淡豆豉纤溶酶的分离纯化

淡豆豉浸提液经过硫酸铵沉淀、CM-Sepharose-FF离子交换色谱和Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤，得到豆豉纤溶酶，经SDS-PAGE表明豆豉纤溶酶为单一谱带。推断DCFE没有亚基，以单体形式存在。经过纯化，豆豉纤溶酶的回收率为3．7％，纯化倍数35．5倍，比活达到10898IU／mg。SDS-PAGE凝胶电泳和Sephacryl S-200凝胶过滤测定的DCFE相对分子质量分别为30．2kDa和31．OkDa，两种方法测定的分子量相近，说明该酶为单体酶。     

豆豉纤溶酶的研究进展

豆豉纤溶酶是由豆豉枯草芽孢杆菌分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶.该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵、酶的提取、活性测定、理化性质以及动物溶栓药效试验进行了综述.     

纤溶酶的分离纯化及其胞外存在方式的初步探索

为了获得纯纤溶酶并确定纤溶酶在枯草杆菌DC-12胞外是否存在酶与酶原2种形式,收集枯草杆菌DC-12不同时间点的发酵上清液进行分离纯化,对纤溶酶及其可能存在的酶原进行纯化和分析,不同时间点的发酵液通过Sephadex G-75凝胶过滤,都出现2个吸收峰.层析液和加入纤溶酶原激活剂尿激酶的层析液在加热的纤维蛋白平板上都有水解圈,并且10μL层析液和2μL巴比妥那缓冲液在加热的纤维蛋白平板上产生的水解圈与10μL层析液和2μL 100U/mL尿激酶所产生水解圈的面积相同.通过SDS-PAGE凝胶电泳发现,Ⅰ峰在44.3ku～66.4ku处有一条带,Ⅱ峰在29ku处有一条带,表明获得了电泳纯的豆豉纤溶酶,可用于后续研究,初步判定豆豉纤溶酶在枯草杆菌DC-12胞外不存在酶原.     

枯草芽孢杆菌纤溶酶的纯化及性质研究

以从牛肉酱中筛选的1株高产纤溶酶的枯草芽孢杆菌为材料,进行发酵产酶。其发酵液经过硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、C M SepharoseCL-6B离子交换层析和电泳制备,得到电泳纯的枯草芽孢杆菌纤溶酶;其分子质量为32.5ku;pI10.9～11.8;具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用;胰蛋白酶对此酶无降解作用,对其纤溶活性无影响;该酶在pH4.0～13.0稳定,对温度的适应范围较广。     

豆豉纤溶酶功能性研究

该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵及纤溶酶提取、活性测定、理化性质、动物溶栓药效试验进行综述并介绍纤溶酶应用前景。     

少根根霉发酵液纤溶酶的分离纯化及部分性质鉴定

以产纤溶酶的根霉菌8B进行发酵,发酵液通过蒸发浓缩、(NH_4)_2SO_4分级沉淀、透析除盐、DEAE阴离子交换纤维素层析、Sephadex G—75凝胶过滤层析对该酶进行纯化,纯化浓缩后酶液活力达到3 978.5U/ mL。结果表明,该纤溶酶在-18～37℃,pH 5～7时性质稳定。该酶即能直接分解纤维蛋白,又能激活血纤维蛋白溶酶原,间接分解纤维蛋白。对家兔血栓的溶解实验表明,8B纤溶酶6h对血栓的溶解率达到52.4%,并且对兔血细胞没有明显损伤,在体外是安全有效的。     

纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究

经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6～10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。     

一种新型纤溶酶SPFE-Ⅲ的分离纯化和纤溶机理研究

本实验室从亚洲传统发酵食品--虾酱中筛选到一株产纤溶酶能力较强的芽孢杆菌(Bacillus sp.nov.SK006),发酵液经乙醇沉淀、离子交换色谱(DEAE-Sepharose CL 6B)、凝胶过滤色谱(Superdex75)后分离纯化出一种电泳纯的纤溶酶SPFE-Ⅲ,分子量约为42.6 kDa,酶活为7.1 U/mg(以plasmin为标准).SPFE-Ⅲ对纤维蛋白原的降解过程为最先降解α链,其次是γ链,而对β链的降解最缓慢;利用加热纤维蛋白平板法研究纤溶酶SPFB-Ⅲ,结果发现该酶对纤维蛋白有直接降解作用,而对纤维蛋白溶解酶原的敏感性较低.     

豆豉纤溶酶分离及其特性的研究

采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶过滤层析,从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在SDS-PAGE电泳中有一个活性峰呈单一条带,分子量为35kDa,活性回收率为22.5%,纯化倍数为11.7;另一活性峰呈三条带,需进一步分离。特性研究表明:在pH7.0左右,温度40℃时,酶活力最高;该纤溶酶不耐热,其纤溶活性可被Mn2+、Mg2+以及Na2SO3激活,Ca2+以及乙醇、明胶对酶活力具有较强的抑制作用;NaCl浓度低于10%,酶活力能够基本保持稳定。     

豆豉纤溶酶分离及其特性的研究

采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶过滤层析,从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在SDS-PAGE电泳中有一个活性峰呈单一条带,分子量为35kDa,活性回收率为22.5%,纯化倍数为11.7;另一活性峰呈三条带,需进一步分离。特性研究表明:在pH7.0左右,温度40℃时,酶活力最高;该纤溶酶不耐热,其纤溶活性可被Mn2+、Mg2+以及Na2SO3激活,Ca2+以及乙醇、明胶对酶活力具有较强的抑制作用;NaCl浓度低于10%,酶活力能够基本保持稳定。      

豆豉纤溶酶活性检测及其纯化研究

通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定收集到的豆豉中纤溶酶的活性,实验结果显示,采集于贵州南明蔡家关的豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,达到了285.759IU/mL.以该豆豉样品为研究对象,对其中的纤溶酶进行了纯化研究,实验确定的最佳纯化方案为:取一定体积的豆豉纤溶酶粗酶液,在低温(4℃)下,加入4％的活性炭粉末脱色35min;在分段盐析中,首先选择15％饱和度的硫酸铵除去杂蛋白,再用75％饱和度的硫酸铵使纤溶酶充分沉淀分离;最后用葡聚糖凝胶G-50层析分离纯化纤溶酶,收集具有较高纤溶活性的组分,得到了纯化的酶液.最终得到的豆豉纤溶酶酶液纯化倍数达到了27.74倍,活性回收率69.7％,比活力达到了13946.1IU/mg.     

亚油酸分离纯化技术研究进展

亚油酸属ω-6型多不饱和脂肪酸,具有独特的生理功能,与人体健康密切相关。由于亚油酸大多来源于天然动植物油脂,其含量尚不能满足食品和制药业的需求,有效分离纯化亚油酸已成为近年来的研究热点。为给亚油酸的分离纯化研究提供参考,综述了近年来国内外亚油酸分离纯化技术的研究进展,系统介绍了尿素包合法、硝酸银硅胶柱色谱法、分子蒸馏法、脂肪酶酶解法、溶剂冷冻结晶法、高速逆流色谱法及耦合法的分离原理及研究成果,并分析了各分离纯化方法的优缺点。两种或多种分离纯化技术耦合可优势互补,提高分离效率,淀粉、三聚氰胺包合法和pH区带精制逆流色谱法则值得进一步深入研究。     

纤溶酶液的脱色及纯化研究

以活性炭、高岭土以及D290和D392离子交换树脂为脱色介质,应用硫酸铵分级盐析以及超滤脱盐的方法,对纤溶酶液进行脱色及纯化。结果表明,D290强碱性阴离子交换树脂脱色效果优于D392弱碱性阴离子交换树脂,活性炭及高龄土不能对粗纤溶酶液脱色。70%饱和度的硫酸铵,工作压力0．11MPa,超滤脱盐纯化倍数达到12．37,冻干酶粉的比活力为638．9U/mg,回收率为73．37%。     

热加工花生的蛋白分离及其过敏原纯化方法研究进展

花生不仅本身是一种营养丰富的食品,而且作为原料或配料广泛应用于食品加工中。然而花生及其制品是FAO/WHO认定的八大类食物过敏原之一,可导致严重的过敏反应,通常伴随终身,甚至危及生命。不同地区的人们食用花生的加工方式不同,其花生过敏的患病率也有所不同,热加工是花生的主要加工方式,因此各类热加工导致的花生致敏性变化成为研究热点。过敏原蛋白的分离作为花生热加工研究中的重要步骤,也变得十分重要。本文主要对常见的3种热加工花生(水煮、油炸和烘烤)中的花生蛋白分离及其过敏原纯化的方法研究进行综述。现有的花生热加工研究中蛋白分离技术主要是通过溶剂浸提;而过敏原纯化技术主要是借助层析法,根据各组分在物理化学性质上的差异进行纯化;此外还可以根据最终研究目的的不同采用其他的辅助方法达到分离纯化效果。通过对现有分离纯化方法进行了解和比较,可为热加工花生过敏原蛋白的分离纯化甚至进一步的分析检测提供理论参考和指导。     

绿原酸提取与纯化分离方法研究进展

绿原酸是一种具有广泛生理活性和药理活性物质,该文综述绿原酸提取和纯化分离方法研究进展,为绿原酸提取与纯化分离深入研究提供参考。     

两种粗提纯法对纤溶酶纯化效果的比较研究

采用硫酸铵盐析法及乙醇沉淀法对海洋枯草芽孢杆菌纤溶酶的纯化效果进行比较研究,得到的最佳纯化方案为：取一定体积的纤溶酶发酵液进行预处理,再进行分段盐析及分级沉淀,在分段盐析中,30％和70％饱和度的硫酸铵分别用于去除杂蛋白和沉淀纤溶酶,最后进行碱处理及超滤除盐;在分级沉淀中,最佳乙醇沉淀时间为1.5h,去除杂蛋白和沉淀纤溶酶的乙醇体积比分别为25％和165％,最后将两种方法得到的粗提液进行冷冻干燥,硫酸铵法的酶活回收率为83.52％,纯化倍数为1.42,冻干粉得率为4.812 g/L,单位酶活为76 755.82IU/g;乙醇纯沉淀法的酶活回收率为89.7％,纯化倍数为1.72,冻干粉得率为7.611 g/L,单位酶活为137 190.57 IU/g,该结果表明乙醇沉淀法对纤溶酶的粗提效果要优于硫酸铵盐析法.     

磷脂分离、纯化和检测方法的研究进展

综述了磷脂分离提纯方法如溶剂萃取法、柱层析法、超临界流体萃取法、金属沉淀法、酶催化法和膜分离法等,以及磷脂化合物的分析检测方法如薄层层析法、高效液相色谱法和新兴的核磁共振法等的发展研究现状.分析了各种分离检测方法的优缺点,展望了磷脂组分分离检测方法的发展方向.     

蛋黄卵磷脂的分离纯化研究进展

该文介绍了卵磷脂的理化性质、生理功能,综述了国内外对蛋黄卵磷脂的分离提取和精制方法及其在食品中的应用等方面的研究进展,展示了其在食品、药品等研究开发方面的广阔前景。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化研究

牛乳经酸沉淀除酪蛋白后,通过超滤、离子交换法分离纯化得到乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝、SDS-PAGE电泳定性定量检测。结果表明:每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.22mg,纯度为95%。