HPLC-MS法研究碘化N-正丁基氟哌啶醇在兔体内的药代动力学

目的: 研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)在兔体内的药代动力学过程。方法: 6只新西兰兔耳缘静脉注射碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)2.0 mg·kg^-1后采集血样,用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术测定血浆药物浓度,并用3p97 软件拟合计算药代动力学参数。结果和结论: 兔耳缘静脉给药后的血药浓度-时间曲线符合二室开放模型,其主要药动学参数为:分布半衰期T_12α是0.10 h,消除半衰期Σ_12β 是6.4 h,曲线下面积AUC 为183 μg·h^-1·L^-1,中央室分布容积VC 为4 L,清除率Cl 为12.9 L·h^-1。HPLC-MS 联用方法测定F2 血药浓度,灵敏度高,专属性强。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对Egr-1 转录及表达的影响

目的: 应用大鼠心肌缺血再灌注模型观察碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide,F₂) 对早期生长反应蛋白-1(early growth response-1,Egr-1) 转录及表达水平的影响, 及其对心肌炎症及心功能的改善作用。方法: 结扎大鼠冠状动脉左前降支, 制成急性心肌缺血再灌注损伤模型, 缺血前5 min, 舌下静脉推注F₂, 监测血流动力学的变化, 病理组织切片观察缺血心肌组织炎性反应变化。应用RT-PCR 方法及Western-blot 方法分别检测缺血组织Egr-1 mRNA 及蛋白水平变化。结果: 与对照组相比, F₂ 治疗组心肌组织内炎性反应及Egr-1 的转录与表达均降低, 心肌功能也得到明显改善。结论: F₂具有明显抑制缺血再灌注大鼠心肌组织内Egr-1mRNA 及蛋白表达、减轻炎性损伤的作用, 这可能是F₂ 对心肌缺血再灌注损伤显著保护作用的机制之一。     

雌二醇抑制动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖

目的 探讨雌二醇对去势大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增殖的影响。方法 8 ~ 10w k SD 大鼠雌性(n=21)、雄性(n=21),各分3 个组:非去势对照组(n=7),去势对照组(n=7),实验组(n=7,去势+雌二醇)。腹腔注射雌二醇3 d 后,2.0F PTCA 球囊损伤左颈总动脉。损伤2wk 后处死大鼠,测量内膜面积和中膜面积、内膜面积与中膜面积的比值。结果 雄性实验组内膜面积(0.072±0.020)mm²、内膜面积与中膜面积的比值 0.533±0.037 均显著小于非去势对照组 (01.10±0.018)mm²,0.740±0.051 ,P均<0.01,也均小于去势对照组(0.098±00.14)mm²,0.701 ±00.40,P均<0.05。雌性实验组内膜面积(0.061±00.15)mm²、内膜面积与中膜面积比值 0.525 ± 0.030均显著小于去势对照组 (0.101±00.18)mm²,07.10±0.031 ,P均<0.01,但与非去势对照组(0.078 ± 0.012)mm²、0.619 ±0.041 差异不显著,P均>0.05。结论 雌二醇能够抑制去势大鼠动脉损伤后内膜增殖。     

雌二醇对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和内皮功能的影响

目的 研究雌二醇对血管内皮损伤后血管壁细胞增生和内皮功能恢复的作用。方法 应用球囊导管剥脱大鼠的左颈总动脉,于术前六天和术后两周给予17-β雌二醇,通过形态学分析和免疫组化测定血管内膜增生和血管平滑肌细胞增殖程度,并测定乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应。结果 17-β雌二醇显著抑制血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖和减少新生内膜面积。内皮损伤后乙酰胆碱诱导的血管舒张反应显著降低,最大为12%±6%;雌二醇能使其显著改善,最大舒张反应为48%±9%(P<0.05)。结论 雌二醇显著抑制血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖和促进内皮功能的恢复。     

Fas 配体基因对大鼠颈动脉损伤后血管中层平滑肌细胞密度的影响

目的 探讨腺病毒载体介导Fas 配体(FasL) 基因导入对大鼠颈动脉损伤后血管中层平滑肌细胞密度的影响。方法 实验分治疗组(Ad-FasL 组) 和正常对照组两组(Ad-βgal 组), 每组动物均为6 只。利用重组腺病毒载体分别将Ad-FasL 、Ad-βgal 导入大鼠颈动脉球囊损伤的内膜, 3 、14 d 后观察其对血管中层平滑肌细胞密度的影响。结果 与正常对照组相比较, 通过腺病毒载体介导导入FasL 基因的被球囊损伤的大鼠颈动脉,3 d 后损伤血管中层平滑肌细胞密度降低, 14 d后血管中层平滑肌细胞密度恢复到正常水平。结论 FasL 可抑制血管中层平滑肌细胞密度, 从而抑制球囊损伤后的内膜增生。     

KATP通道开放剂吡那地尔对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 研究吡那地尔(pinacidil, Pin) 对内皮素-1(ET-1) 诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。方法: 内皮素-1 刺激培养兔PASMC 增殖模型;以氚-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR) 掺入法观察细胞增殖及脱氧核糖核苷酸(DNA) 合成;流式细胞仪技术检测兔PASMC 细胞周期。结果: 吡那地尔可剂量依赖性的抑制内皮素-1 所致的[³H]-TdR 掺入量增多, 阻止兔PASMC 由静止期(G₀/G₁ 期) 进入DNA 合成期(S 期) 和有丝分裂期(G₂/M 期) 。ATP敏感性钾通道(K_ATP) 阻断剂格列本脲可拮抗吡那地尔对[³H]-TdR 掺入的抑制作用。结论: 吡那地尔可能通过激活K_ATP通道抑制内皮素-1 诱导兔肺动脉平滑肌细胞的增殖, 可望用于治疗肺动脉高压时所致的肺动脉重构。     

氧化甾醇抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及诱导其凋亡的作用1

目的: 研究 3β, 5α, 6β-胆甾烷三醇(Triol) 和25-羟胆固醇(25OH) 对 VSMC 增殖的影响, 探讨氧化甾醇在动脉粥样硬化(AS) 发病中的作用和意义。 方法: 培养和鉴定新西兰白兔主动脉 VSMC; 以含不同浓度的Triol 和 25OH 的培养液作用于VSMC 为实验组, 不含氧化甾醇或含胆固醇的培养液作为对照组。 VSMC 增殖及其代谢活性以 WST-1 测定, 细胞凋亡以光镜、透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL) 判断。结果: 在1×10^-9 ~ 1 ×10^-7mol^·L^-1 范围的 Triol 和 25OH 对VSMC 的 WST-1代谢活性无明显变化(P >0.05), 而≥1×10^-6mol^·L^-1 的氧化甾醇则使其代谢活性显著下降 (P <0.01); ≥20 ×10^-6 mol^·L^-1 的 Triol 和25OH 诱导VSMC 胞体皱缩变小、染色质在核周边浓集、核碎裂、 空泡和凋亡小体形成等超微结构变化; TUNEL 呈阳性反应。结论: 小剂量氧化甾醇无促进VSMC 增殖而较大剂量氧化甾醇可诱导 VSMC 凋亡。     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的: 探讨血管紧张素II 在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用, 并研究福辛普利对其的影响。方法: 采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素II 作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2 表达的变化和福辛普利对其的影响。结果: 血管紧张素II 对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngII 作用, 对细胞凋亡有一定的影响, 同时可影响凋亡调控基因的表达。结论: 血管紧张素II 具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用, 尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngII 对血管平滑肌细胞的作用。     

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究中华眼镜蛇毒F 组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。 方法 用体外培养的血管平滑肌细胞, 观察F 组分对20 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸(H³-TdR) 掺入的影响, 用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 测定F 组分对20 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原(Proliferationcell nuclear antigen, PCNA) 表达的影响。 结果 F 组分呈浓度依赖性抑制20 %小牛血清引起的细胞对H³-TdR 掺入率和细胞内C-myc、PCNA 的表达, 其中30、100 mg·L^-1给药组与对照组比较有显著差异(P <0.05)。 结论 中华眼镜蛇毒F 组分通过影响细胞内原癌基因C-myc、PCNA 的表达, 抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 研究马齿苋总黄酮(Portulaca total flavone,PTF)对血小板源性生长因子-BB型(PDGF-BB)致血管平滑肌细胞(Vascular smoothmuscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨其机制。方法: 采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF(8、24、72 mg/L)对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内 [Ca²⁺]_i。结果: PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G₁/G₀ 期的细胞数增多,而G₂/S期的细胞数显著减少(P<0.01);能抑制高K⁺诱导的VSMC内[Ca²⁺]_i升高(P<0.01)。结论: PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca²⁺]_i有关。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

姜黄素对血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖及PTEN表达的影响

目的:研究在血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB）诱导下姜黄素对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMCs）增殖以及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homology deletedon chromosome ten,PTEN）的影响，为侗族药物“姜黄”的临床应用提供更丰富的实验依据。方法:用20 ng/mL PDGF-BB孵育大鼠VSMCs 24 h，建立细胞增殖模型。MTT和CCK-8法观察姜黄素对VSMCs的细胞活性的影响，流式细胞术检测细胞周期，细胞划痕实验观察细胞迁移力，RT-PCR和Western blot观察PTEN mRNA、PTEN蛋白以及磷酸化PTEN（p-PTEN）蛋白的表达情况。结果:在20 ng/mL PDGF-BB的诱导下，10、30 μmol/L的姜黄素可显著抑制VSMCs增殖，以10 μmol/L姜黄素为最佳作用浓度，其不仅可以使细胞周期中G0/G1期比例明显升高，S期比例降低，还能显著抑制VSMCs迁移。同时可以上调PTEN mRNA和PTEN蛋白的表达，下调p-PTEN蛋白的表达。结论:姜黄素可以抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖与迁移，其对PTEN的影响，可能与上调PTEN mRNA和PTEN蛋白，下调p-PTEN蛋白相关。