UPLC-MS/MS法测定卡泊芬净血浆浓度

目的: 建立UPLC-MS/MS法测定血浆中卡泊芬净的浓度。方法: 采用AQ C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 3 μm),柱温40 ℃,流动相为甲醇和0.2%甲酸5 mmol/L乙酸铵水溶液梯度洗脱,流速0.4 mL/min,电喷雾离子化,正离子扫描模式下,卡泊芬净m/z 547.5→538.5,罗红霉素m/z 838.6→157.9（内标）,分析时长6.5 min。结果: 卡泊芬净在0.1~25 μg/mL中呈良好的线性关系（R²=0.999 5）;定量下限为0.1 μg/mL;提取回收率为59.08%;日内及日间RSD<15%、准确度、精密度、稳定性等均符合生物样品测定要求。低、中、高和定量下线浓度点的卡泊芬净提取回收率相一致。结论: 本方法操作简单、快捷、准确、灵敏度高且重现性良好,适用于临床上对卡泊芬净血药浓度的快速监测。     

UPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中S-奥拉西坦浓度

目的 建立灵敏、准确的Beagle犬血浆中S-奥拉西坦浓度的UPLC-MS/MS检测方法,并用于该药在Beagle犬体内的药动学研究。方法 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以甲醇-水溶液(85∶15, V/V,内加 10 mmoL 乙酸铵和 0.1%甲酸)为流动相,用 HP Amide LC-MS/MS Column(100 mm×3 mm ID,5 μm)分离,采用电喷雾离子源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,定量分析的离子反应分别为 m/z 159.0/114.1(S-奥拉西坦) 和 m/z 143.0/126.1(内标,吡拉西坦)。结果 S-奥拉西坦线性范围为 0.05~50 μg/mL,定量下限为 0.05 μg/mL,日内、日间精密度(RSD)均小于15%。S-奥拉西坦大鼠血浆样品在储存、预处理、分析期间均显示良好的稳定性。应用此法研究了6只Beagle犬单剂量口服S-奥拉西坦 50 mg/kg 后的药动学特点。结论 该方法快速、专属、灵敏、适用性强,可应用于S-奥拉西坦的临床前药动学研究。     

UPLC-MS/MS法测定人血浆中瑞舒伐他汀的浓度及人体生物等效性研究

目的: 建立和确证超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定人血浆中瑞舒伐他汀（rosuvastatin,RST）浓度的方法,并评价瑞舒伐他汀钙片在健康男性受试者中的药代动力学和人体生物等效性。方法: 选择阿托伐他汀（atorvastatin, ATO）作为内标(IS),50 μL 血浆样品经甲醇沉淀蛋白,YMC-ODS-C₁₈(2.1 mm×50 mm ID,1.9 μm)色谱柱梯度洗脱分离,导入串联质谱（MS/MS）,采用选择反应检测（SRM）进行定量分析,检测的离子对分别为m/z 482.2→258.2（RST）和559.2→440.2 (ATO),建立测定人血浆RST的UPLC-MS/MS法。筛选20名健康男性受试者单次口服瑞舒伐他汀钙片受试制剂或参比制剂,测定RST的血药浓度,并计算两制剂的主要药动学参数及相对生物利用度。结果: 血浆中RST在 0.5~40 ng/mL 范围内线性良好（R = 0.9998）,最低检测限为 0.5 ng/mL,提取回收率92.49%~101.38%,日内精密度﹤4.54%,日间精密度9.59%。RST受试制剂与参比制剂的C_max分别为（11.90±4.54）ng/mL和（11.80±4.08）ng/mL,t_1/2分别为（4.24±2.01）h和（4.74±2.26）h,t_max 分别为（3.40±0.68）h和（3.60±0.82） h,AUC_0-t 分别为（87.7±41.4） ng•mL^-1•h和（96.0±40.9）ng•mL^-1•h,AUC_0-∞分别为（93.1±41.3） ng•mL^-1•h和（101.9±41.9） ng•mL^-1•h,与参比试剂比较,受试制剂的相对生物利用度为(93.1±27.6)% (AUC_0-t)、(94.3±26.2)%( AUC_0-∞)。结论: 所建立的测定人血浆RST的UPLC-MS/MS法具有简便、准确、灵敏、快速等特点,可应用于瑞舒伐他汀钙片的人体生物等效性研究。研究结果表明：受试制剂和参比制剂在人体内处置过程基本一致,两种制剂具有生物等效性,临床上可以替换使用。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中乌头碱的浓度

目的: 建立LC-MS/MS法检测大鼠血浆中乌头碱的浓度。方法: 以维拉帕米作内标,血浆样品经MTBE液液萃取后,采用HyPURITY Cyano (150 mm×2.1 mm, 5 μm)柱分离,流动相为乙腈:10 mmol/L 甲酸铵=(70∶30,V/V),流速为 0.30 mL/min。然后采用电喷雾离子源(ESI源)正离子多反应监测(MRM)扫描分析,乌头碱和维拉帕米的离子选择通道分别为:m/z 646.4→586.4 和 455.2→164.9。结果: 乌头碱的线性范围为 9.3～2390 pg/mL,最低检测浓度为 9.3 pg/mL,日内和日间变异均<15%。结论: 本方法灵敏度高,适用于乌头碱在鼠内的药物代谢动力学研究。     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中4种CYP450探针药物浓度

目的:建立高效液相-串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中非那西丁(1A2),甲苯磺丁脲(2C9),右美沙芬(2D6),咪达唑仑(3A4) 4 种探针底物浓度。方法:采用symmetry C18柱(2.1 mm×50 mm,3.5 μm),流动相为甲醇：0.1％甲酸水溶液(67∶33,V/V),流速为 0.2 mL/min,柱温35 ℃。电喷雾离子化,检测方式为多反应离子监测。以卡马西平为内标,同时检测大鼠血浆中非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、咪达唑仑的药物浓度,并进行其专属性、精密度、准确度、稳定性的验证。结果:非那西丁( 10～5 000 ng/mL )、甲苯磺丁脲( 20～10 000 ng/mL )、右美沙芬( 4～1 000 ng/mL )、咪达唑仑( 4～1 000 ng/mL )线性关系良好,R²>0.99,准确度为95.6%～105.2%,日内和日间精密度RSD(%)<10%,提取回收率>77%,RSD(%)<7%、基质效应在90.7%～100.3%之间,RSD(%)<5.9%,稳定性好。结论:建立了同时快速测定大鼠血浆中4种探针药物（非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、咪达唑仑）浓度的高效液相-串联质谱分析方法,准确度和灵敏度高,专属性强。血浆样品的稳定性好,适用于CYP450酶活性的研究。     

LC-MS/MS快速测定大鼠血浆中HHY-002浓度

目的: 建立用于测定治疗慢性心律失常药物HHY-002的大鼠血浆测定法。方法: 流动相为乙腈-0.1%甲酸(65∶35),流速 0.200 mL/min,色谱柱Phenomenex Luna C₁₈柱(150 mm×2.00 mm,5 μm,5 micron),进样量为 10 μL,柱温 35 ℃,以地西泮为内标。结果: HHY-002在 1.98~1013.50 ng/mL 的范围内呈良好的线性关系(r=0.998),最低定量限达 1.98 ng/mL,绝对回收率高于80%,日内和日间误差小于10%,方法回收率大于(81.4±4.5)%,符合生物样品分析要求。结论: 建立的LC-MS/MS方法专属性强,灵敏度高,可用于HHY-002的体内定量分析。     

LC-MS/MS法同时测定比格犬血浆中氯维地平及其主要代谢物的浓度

目的: 建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定比格犬血浆中的氯维地平及其主要代谢产物去乙基非洛地平（H152/81）的方法,并将其应用于氯维地平脂肪乳注射液在比格犬的生物等效性研究中。方法: 本实验采用尼莫地平作为内标,血浆样品采用蛋白沉淀处理,分析柱为Synergi Polar-RP C₁₈色谱柱(80 A, 4 μm, 50 mm×2.0 mm),流动相为 0.1%甲酸乙腈和 10 mmol/L 醋酸铵水溶液,采用梯度洗脱,使用电喷雾电离源（ESI）,采用MRM扫描方式进行分析。结果: 氯维地平在1~200 ng/mL、去乙基非洛地平在 5~1 000 ng/mL 范围内线性良好（r＞0.995）。待测物的日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析的相关要求。血浆样品经历3次冷冻-解冻循环和-80 ℃ 放置 27 d都是稳定的。结论: 本方法适合用于氯维地平脂肪乳注射液的生物等效性研究。     

HPLC-MS/MS 法同时测定Beagle 犬血浆中槲皮素、山萘酚和异鼠李素

目的 建立同时测定犬血浆中槲皮素、山萘酚和异鼠李素浓度的HPLC-MS/MS 方法。方法 血浆样品经酸水解后用乙醚提取, 采用选择性反应检测方法测定其血药浓度。仪器为FinniganLC-MS/MS 二级四极杆质谱检测器, 色谱柱为Luna C₁₈ (150 mm ×2.00 mm i.d., 5 μm, Luna,USA);流动相为乙腈-0.1 %甲酸, 梯度洗脱。结果 槲皮素、山萘酚和异鼠李素的线性范围均为0.5 ~ 100.0 ng/mL, 三种黄酮的最低定量限均为0.5 ng/mL, 各自日内日间精密度分别小于7.3 %,6.2 %和6.4 %, 回收率分别大于70 %, 66 %和70 %。结论 该测定方法经验证符合血浆样品的测定要求, 可以应用于临床前药代动力学研究。     

LC-MS/MS法同时测定人全血中四种免疫抑制剂类药物浓度

目的: 建立LC-MS /MS法同时测定人全血中环孢素A、依维莫司、他克莫司和西罗莫司的浓度。方法: 人全血样品用乙腈沉淀蛋白后,上清液用叔丁基甲醚提取后选用ZORBAX SB C₁₈(2.1 mm×100 mm, 3.5 μm)色谱柱,流动相采用甲醇10 mmol/L 乙酸铵溶液(均含0.1%甲酸)梯度洗脱,采用电喷雾离子化源,正离子方式,多反应监测(MRM)扫描方式进行监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 1 202.6→m/z 425.1（环孢素A）、m/z 975.8→m/z 908.6（依维莫司）、m/z 821.6→m/z 768.5（他克莫司）、m/z 931.8→m/z 864.2（西罗莫司）和m/z 366.2→m/z 132.0（内标吲达帕胺）。 结果: 全血中环孢素A的线性范围为10~2 000 ng/mL( r=0.996 2), 定量下限为 10 ng/mL,依维莫司、他克莫司和西罗莫司的线性范围为 0.50~100 ng/mL (r＞0.99),定量下限为 0.50 ng/mL;四种药物的平均回收率 95.1%~110.6%;日内、日间RSD均小于15%;提取回收率在 78.6%~85.9%之间。结论: 该方法快速、灵敏、准确,专属性强,重复性好,适用于人全血中同时测定环孢素A、依维莫司、他克莫司和西罗莫司浓度。     

CYP2D6*10和CYP2C19*2基因型多态性与接受他莫昔芬治疗乳腺癌患者生存率的相关性研究

目的: 研究CYP2D6^*10和CYP2C19^*2基因型多态性与接受他莫昔芬(tamoxifen, TAM)治疗乳腺癌患者生存率的相关性研究。方法: 选择2009至2004年本院甲乳外科和肿瘤内科收治的171名术后服用TAM治疗的雌激素阳性乳腺癌患者,调查TAM使用情况和生存状态等相关资料;收集相关的石蜡组织切片用于DNA提取;用PCR技术检测CYP2D6^*10和CYP2C19^*2基因型多态性;查明CYP2D6^*10和CYP2C19^*2基因型多态性与患者生存率的相关性。结果: 本次研究中,CYP2D6Wt/Wt、CYP2D6Wt/^*10和CYP2D6^*10/^*10基因型的总生存率(overall survival,OS)类似,差异无统计学意义(P>0.05)。CYP2C19^*2/^*2基因型的5年OS明显优于CYP2C19 Wt/Wt,差异具有统计学意义(P<0.05);CYP2C19^*2/^*2基因型的10年OS明显优于CYP2C19 Wt/Wt和CYP2C19 Wt/^*2,差异具有统计学意义(P<0.05);但是CYP2C19Wt/Wt与CYP2C19 Wt/^*2的5、10年OS差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 研究结果显示,CYP2D6^*10基因型多态性与服用TAM治疗乳腺癌患者的生存率之间不存在相关性;CYP2C19^*2基因型多态性与接受TAM治疗乳腺癌患者的生存率之间存在相关性,CYP2C19^*2/^*2接受TAM治疗乳腺癌患者的生存率最高,CYP2C19 Wt/^*2生存率较高,CYP2C19 Wt/Wt较低。     

LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度及其药代动力学应用

目的：建立LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度并应用于人体药代动力学研究。方法：采用液-液萃取法从人血浆中提取安立生坦和内标后,在Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×100 mm, 5 μm）上进行色谱分离,有机相：40%甲醇-60%乙腈,水相：5 mmol/L乙酸铵-10%乙腈,流速：0.5 mL/min,电喷雾离子化源,多反应监测,负离子模式,安利生坦和内标的监测离子对分别为m/z 377.1→301.2和m/z 380.4→301.0。结果：安立生坦在2～2 000 ng/mL浓度范围内线性良好,定量下限为2 ng/mL,批内精密度小于2.72%,批间精密度小于8.98%,经内标归一化后的基质效应在92.3%～98.3%之间,提取回收率在74.6%～80.5%之间。 结论：该方法灵敏、经济、可靠,适用于人血浆中安立生坦浓度的测定,满足人体药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中格列美脲及其活性代谢物

目的: 建立同时测定格列美脲(Glimepiride,G)及其活性代谢物羟基格列美脲(Hydroxyl-glimepiride,M₁)血浆浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法: 血浆样品酸化后,经乙酸乙酯萃取后浓集进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈ (50 mm×3.0 mm,5 μm),甲醇∶水∶甲酸(80∶20∶0.1)为流动相,流速为 0.2 mL/min,柱温为室温,采用电喷雾(ESI) 离子源,多反应离子检测模式, 以格列齐特(Gliclazide,IS)为内标。G、M₁和IS的检测离子对分别为质荷比(m/z) 491.4→352.4、507. 4→352.4、324.4→127.2。结果: G和M₁的线性范围分别为 1.25～400 ng/mL 和 0.313~100 ng/mL,最低定量限分别为 1.25 和 0.313 ng/mL;批内批间精密度均小于10%,方法回收率均在 96.4% ~102.5%之间。结论: 该方法简便快速、特异性高,可用于同时测定G和M₁血药浓度及其人体药代动力学的研究。     

LC-MS/MS法测定犬体内托拉塞米浓度及相对生物利用度研究

目的: 建立LC-MS/MS法测定Beagle犬体内托拉塞米的浓度,并研究托拉塞米缓释片的相对生物利用度。方法: 色谱柱为Waters Symmetry-C₁₈ (100 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇∶20 mmol/L 甲酸铵(65∶35,V∶V);流速 0.4 mL/min;柱温 30 ℃。采用两制剂双周期随机交叉试验设计,分别给予6只Beagle犬受试制剂或参比制剂 5 mg,采用LC-MS/MS法测定给药后不同时间的血药浓度。结果: 托拉塞米线性范围为 0.02~5 μg/mL,最低定量限为 0.02 μg/mL,分析方法灵敏、稳定、特异性高。受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:峰浓度(C_max)、达峰时间(t_max)和药-时曲线下面积(AUC_{0-48 h})分别为(2.6±0.5) g/mL 和 (3.0±0.6) g/mL、(3.3±1.4) h 和(1.2±0.8) h、(36.1±11.0) g·h·mL^-1和(32.1±13.1) g·h·mL^-1。以AUC_{0-48 h}计算,受试制剂的相对生物利用度F为(118.0±28.3)%。结论: 该方法操作简单、准确、重复性好,并成功地运用于犬体内托拉塞米相对生物利用度的研究。     

HPLC-MS/MS法测定雷诺嗪血药浓度及其缓释制剂的药代动力学研究

目的:通过方法学的建立和确认,进行了单次给药雷诺嗪缓释片后的药动学研究,为该药临床研究及合理用药提供依据。方法: 12名健康受试者,男女各半,采用三周期、3交叉(3×3)拉丁方设计,实验分别单剂量给500、1000、1500 mg 雷诺嗪缓释片。分别于给药前(0 h)和给药后 0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0、16.0、24.0、36.0、48.0 h 采集静脉血 4 mL。采用LC-MS/MS法测定血浆样品中雷诺嗪的浓度,并计算主要的药动学参数。结果: 单剂量给药500、1000、1500 mg 雷诺嗪缓释片后C_max分别为(742±253)、(1355±502)和(2329±890) ng/mL;AUC_0-48分别为(9072±3400)、(16574±6806)和(29324±10857)ng·mL^-1·h;AUC_0-∞ 分别为(9827±3152)、(16882±6791) 和(29924±10706) ng·mL^-1·h;t_max分别为(5.3±1.4),(4.2±1.2)和(5.9±2.8) h;t_1/2分别为(6.4±3.3),(6.4±3.5)和(6.7±4.3) h。结论:在本次实验中,C_max 和AUC 与剂量成比例增加,单次给药3个剂量有很好的线性关系,所有受试者都有较好的耐受性。