米曲霉产氨基酰化酶最佳活力条件的研究

通过在不同的反应时间,反应温度,缓冲液种类及pH条件下测定氨基酰化酶的活力,得出氨基酰化酶的最佳活力条件。试验结果表明,氨基酰化酶在反应温度为37℃、磷酸缓冲液pH为7．5、与底物反应30min时,活力最高。     

米曲氨基酰化酶液态发酵条件的研究

通过单因素和正交试验 ,对米曲霉 3 0 42产氨基酰化酶摇瓶液态发酵条件进行优化。结果表明 ,较优培养基为 :麸皮 2 %,蛋白胨 1 5 %,玉米浆 0 5 %,酵母膏 0 1 %,KH2 PO4 0 2 %,无水MgSO4 0 1 %,吐温 80 0 0 5 %。酶活最高达到 1 2 5 8u/g(湿菌体 ) ,通过对培养条件的研究 ,最佳起始 pH 7.0、温度 2 6℃、装液量 1 0 0mL/L三角瓶。     

米曲氨基酰化酶的固态发酵条件研究

对米曲霉3042产氨基酰化酶的固态发酵条件进行研究,固态发酵培养基中,培养基组分麸皮与豆粕的最佳质量配比为8:2,产酶到达高峰的时间为38～48h。添加底物或底物类似物作为诱导物时,对提高米曲氨基酰化酶的酶活力作用不明显。添加吐温-80和植酸复合促进剂为培养基总质量的0.05%后,米曲霉产酰化酶达到高峰的时间为28～38h,其酶活力与不添加促进剂时的酶活力相比,提高到原来的271.94%。      

米曲氨基酰化酶的固态发酵条件研究

对米曲霉3042产氨基酰化酶的固态发酵奈件进行研究,固态发酵培养基中,培养基组分麸皮与豆粕的最佳质量配比为8:2,产酶到达高峰的时间为38～48h.添加底物或底物类似物作为诱导物时,对提高米曲氨基酰化酶的酶活力作用不明显.添加吐温-80和植酸复合促进刑为培养基总质量的0.05%后,米曲霉产酰化酶达到高峰的时间为28～38h,其酶活力与不添加促进剂时的酶活力相比,提高到原来的271.94%.     

L-氨基酰化酶产生菌的筛选及其固态发酵工艺

从13株米曲霉菌株中筛选到一株产氨基酰化酶活力较高的米曲霉（Aspergillus oryzae）W0607，以米曲霉w0607为生产菌固态发酵生产氨基酰化酶，较适的培养基组成和培养条件为；麸皮7．0g，豆饼粉3．0g，蛋白胨0．3g，水11mL，PH值6．5，发酵温度28℃，发酵周期约48h．在此条件下，米曲霉W0607的氨基酰化酶产率为400u／g左右．     

米曲霉氨基酰化酶的纯化及粗酶性质研究

利用硫酸铵分级盐析法从米曲霉L-09中提取氨基酰化酶,比活力为56.01 U/mg,纯化倍数为2.06,酶活力回收率为80%。详细研究该粗酶的酶学性质。结果表明,经盐析法提纯的粗酶最适pH为7,最适反应温度为55℃,在55℃下热稳定性良好。溶液中的金属离子对酶活力有很大影响。其中,高浓度的Fe~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对酶活力有抑制作用,低浓度的Co~(2+)离子对酶活力有激活作用。     

米曲霉氨基酰化酶纯化方法的研究

比较了盐析法和有机溶剂沉淀法对于米曲霉氨基酰化酶的纯化效果。分别使用硫酸铵、无水乙醇和丙酮对米曲霉氨基酰化酶进行纯化，结果发现：有机溶剂沉淀法的纯化效果优于盐析法。采用丙酮二次沉淀法纯化的氨基酰化酶比酶活为93.20U／mg，纯化倍数为3．26：通过乙醇二次沉淀，得到的酶液比酶活为93.22U／mg，纯化倍数为3．10，而采用盐析法纯化的酶液的比酶活为56.01U／mg，纯化倍数为2.06。从酶的纯化效果方面考虑，丙酮沉淀法最佳，但从工业生产的可行性方面考虑，乙醇沉淀法较好。     

米曲霉M3产蛋白酶特性研究

对比了本课题组从自然发酵的豆酱中分离的三株蛋白酶活力较高的菌株，对其中蛋白酶活力最高的菌株M3的菌丝和孢子形态进行了观察，初步判断为米曲霉，并对其培养条件进行了探索。结果表明：M3在培养基组成为麸皮：葡萄糖：水=9：1：5的条件下，接种3mL孢子菌悬液，28℃培养72h时酶活最高。     

米曲霉诱变方法及其酶系分布对产氨基氮能力影响的研究

通过实验建立了菌株的筛选模型，在此基础上分别对菌株进行紫外、Co60、化学诱变以及复合诱变，结果表明连续复合诱变的效果较好，不同方法诱变所得的菌株具有不同的酶系分布，纤维素酶和果胶酶对发酵过程中的蛋白质分解具有协助作用。在发酵过程中添加酶制剂，使产氨基氮的能力提高了5％。用酶制剂对底物进行预处理后，使菌株产氨基氮的能力提高23％。经过诱变和酶制剂的使用，共使菌株产氨基氮的能力提高了30％。     

米曲霉抗生素A3042的研究初报

生产酱油的米曲霉Ａｓｐｅｒｇｉ１１ｕｓ ｏｒｙｚａｅ３．０４２菌株的酱醪和发酵液，经提取分离和纯化，科单一均匀组分Ａ３０４２。Ａ３０４２桔红色，油状，不溶于水，易溶于有机溶剂，最大紫外吸收峰有２１１ｎｍ，硅胶Ｇ薄板层析Ｒｆ值０．６９，双缩脲和茚三酮反应阴性，酚和硝酸银式剂反应阳性。     

米曲霉蛋白酶动力学特性的研究

研究了在不同底物浓度、温度和pH下米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的动力学特性。在反应时间为10min时,最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为9。实验表明米曲霉蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸的反应符合米氏方程,根据实验数据回归得到温度为40℃时的速度方程为r=0.243CS/0.0282+CS,反应速度与氢离子浓度的关系为r=lgCH++3.14013/0.19759+0.05484(lgCH++3.14013)+(lgCH++3.14013)2。该蛋白酶在50℃下的失活规律符合双指数模型,相对酶活力与时间的关系为a=0.82531e(-0.02169t)+0.17469e(-0.41914t)。在4～50℃的范围内,蛋白酶水解反应的活化能Ea为30.67kJ。还研究了不同化学组分对蛋白酶活力的影响,发现10mmol/L的H3BO3和Mg2+对该蛋白酶有一定的激活作用,而EDTA、SDS、Zn2+、Mn2+和Sn2+对蛋白酶有明显的抑制作用,10mmol/L的H2O2对该蛋白酶的抑制作用不明显。     

DJS水系对米曲霉酶活力提高的研究

研究了DJS水系在酿造酱油制曲中产酶及其活力的影响。试验中与自来水介质进行比较,结果表明:DJS水系能改变米曲霉的孢子数,对其酶活力的提高有显著的影响;在DJS-A介质中的孢子产量虽少于DJS-B介质,而其中的酶活力却较高。     

不同生化因子对米曲霉蛋白酶系活力的影响

研究不同生化因子（金属离子、乙二胺四乙酸（EDTA）和十二烷基磺酸钠（SDS））对米曲霉蛋白酶系（包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶等5种）活力的影响,结果显示：生化因子都对羧肽酶活力有促进作用,影响最强的是Ca2+,其相对酶活达到310%;对酸性蛋白酶活力促进作用最强的是的Mn2+,相对酶活达到317%;而SDS完全抑制其活性。生化因子对中性蛋白酶、碱性蛋白酶和氨肽酶活力主要起抑制作用,抑制能力最强的分别是Ge2+,Fe3+和SDS。Ag+对氨肽酶活力促进显著,相对酶活力达到483%。     

利用米曲霉制作腊八豆的研究

以酿造酱油用的米曲霉经紫外线诱变选育后，人工接种于煮熟的黄豆制作腊八豆。结果表明，接种量为熟豆重量的0．5％(孢了含量10^10个／g菌剂)，经32～35℃、48h前发酵便可得优质霉豆胚，加适量食盐、食用白酒及生姜等拌匀入坛进行10～15d的后发酵，便可获得品质极鲜美，食后余味甘甜的腊八豆，优于毛霉型腊八豆，更优于传统方法制作的腊八豆。比传统腊八豆的制作周期缩短近1个月，便于工业化生产。     

米曲霉As-W6脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究

米曲霉As-W6的脂肪酶发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephadex G-75葡聚糖凝胶过滤层析纯化后得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为86.7倍,回收率为23.2%,相对分子质量为40.8 ku,酶学性质研究结果表明,该脂肪酶最适反应温度和最适p H分别为40℃和7,在40℃以下和p H6⁸之间有较好的稳定性;Ca2+、Mg2+和丙酮能够明显促进提高脂肪酶的活性,而Cu2+、Fe2+、Mn2+和SDS对其有显著抑制作用;当大豆油作为底物时该脂肪酶的酶活力最高,表明其对大豆油具有显著的特异性。      

产纤溶酶的米曲霉筛选及测定方法的研究

利用平板透明圈法作为初筛方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。通过比较发现，可以用自制纤维蛋白代替纤维蛋白原和尿激酶测定发酵液的纤溶酶酶活，在大通量的菌株筛选过程中可以节省大量费用。     

Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮

介绍了Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮的具体做法。采用麸皮保藏法可以使Xi-3米曲霉保藏18年之久且菌种优良性状不变；行之有效的复壮措施，提高了保藏菌株的优良性状和生产性能，为种质资源的可持续发展作出了贡献。     

米曲霉发酵牡蛎调味基料的开发及其风味品质分析

该研究以牡蛎肉为原料,采用米曲霉为发酵菌种,在35℃下恒温发酵制备新型牡蛎调味基料,并对其进行电子鼻分析、顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用分析和感官评价。结果表明,牡蛎肉中挥发性成分以反-2-顺-6-壬二烯醛、1-戊烯-3-醇和2-正戊基呋喃为主,米曲霉发酵后,反-2-顺-6-壬二烯醛的含量大幅升高,1-戊烯-3-醇含量逐渐下降。感官评价结果表明添加0.1%米曲霉发酵48 h后的发酵基料风味最好,此时顺-4-庚烯醛、反-2-顺-6-壬二烯醛等关键挥发性成分的含量最高,其中反-2-顺-6-壬二烯醛的香气活度值达到最大值（OAV=110）,是影响牡蛎发酵基料特征风味的关键成分。此外,牡蛎发酵液在不同发酵时间的感官评价结果与反-2-顺-6-壬二烯醛的相对含量具有良好的线性关系,表明发酵液中反-2-顺-6-壬二烯醛的相对含量与发酵液的感官评价结果的相关系数R2=0.97,说明其具有成为新型牡蛎调味基料风味品质评价指标的潜力。     

牛磺酸对米曲霉蛋白酶活性影响的初步研究

将牛磺酸作为米曲霉生长的强化剂,对米曲霉生长阶段的发芽率、孢子量、蛋白酶活进行了研究。结果表明,添加一定浓度的牛磺酸对米曲霉的生长有促进作用,牛磺酸的添加量0.1%、温度30℃平板培养5 h,米曲霉发芽率为95.12%,比空白组提高了10.3%;牛磺酸添加量0.1%、温度30℃发酵培养基培养72 h,米曲霉孢子数为1.09×1010个/g,比空白组提高了60.3%,米曲霉中性蛋白酶活达到15548 U/g,比空白组提高了38.8%。添加牛磺酸提高了米曲霉的产酶能力,为牛磺酸作为功能因子添加于豆制品提供了理论依据。