蛹营养指标、卫生指标。结果：22 个样品中,2、14、18、20号干茧缫丝蚕蛹样本感官品质较好;干茧缫丝蚕蛹基本组分：水分质量分数3.95%～11.41%、蛋白质量分数51.18%～58.40%、粗脂肪含量28.13～42.28 g/100 g、胆固醇含量237.37～459.87 mg/100 g;矿物质：钙含量270.40～632.29 mg/100 g、铁含量34.44～215.92 mg/100 g、锌含量115.67～151.40 mg/100 g; 有害物质： 挥发性盐基氮含量7 . 2 1 ～78.79 mg/kg、三甲胺含量5.08～32.04 mg/kg、亚硝酸盐含量21.97～127.15 mg/kg、酸价7.35～73.06 mg/g、丙二醛含量0.87～5.86 mg/kg;有害元素：总汞含量0.004～0.108 mg/kg、铬含量0.65～3.89 mg/kg、铅含量2.42～12.61 mg/kg、镉未检出。结论：干茧缫丝蚕蛹营养丰富,但大部分地区的干茧缫丝蚕蛹存在感官品质较差、蛋白质分解、脂肪氧化严重、亚硝酸盐残留量超标、有害元素污染等问题,若要作为食品原料,需要在生产加工环节对其品质进行严格控制。     

新疆黑蜂蜂王浆球蛋白酶解产物的抗氧化活性

为评价新疆黑蜂蜂王浆球蛋白酶解产物的抗氧化活性,以胰蛋白酶为试验用酶,采用清除二苯基-2-苦肼自由基(DPPH·),抑制亚油酸氧化和总抗氧化能力测定方法,探讨新疆黑蜂球蛋白酶解产物的水解条件。结果表明当温度为57℃、pH值为7.5、酶底比为1.5%(质量分数)、酶解时间为4 h时对DPPH·清除率最大,抗氧化活性最强。该结论对研制具有不同抗氧化功能的新疆黑蜂蜂王浆制品,具有一定的理论指导价值。     

大米蛋白酶解产物抗氧化活性及功能性质研究

采用不同的蛋白酶（木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、精制中性蛋白酶和碱性蛋白酶）水解大米蛋白,以制备抗氧化活性肽。结果发现,精制中性蛋白酶水解大米蛋白得到的产物对DPPH自由基的清除能力最强,而且水解度其清除能力影响显著。同时测定了酶解产物的还原能力、金属离子螯合能力以及在Fe2+引发的亚油酸过氧化物体系中的抗氧化活性,结果表明,此酶解产物表现出一定的还原能力,能够抑制由Fe2+引发的亚油酸过氧化物体系中的抗氧化活性,具有一定的金属离子螯合能力。结果表明,这种肽具有一定的抗氧化活性,具有良好的功能特性。      

体外模拟消化对酸枣仁蛋白酶解产物抗氧化活性的影响

目的:以具有良好抗氧化活性的酸枣仁蛋白酶解产物(SZPHs)为研究对象,探究体外模拟胃肠消化对其氨基酸组成及抗氧化活性的影响.方法:通过体外模拟胃肠消化,得到酸枣仁蛋白酶解产物消化物(SZPHs-GD),并分析SZPHs消化前后的氨基酸组成以及体外抗氧化活性.结果:体外模拟胃肠消化后,SZPHs-GD中疏水性氨基酸含量...     

罗非鱼鱼肉及组分蛋白酶解产物的抗氧化特性

采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L碱性蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究比较不同蛋白酶在1、2、4、6、8h对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:3种酶的酶解产物都具有一定的抗氧化活性,中性蛋白酶酶解产物的水解度和蛋白回收率最高,胃蛋白酶酶解产物对DPPH自由基和羟自由基的清除效果最好;综合各项指标选择中性蛋白酶对罗非鱼肉的组分蛋白(肌原纤维蛋白、肌浆蛋白、基质蛋白)进行4h酶解,研究比较不同组分蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:组分蛋白中基质蛋白酶解产物的蛋白回收率最高,为89.8%,肌原纤维蛋白酶解产物的水解度最高,为10.1%,肌浆蛋白酶解产物的抗氧化活性最好,羟自由基和DPPH自由基的IC50值分别为12.352mg/m L和3.554mg/m L。      

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

赤魟鱼肉蛋白酶解产物的制备及抗氧化活性研究

目的:研究赤魟鱼肉酶解产物的制备工艺及抗氧化活性.方法:以DPPH清除率为指标,通过单因素和正交试验确定木瓜蛋白酶的最佳酶解条件;用葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)分离、提纯并检测各组分的抗氧化活性.结果:木瓜蛋白酶酶解赤虹鱼肉蛋白制备抗氧化肽的最佳酶解条件是:温度55℃、pH 7.0、酶解时间5h、加酶量0.6%;酶解产物的抗氧化活性大于酶解前粗蛋白的抗氧化活性;酶解产物经Sephadex G-25纯化后,得到组分F1、F2、F3,其中组分F2的抗氧化活性最高,当其质量浓度为5 mg/mL时DPPH清除率、还原力、羟自由基清除率分别为31.54%、0.274和17.91%;组分F2的相对分子质量小于307.结论:酶解并经Sephadex G-25纯化制备的赤魟鱼肉多肽具有较强的抗氧化能力.     

鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析对鹅肉蛋白酶解工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,以抗氧化活性为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、pH值、固液比、酶添加量对鹅肉蛋白水解度和抗氧化活性的影响。结果表明:鹅肉蛋白最佳酶解条件为酶解温度53℃、酶解液pH10.5、固液比1:3(m/V)、酶解时间7.2h,加酶量1200U/g,在此条件下,酶解液对Fe3+还原力为0.402,水解度可达34.74%。     

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

甲鱼蛋白酶解产物体外ACE抑制和抗氧化活性研究

目的研究甲鱼蛋白酶解产物的血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性和抗氧化性.方法以体外活性(ACE抑制率、·0H、O2-·和DPPH·清除率)为指标,通过正交试验确定木瓜蛋白酶的最佳酶解条件;用Sephadex G-25分离、提纯.检测各组分的ACE抑制活性和抗氧化活性.结果木瓜蛋白酶酶解甲鱼蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为温度60℃、pH 7.0、酶解时间3 h、加酶量1.0%;在此酶解条件下酶解产物的ACE抑制率为99.96%,获得了ACE抑制活性较高的组分F4和F1,其ACE抑制率分别为67.27%、52.73%;制备抗氧化肽的最佳酶解条件为温度60℃、pH 5.0、时间4h、加酶量0.6%,得到抗氧化活性最高的组分F2,该组分的·OH、O2-·和DPPH·清除率分别为10.39%、33.00%、17.68%,其相对分子质量范围集中在307左右.结论甲鱼多肽具有较强的体外ACE抑制活性和抗氧化活性.     

小黄鱼蛋白酶解液抗氧化活性研究

本文以小黄花鱼为原料,利用蛋白酶解技术对小黄鱼蛋白进行酶解,分别选取4组水解度不同的蛋白酶解液,测定其对羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的清除能力,以评定其抗氧化效果。结果表明:小黄鱼蛋白酶解液对羟自由基、DPPH自由基的清除效果比较明显,对超氧阴离子也有一定的清除效果。由此可知小黄鱼酶解液是一种比较好的抗氧化剂,在功能性食品中作为添加剂具有较好的应用前景。