等温扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

食源性致病菌污染是影响食品质量安全的重要因素之一,加强食源性致病菌的检测力度对于保证食品安全以及预防食源性疾病至关重要.基于核酸的分子检测技术较传统的培养方法相比,更加快速、灵敏、高效.等温扩增技术以反应条件简单等优点逐渐替代变温扩增技术.该文简述了环介导等温扩增、链替代等温扩增、单引物等温扩增、滚环等温扩增以及跨越式...     

滚环等温扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

食源性致病菌是影响人类食品安全的重要因素。人类食源性致病菌致病率的逐年上升,引起世界广泛关注。滚环等温扩增(rolling circle amplification, RCA)技术因具有高特异性、高灵敏度、稳定、操作简单等优点,在食源性致病菌检测中具有广泛的应用前景。近年来以滚环等温扩增技术为基础,针对食源性致病菌的检测新技术不断得到发展。本文概述了滚环等温扩增技术的基本原理、技术特点、在食品微生物快速检测方面的应用、存在的不足和解决措施,指明研究发展新方向,旨在为食源性致病菌在快速、高通量检测需求上增加新方法,对食品安全监管具有重要意义。     

等温扩增技术在食源性致病菌检测中的应用进展

等温扩增技术是近年来迅速发展的一类核酸扩增技术。相比于PCR,该技术具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及低成本的特点。目前,核酸等温扩增技术在感染性疾病的诊断、基因多态性分析、疫情防治等方面已经有广泛应用,也有文献报道了其在细菌、病毒等病原体检测方面的应用。食源性致病菌和环境中的病原体检测等领域中,等温扩增技术展现了广阔的应用潜力,有望发展成为食源性致病菌检测的重要方法。本文综合国内外文献报道,对环介导等温扩增、依赖解旋酶等温扩增、依赖核酸序列等温扩增、切刻内切酶核酸恒温扩增、交叉引物等温扩增、链置换等温扩增、SmartAmp技术等一系列等温扩增技术的原理、特性及其在食源性致病菌检测中的应用情况做一综述,从而为该技术在食源性致病菌检测的实际应用中提供参考和依据。     

环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是继PCR技术之后又一新型核酸扩增技术,恒温(60~65℃)条件下可在1h内将目的基因扩增到109,具有效率高、特异性强、操作简单等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的快速检测。对LAMP的原理、特点、应用及展望进行综述,为后续研究提供理论依据。     

等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

等温扩增技术是近年来发展迅速的一种新型核酸扩增技术, 其反应过程始终维持在恒定的温度下, 降低了对精密仪器和检测场地的要求, 并大幅度缩短了检测时间, 更能满足准确、快速、灵敏、便携的日常检测需求。目前, 食源性致病菌仍是影响食品安全的主要因素之一, 等温核酸扩增技术已成功应用于部分食源性致病菌的检测中, 具有广阔的应用前景, 有望成为食源性致病菌快速检测的新方法。本文综述了环介导核酸等温扩增、滚环扩增、跨越式滚环扩增、重组酶聚合酶扩增、等温多自配引发扩增、单引物等温扩增、依赖解旋酶的等温扩增、链置换扩增、交叉引物扩增9种等温核酸扩增技术的扩增原理和优缺点, 及其在食源性致病菌检测中的应用研究进展, 提出了样品前处理、引物设计、结果判读、检测灵敏度、检测通量方面存在的共性问题, 并给出相应解决措施, 以期为等温核酸扩增技术在食源性致病菌快速检测中的实际应用和相关标准的制定提供研究思路。     

环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种新型核酸扩增技术, 该技术在60?65 ℃恒温条件1 h内, 把特异性靶序列扩增到109水平, 具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点, 已广泛应用于流行性细菌、病毒的定性定量检测等领域。本研究对LAMP的原理、特性及其应用做一综述, 从而为其在食源性致病菌检测应用中提供理论依据。     

重组酶聚合酶等温扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

食品安全是人类面对的重大问题,对食源性致病菌的检测也一直是各种研究关注的重点。基于聚合酶链式扩增（PCR）核酸检测方法虽然已克服传统微生物培养耗时长、准确度不高等缺点,成为目前应用最广的致病菌检测方法,但由于需要精确温度控制大大限制了其在现场检测中的应用。重组酶聚合酶等温扩增技术（RPA）,作为一种新兴等温扩增技术,在近十年来发展迅速。该技术打破PCR的壁垒,弥补热循环、需要昂贵仪器等不足,更加适用于资源有限的现场检测。本文总结了重组酶聚合酶等温扩增（RPA）反应机理、引物及探针的设计方法,全面论述RPA在食源性致病菌检测中的应用,概述RPA发展的热点问题并对RPA技术未来发展方向进行展望。     

重组酶介导等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification, RAA)是一种新型的国产等温扩增技术,其扩增反应可以在恒定温度(37～42℃)下快速完成,具有较高检测效率,且对精密仪器和检测场地的要求较低,更能应对大批量筛查、应急处理等应用场景。经10年的科学研究和实践应用, RAA技术已取得了诸多突破性成果,本文介绍了RAA技术的反应原理,综述了近3年RAA技术及其扩展技术在食源性致病菌检测中的研究进展,总结了RAA技术在样品前处理、假阳性和假阴性、检测通量、试剂盒开发等方面存在的技术难点,并对未来的研究方向提出了若干建议,以期为RAA技术在食源性致病菌快速检测中的应用推广提供研究思路。     

实时荧光等温扩增法检测4种常见食源性致病菌

目的建立实时荧光等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌4种常见食源性致病菌的分析方法。方法根据4种致病菌特异性基因合成LAMP引物,在反应前加入荧光染料,在63℃条件下反应45 min;反应结果可以根据扩增曲线变化直接判断。并通过在实际样品中添加标准菌株菌液,测定了其在增菌0、6、24 h的检测灵敏度。结果金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等基因组DNA的LAMP检测灵敏度为1 pg,副溶血性弧菌的检测灵敏度为10 pg;在样品加标实验中,其灵敏度在6 h分别可达到101、100、100、102 CFU/mL。结论该方法用于食源性致病菌的快速检测,具有可实时监控反应过程、反应快速,灵敏度和特异性高等优点,适合于基层食品安全监管领域现场快速检测。     

环介导等温扩增技术检测不同乳制品常见食源性致病菌

目的 验证环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)试剂和仪器在不同乳制品常见食源性致病菌检测中的应用效果.方法 针对不同乳制品中常见食源性致病菌,运用LAMP建立便捷、快速、高效地检测方法,并以实验室储备菌株及人工污染乳制品样品评价LAMP检测引物试剂...     

核酸适配体在食源性致病菌检测中应用的研究进展

核酸适配体(aptamer)是经体外筛选可特异性识别并结合靶分子的寡核苷酸片段(单链DNA/RNA序列),具有高特异性、高灵敏度、高亲和力及易于修饰等优点,已在食源性致病菌检测领域得到应用。本文主要对核酸适配体筛选技术分类以及纳米金适配体技术、荧光适配体技术、电化学适配体技术、流式细胞适配体技术和表面增强拉曼适配体技术在食源性致病菌检测中的应用作简要综述。     

食品过敏原澳洲坚果环介导等温扩增检测方法的建立与应用

根据澳洲坚果豌豆蛋白AMP2基因序列,利用设计软件Primer Explorer Version 4设计并筛选了食品过敏原澳洲坚果的环介导等温扩增引物,对反应体系和反应条件进行优化,建立澳洲坚果的环介导等温扩增检测方法,结果判断可采用实时荧光法和荧光染料终点显色法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性评价,结果显示：该方法能够特异性、灵敏、稳定地检测食品中的澳洲坚果成分,检测低限为0.5%。此外,对7 种市售食品样品的检测结果表明,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0,在市售食品的过敏原成分检测上较商业化快速检测试纸条更加稳定可靠。     

环介导等温扩增技术检测食品中铜绿假单胞菌

建立食品中铜绿假单胞菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。利用铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因序列,设计3对铜绿假单胞菌LAMP检测特异性引物,用36株铜绿假单胞菌,14株近源菌验证方法的特异性。建立的LAMP方法特异性好,灵敏度达到2.2 cfu/100 g~3.5 cfu/100 g。建立的食品中铜绿假单胞菌LAMP检测方法特异性好,灵敏度高,适用于的检测食品中的铜绿假单胞菌。     

环介导等温扩增技术在肠杆菌科致病菌检测中的研究进展

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术是近年来新发展起来的一种恒温核酸扩增技术,该技术具有设备简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强以及扩增效率高等优点,已被广泛地应用于食源性致病菌的检测研究。本文重点阐述近年来国内外学者应用LAMP技术在肠杆菌科中常见致病菌的检测研究进展。     

环介导等温扩增技术检测花生过敏原

花生引起的过敏已经越来越受到重视,因此对花生过敏原进行检测也变得越来越重要。目前对花生过敏原的检测大多数采用抗原抗体法或PCR方法,抗原抗体法耗时比较长,而PCR方法需要昂贵的仪器设备。本项目通过建立环介导等温扩增快速检测技术来检测食物中花生过敏原的基因,为食品中花生过敏原成分检测提供方便。该方法快速,简便,灵敏度高,可以很好的应用到现实检测中去,这个方法的建立具有很重大的意义,为食品的安全检测提供了很大的方便。     

噬菌体检测食源性致病菌的研究进展

食源性致病菌是影响食品安全的主要因素之一。传统的检测手段已经不能满足食品安全快速检测的要求,食源性致病菌的检测技术面临着由耗时、费力的传统方法向省时、简便的现代检测技术转变的挑战。噬菌体作为细菌的天敌,具有结构简单、专一性强、分布广泛、繁殖速度快的特点。现今已有很多噬菌体检测食源性致病菌的方法,这些方法方便、快速、高度特异性,特别是当检测费用成为重要的考虑因素时,更有优势。本文对噬菌体检测食源性致病菌的技术原理及其应用进行分类综述和分析。     

噬菌体在检测食源性病原菌中的应用研究进展

食源性病原菌是导致食源性疾病的主要原因之一,现代食品工业的迅猛发展对食品中病原菌的快速检测提 出了更高的要求。噬菌体作为地球上种类最丰富的微生物之一,能够侵染细菌。研究表明,噬菌体不仅具备结构简 单、特异性强、价格低廉等特性,而且具有能够区分活细菌和死细菌的能力,以及容易与其他传统检测方法相结合 等优势,噬菌体及其产物为食源性病原菌的检测提供了新的思路。近年来,噬菌体与免疫学、分子生物学和纳米科 学等学科结合形成的新型快速检测方法已成为国际研究热点。本文就噬菌体检测食源性病原菌的原理及应用进行分 类综述和分析。     

溶血性链球菌LAMP检测方法的建立

目的：研究溶血性链球菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,实现对溶血性链球菌的快速检测。方法：针对溶血性链球菌的scpA 基因设计4 条特异性LAMP 内外引物进行LAMP扩增;优化扩增反应条件;采用包括溶血性链球菌在内的6 种不同菌株进行LAMP 的特异性检测,并酶切鉴定;对溶血性链球菌菌液以无菌水进行10 倍系列梯度稀释后,进行LAMP 扩增检测其灵敏度;将菌掺入牛奶样本并进行LAMP 检测。结果：本法可快速灵敏地检测出溶血性链球菌,反应特异性高,检出限为16.7CFU/mL,而牛奶样本的检出限则达10CFU/mL。结论：LAMP 法可用于食品溶血性链球菌的快速检测。     

环介导恒温核酸扩增法在病原微生物快速检测领域的应用

环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,简称LAMP)是一种新型的核酸扩增方法,可以针对靶基因的目标区域形成多种片段的扩增产物。目前对于LAMP产物的检测主要有沉淀法,荧光法和电泳法。与PCR相比,LAMP不需要模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳等,其扩增与检测过程可以实现一步完成。因此LAMP技术具有快速、简单、高特异性、高灵敏度和成本低廉的优点。随着LAMP技术的不断完善,在可预见的将来,其将在核酸扩增领域逐渐取代PCR反应,推动检测技术向更快捷简便、更精确廉价的方向发展。目前LAMP技术已应用于致病微生物和胚胎性别鉴定等检测,其中致病微生物包括致病细菌、真菌、病毒及寄生虫等。该检测技术在食品安全、临床医疗及水产等主要领域也受到广泛应用。本文主要介绍LAMP反应的特点及其在细菌、病毒、寄生虫和水产动物病原微生物快速检测领域中的应用。     

肉制品中致病菌的在线检验技术

细菌性食物中毒是食物中毒的重要因素。以前国内检测食品中致病菌主要采用传统的培养方法,操作繁琐,检测时间较长。现在一些致病微生物的快速检测技术得到了迅速地发展。本文主要对肉制品中致病菌的检验进行综述,如免疫学中的酶免疫分析、荧光免疫分析等;分子生物学中的核酸探针和聚合酶链反应的检测技术等,旨在对肉制品中致病菌的在线检验技术做出较全面的总结,为食品安全提供理论依据。