高效液相色谱法测定安徽产石菖蒲中α-细辛醚、β-细辛醚的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定安徽产石菖蒲中α-细辛醚和β-细辛醚含量的方法,并对安徽产石菖蒲药材进行质量评价。方法采用VP-ODS(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,对以下色谱条件进行考察,流动相分别为甲醇-水(含0.1%甲酸)60∶40,55∶45,70∶30,温度分别为35,30,25℃,检测波长分别为257,253,250 nm,确定最佳色谱条件,并在最佳色谱条件下测定安徽产石菖蒲中α-细辛醚和β-细辛醚的含量。结果最佳色谱条件:流动相为甲醇-水(含0.1%甲酸)55∶45,流速1.0 m L/min,柱温3 0℃,检测波长250 nm。α-细辛醚平均回收率为99.17%,RSD为2.35%;β-细辛醚平均回收率为9 9.53%,RSD为2.14%。结论该方法灵敏简便、重复性良好、结果准确可靠,可用于石菖蒲的质量评价。     

黄芪多糖诱导的DC联合CIK对人食管癌Eca-109细胞的影响

目的:观察黄芪多糖诱导的树突状细胞(dendritic cells,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对人食管癌Eca-109细胞作用的影响。方法:取健康人外周血单个核细胞在体外培养DC和CIK细胞,观察经APS(astragalus polysaccharide,APS)诱导DC细胞和常规培养的DC细胞形态和数量的区别,并分为APS诱导组:APS-DCCIK组,即经黄芪多糖诱导的DC与同源CIK共培养组;对照组:DC-CIK+APS组,即常规方法培养的DC与同源CIK共培养加用等量黄芪多糖组(100 mg·L~(-1));空白组:DC-CIK组,即常规方法培养的DC与同源CIK共培养组。(各组DC∶CIK=1∶5)。检测三组靶效比分别为2.5∶1、5∶1、10∶1时对Eca-109细胞的毒性。结果:APS诱导的DC细胞较空白组细胞集落多而且大;APS诱导DC细胞数量显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);当DC∶CIK=1∶5时,APS诱导DC-CIK细胞数量明显高于空白组(P<0.05);DC∶CIK=1∶5,效靶比分别为2.5∶1、5∶1、10∶1时,APSDC-CIK组的细胞毒活性明显高于DC-CIK组和DC-CIK+APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:APS不仅可增加DC和DC-CIK细胞的增殖能力,还可增强DC-CIK细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤效应。     

β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2的影响

目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:经过敞箱实验选取得分相近的2³个月龄SD大鼠80只,按随机数字表法分为四组,每组20只,结合孤养并给予慢性轻度不可预见刺激,复制抑郁模型,于造模成功第2天开始,分别给予氟西汀组和β-细辛醚组1.2 mg/(kg·d)氟西汀和25 mg/(kg·d)β-细辛醚灌胃,模型组与正常组给予等体积生理盐水。于第21天对大鼠处死取脑,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白相对含量。结果:模型组大鼠海马组织神经元数目减少,散在排列,细胞核发生固缩变形,CA1区,CA3区变化显著。与模型组比较,β-细辛醚组、氟西汀组Bax蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论:β-细辛醚可以降低大鼠海马组织Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达。     

雾化吸入α-细辛脑注射液辅助治疗42例新生儿肺炎的疗效分析

目的:观察雾化吸入α-细辛脑注射液辅助治疗新生儿肺炎的临床疗效,为临床推广作出指导。方法:随机选择2010年1月至2013年1月收治的79例新生儿肺炎患者为研究对象,随机分为两组。对照组37例给予吸氧、抗生素治疗等常规对症支持治疗,治疗组42例在对照组的基础上给予0.5mg/kgα-细辛脑注射液,加入4mL生理盐水稀释后雾化吸入,对比观察两组患者治疗7d后的总有效率及咳嗽、咳痰、喘息、肺部啰音等主要症状体征减轻或者消失的时间。结果:①两组患者治疗后总有效率的比较:治疗组的总有效率为90.48%,明显高于对照组的总有效率70.27%,比较具有统计学差异(P<0.05);②两组患者治疗后主要症状体征减轻或者消失的时间比较:治疗组患者咳嗽、咳痰、喘息、肺部啰音等主要症状体征的减轻或者消失时间明显低于对照组,比较具有统计学差异(P<0.05)。结论:雾化吸入α-细辛脑注射液辅助治疗新生儿肺炎的临床疗效显著,值得推广。     

华蟾酥毒基诱导人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的实验研究

目的:观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,从而探讨华蟾酥毒基诱导骨肉瘤凋亡的可能机制。方法:应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS增殖的影响;应用流式细胞术检测华蟾酥毒基及华蟾酥毒基联合泛Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对人骨肉瘤细胞U-2OS细胞凋亡的影响;应用蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对凋亡通路相关蛋白表达的影响。结果:四甲基偶氮唑蓝比色法实验结果表明,华蟾酥毒基以时间和浓度依赖的方式抑制U-2OS细胞生长。流式细胞术结果显示,100 n M华蟾酥毒基干预后,U-2OS细胞凋亡率为(46.87±11.23)%,但当华蟾酥毒基与泛Caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同干预后,细胞凋亡率仅为(2.34±0.98)%,与空白对照组及华蟾酥毒基联合Z-VADFMK组相比,华蟾酥毒基能显著提高细胞凋亡率(P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,华蟾酥毒基能够显著提高促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9的表达。结论:华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS的生长有显著抑制作用,并能够促使肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与激活Caspase依赖的凋亡途径有关。     

积雪草诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡机制研究

目的:观察积雪草对人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响并探讨相关机制。方法:用10μmol·L~(-1)、25μmol·L~(-1)、50μmol·L~(-1)、75μmol·L~(-1)的积雪草处理人卵巢癌细胞A2780 24 h,用MTT法检测细胞活性;用流式细胞术检测卵巢癌细胞A2780凋亡;用qRT-PCR检测卵巢癌细胞A2780中Bax、Bcl-2 mRNA的表达;用western blot法检测卵巢癌细胞A2780中Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:50μmol·L~(-1)、75μmol·L~(-1)的积雪草作用于细胞后,乳腺癌细胞A2780细胞形态发生明显改变,细胞皱缩、变圆。与对照组比较,75μmol·L~(-1)积雪草对卵巢癌细胞A2780抑制效果最明显。与对照组比较,50μmol·L~(-1)、75μmol·L~(-1)积雪草能够有效升高Bcl-2 mRNA的表达,降低Bax mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度积雪草均能有效升高Bax的表达并降低Bcl-2的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:积雪草可抑制肿瘤的生长,其作用可能是通过诱导卵巢癌细胞A2780凋亡来实现的。     

异甘草素诱导人胶质瘤细胞SHG44自噬及凋亡的实验研究

目的研究异甘草素(ISL)对人胶质瘤细胞SHG44增殖、自噬、凋亡及相关分子信号的影响。方法应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测ISL在不同时段、不同浓度下对人胶质瘤细胞SHG44的增殖抑制情况。用流式细胞术Annexin V-IP标记检测ISL(0,20,40,60,80μmol/L)作用于SHG44细胞48 h后细胞凋亡的情况,透射电镜下观测ISL对SHG44细胞内部超微结构的改变,应用免疫荧光染色法观测细胞内部及其周边自噬及凋亡相关蛋白的分布,Western blot检测ISL对SHG44细胞中Caspase-3,Bcl-2以及LC3B等蛋白表达的影响。结果在ISL作用下,SHG44细胞的增殖过程呈现时间及剂量依赖性抑制,ISL(80μmol/L)组在作用72 h后对SHG44细胞的抑制率超过了半数;流式细胞术检测ISL作用SHG44细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(1.54±0.85)%,(6.72±2.81)%,(11.82±3.21)%,(16.61±3.79)%,(26.15±3.82)%;透射电镜下可见SHG44细胞内部出现自噬小泡及自噬溶酶体;在荧光显微镜下可见细胞内出现自噬及凋亡相关蛋白的免疫荧光颗粒;Western blot显示ISL作用于SHG44细胞48 h后,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值以及Caspase-3的表达呈上升趋势,而Bcl-2表达呈下降趋势。结论 ISL能有效抑制人胶质瘤细胞SHG44的增殖,诱导SHG44细胞发生自噬和凋亡,并且抑制了抗凋亡分子Bcl-2的表达,增加了凋亡相关分子Caspase-3以及自噬相关分子LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值。     

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。     

白英诱导肝癌细胞凋亡的研究进展

白英为多年生茄科植物（solanum lyratum thunb,SLT）的干燥全草,又称白毛藤,味苦,性微寒,主产浙江、江苏、安徽等地。白英主要含有甾体皂苷类、甾体生物碱类、有机酸等多种化学成分,具有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗真菌等药理作用。近年研究显示白英可诱导肝癌细胞的凋亡,本文就白英诱导肝癌细胞凋亡的研究进展作一综述。     

芹菜素诱导膀胱癌5637细胞凋亡研究

目的:研究芹菜素对人膀胱癌5637细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用20~80μmol/L芹菜素处理5637细胞,MTT法检测膀胱癌5637细胞增殖抑制率;细胞软琼脂克隆形成实验检测细胞成瘤能力的抑制效率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变。结果:芹菜素呈浓度依赖的抑制5637细胞的增殖;80μmol/L芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;5637细胞的克隆形成能力随着芹菜素浓度增加而显著降低。结论:芹菜素能够抑制人膀胱癌5637细胞的增殖,抑制5637的克隆形成,并诱导细胞凋亡。     

芹菜素诱导膀胱癌5637细胞凋亡的机制研究

目的:研究芹菜素诱导人膀胱癌5637细胞凋亡的作用机制。方法:采用25~100μmol/L芹菜素处理膀胱癌5637细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用Western blotting检测细胞凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和PARP蛋白的表达水平。结果:芹菜素处理使细胞Bcl-2蛋白表达降低且呈浓度依赖性,并使Bax的表达增加和导致PARP蛋白发生切割且呈浓度依赖性。结论:芹菜素能够抑制人膀胱癌5637细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2并上调Bax表达,导致Bcl-2/Bax比值下降,PARP活化有关。     

槲皮素对人卵巢癌细胞-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨槲皮素对人卵巢癌细胞-3(ovarian carcinoma cell,OVCAR-3)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将对数生长期的OVCAR-3细胞随机分为对照组和槲皮素组。对照组细胞给予培养基常规培养,而槲皮素组细胞加入槲皮素(160μmol·L~(-1))。各组细胞培养48 h后,利用噻唑蓝检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖;流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,RT-PCR检测细胞受体型酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导与转录激活因3(STAT3),B细胞淋巴因子2(Bcl-2),人Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使mRNA表达水平。免疫蛋白印记法检测各组OVCAR-3细胞中STAT3,磷酸化受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2),磷酸化信号传导与转录激活因3(p-STAT3),Bax,Bcl-2蛋白的变化,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果:MTT检测结果显示槲皮素组与对照组相比,人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖率明显下降(P<0.05)。流式细胞仪检测显示槲皮素组OVCAR-3细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。RT-PCR检测显示槲皮素组与对照组JAK2和STAT3信使mRNA表达水平无明显差异,而槲皮素组Bax信使mRNA水平比对照组明显增高,槲皮素组Bcl-2信使mRNA水平比显著低于对照组。Western blotting检测显示,槲皮素组的JAK2和STAT3蛋白表达与对照组比较,无明显差异(P>0.05),而槲皮素组的p-STAT3,p-JAK2和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05),槲皮素组的Bax表达显著高于对照组(P<0.05)。Caspase3活性试剂盒检测结果显示,槲皮素组Caspase3活性表达水平显著高于对照组。结论:槲皮素能明显抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,促进人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活JAK2/STAT3信号传导通路。     

莪术油注射液诱导人子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡机制研究

目的:研究莪术油注射液对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞体外增殖及相关蛋白表达情况的影响。方法:将体外培养的HEC-1-B细胞随机分5组,对照组、莪术油Ⅰ组、莪术油Ⅱ组、莪术油Ⅲ组、莪术油Ⅳ组。分别给与不同浓度的莪术油注射液培养48 h、72 h。采用MTT法检测HEC-1-B生长抑制率、Hoechest33258荧光染色观察HEC-1-B细胞核形态的变化、Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:不同浓度莪术油注射液均对HEC-1-B细胞增殖具有抑制作用,同时诱导HEC-1-B细胞凋亡,上调Caspase-3蛋白的表达,下调Survivin蛋白的表达,其强度随着药物作用浓度及时间的增加而增强,呈时间-剂量依赖性,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:不同浓度莪术油注射液在一定浓度范围内可抑制HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能与下调子宫内膜癌HEC-1-B细胞Survivin蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞中凋亡抑制蛋白XIAP的影响。方法:通过MTT实验、流式细胞术、细胞形态观察检测丹参酮ⅡA对细胞增殖和凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹的方法检测丹参酮ⅡA对细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、凋亡蛋白caspase-3以及PARP蛋白的影响。结果:MTT、细胞形态结果显示丹参酮ⅡA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用成时间和剂量依赖性,免疫印迹结果显示,0.5μg/mL丹参酮ⅡA作用肝癌细胞24 h后,caspase-3前体、凋亡抑制蛋白XIAP表达明显下调,活化的caspase-3、剪切形式的PARP含量显著增加。结论:丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP,活化caspase-3,促进PARP剪切诱导肝癌细胞凋亡。     

5-异丁基-3-( 2-氯) 苄氧基乙内酰脲对白血病细胞 K562 生长与凋亡的影响

目的：探讨5-异丁基-3-（2-氯）苄氧基乙内酰脲（YL3）对白血病细胞 K562细胞生长与凋亡的作用。方法将K562细胞置于含10％FBS的 RPMI-1640培养液中培养。实验分4个组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组（HU组）、受试药物组（YL3组）;除空白对照组外,其余3组均接种K562细胞;HU组、YL3组分5个亚组,分别加入10-3～10-7 mol·L-15个梯度浓度的 HU或 YL3。采用 MTT法检测 YL3对 K562细胞增殖的影响;AV/PI双染流式细胞术检测 YL3对 K562细胞凋亡的影响;瑞氏染色法观察细胞形态的变化。结果 YL3在10-3～10-6 mol·L-1浓度范围内显著抑制 K562细胞增殖（P＜0．01或 P＜0．05）,其半数细胞抑制浓度（IC50）值为88．5μmol·L-1;YL3有促进K562细胞凋亡的作用,其高剂量的凋亡率显著高于同剂量的 HU组（P＜0．01）,且呈量效关系（P＜0．05）。结论5-异丁基-3-（2-氯）苄氧基乙内酰脲具有抑制 K562细胞增殖,诱导其凋亡的作用。     

外源性硫化氢通过ATP敏感钾通道诱导人子宫肌瘤细胞凋亡

目的探讨ATP敏感钾通道(KATP)在外源性硫化氢(H2S)诱导人子宫肌瘤细胞凋亡中的作用。方法用硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体处理原代培养的人子宫肌瘤细胞,KATP通道抑制剂格列本脲(Gly)预处理细胞。实验分为对照组、不同浓度NaHS组、ATP敏感性钾通道(KATP)抑制剂组和Gly+NaHS组。用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时定量PCR和Western blot分别检测p53和bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,NaHS(10-4和10-3mol/L)处理人子宫肌瘤细胞24和48 h后以剂量和时间依赖的方式增加了细胞的凋亡率(均P<0.05)。与对照组比较,NaHS(10-4mol/L)处理人子宫肌瘤细胞24 h后p53的表达显著增加(P<0.05),而bcl-2表达显著降低(P<0.05)。Gly没有影响人子宫肌瘤细胞的凋亡率、p53和bcl-2的表达,但部分地拮抗NaHS的致凋亡作用以及NaHS诱导的子宫肌瘤细胞中p53表达的上调和bcl-2表达的下调(均P<0.05)。结论外源性H2S诱导子宫肌瘤细胞凋亡,其机制与H2S开放KATP通道有关。     

星点设计-效应面法优化川芎和细辛挥发油的包合工艺研究

目的利用星点设计-效应面法优化川芎和细辛挥发油的最佳包合工艺。方法采用饱和水溶液超声法,以β-环糊精与挥发油用量比、包合温度、包合时间为主要影响因素,以挥发油包合率、包合物得率和包合物含油率为评价指标,采用星点设计-效应面法优化挥发油的包合参数。结果最佳工艺为:β-环糊精和挥发油用量比为5∶1,包合温度为45℃,超声时间54 min。综合评分预测值为97.32分,与实际值97.316分的偏差为0.000 4%。结论试验设计简便合理,稳定可行,可预测性好。     

人β-防御素-2在肝细胞癌中的表达及其意义

目的:探讨人β-防御素-2(HBD-2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义。方法:收集2011年8月-2014年10月手术切除的原发性肝癌标本45例,肝癌癌旁组织30例,正常肝组织20例,采用免疫组化法检测各标本中HBD-2蛋白表达情况,采用聚合酶链反应(PCR)、实时聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测HBD-2 m RNA表达情况,同时采用原位末端标记法(TUNEL法)测定癌组织的细胞凋亡指数。结果:HBD-2 m RNA及HBD-2蛋白在肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中的表达情况比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HBD-2蛋白表达阳性的肝癌组织的细胞凋亡指数高于HBD-2蛋白表达阴性的肝癌组织,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HBD-2在肝细胞癌组织中低表达,HBD-2可能通过影响肝癌细胞的凋亡而起作用。     

缺氧诱导因子-1α在缺血缺氧性脑损伤中作用的研究进展

缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-l alpha,HIF-1α）是大脑缺氧时机体产生的一种重要转录调节因子,参与细胞生存相关的细胞周期的稳定及能量代谢,对脑缺血后神经元的存活、凋亡,炎症反应,血管生成的调控产生重要作用;在缺血缺氧性脑损伤中起着双重作用,且存在时相表达特点。通过调节体内 HIF-1α的表达,能够为缺血缺氧引起的脑损伤提供好的治疗干预途径。