基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析原料乳冷藏过程中脂类代谢组学

为探究4 ℃冷藏过程中原料乳脂类物质的变化,以酸价及过氧化值为衡量标准判定原料乳的脂肪氧化情况;采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱技术对各冷藏阶段脂类代谢物的差异及变化进行分析。结果显示,冷藏过程中原料乳酸价及过氧化值持续升高,其中0～1 d升高速度最快。差异代谢物分析显示,乳代谢体系变化极为复杂,脂类代谢物种类及变化在所检测的6 类显著性差异代谢物中最突出,从初始的9 种增至24 种。进一步分析脂类代谢物表达量时发现游离脂肪酸、磷脂表达量分别在冷藏3～4 d和冷藏6 d会发生较大波动。结合KEGG通路分析,发现游离脂肪酸参与的脂肪酸生物合成在各冷藏阶段变化显著（P＜0.05）;冷藏3 d时脂类代谢物通路数量最多,共计9 条。因此,冷藏3 d可作为原料乳冷藏品质控制的关键节点。     

Illumina MiSeq高通量测序技术研究原料乳冷藏过程中微生物群落演替规律

为探究原料乳在4℃冷藏过程中细菌群落及其演替规律,采用Illumina MiSeq高通量测序技术对乳罐中原料乳的细菌16S rDNA V4-V5区测序,对冷藏不同时间的细菌群落进行表征.结果表明,原料乳中的菌群随冷藏时间的变化而变化.整个冷藏期内,各样本共有OTU数29个,其中冷藏初期样本的特有OUT个数最多,为157...     

原料乳中血乳定性检测方法

研究了原料乳中血乳的检测方法,样品通过离心机离心后在离心力的作用下导致比重关系改变使的血乳下沉,通过目视判定是否含血乳.方法检出限为0.02mg/kg,且此方法操作简单,结果准确,适用于乳品企业进行原料乳中血乳的检测.     

原料乳冷藏时间对牦牛乳硬质干酪理化指标的影响

冷链贮存运输已广泛运用于各大乳制品生产,冷藏时间的长短对原料乳及其制作的干酪理化品质具有重要影响。该研究以冷藏24、48、72 h牦牛乳为原料制作硬质干酪,比较了硬质干酪成熟过程中的理化指标变化规律。结果表明,在0～6个月成熟期中,冷藏24、48、72 h牦牛乳制成的硬质干酪中水分含量、脂肪含量呈现降低趋势,NaCl含量呈现增加趋势。pH值在成熟初期下降,到成熟后期又逐渐升高;pH 4.6可溶性氮、12%三氯乙酸可溶性氮和游离氨基酸总量呈现增加趋势。整个成熟过程中,3组牦牛乳硬质干酪中pH 4.6可溶性氮、12%三氯乙酸可溶性氮以及游离氨基酸总量始终为冷藏72 h组>冷藏48 h组>冷藏24 h组。该研究可为牦牛乳的冷藏及其在干酪加工中的应用提供理论参考。     

冷藏乳制作的牦牛乳硬质干酪成熟过程中生物胺含量的变化

目的:揭示冷藏原料乳制作的干酪成熟过程中生物胺含量变化规律,评价其质量安全性。方法:以冷藏24,48,72 h牦牛乳制作的硬质干酪为研究对象,利用高效液相色谱法对干酪成熟过程中生物胺含量进行测定。结果:在0～6个月成熟过程中,不同冷藏牦牛乳制作的硬质干酪中生物胺含量呈升高趋势。牦牛乳冷藏时间从24 h延长到72 h时,其干酪中总生物胺、2-苯乙胺、尸胺、酪胺和腐胺含量也依次增大。成熟4个月后,冷藏72 h牦牛乳制作的硬质干酪中各生物胺含量明显高于其余两组干酪。成熟6个月时,冷藏72 h原料乳制作的牦牛乳硬质干酪中生物胺总量和酪胺含量分别为(212.94±8.03),(81.04±3.92) mg/kg。结论:随着原料乳冷藏时间和干酪成熟时间的延长,干酪中生物胺含量增多,但是原料乳冷藏时间低于72 h时,其干酪中生物胺含量低于学者建议含量。     

冷藏对南果梨酯类香气合成关键酶活性及蛋白表达的影响

以南果梨为试材,系统分析冷藏及冷藏后常温货架期间南果梨果实酯类香气物质的变化,研究酯类香气物质代谢途径关键酶脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)和醇酰基转移酶(alcohol acyltransferase,AAT)活性及蛋白表达水平的变化,探讨冷藏对南果梨酯类香气物质代谢影响的作用机制。结果表明,与冷藏90 d相比,冷藏180 d的南果梨在出库时以及冷藏后转入常温货架期果实后熟至最佳食用期时,果实酯类香气成分种类、主要香气成分与总酯含量均明显减少;冷藏过程中果实LOX和AAT活性与表达量变化不明显,但在冷藏后常温货架期间,冷藏180 d的处理果实LOX和AAT活性以及LOX蛋白表达高峰出现的时间较冷藏90 d的处理果实提早3 d,AAT活性显著低于冷藏90 d的处理,LOX和AAT蛋白表达水平也显著低于冷藏90 d的处理。由此可见,长期冷藏一定程度上抑制了南果梨酯类香气物质合成关键酶活性与蛋白表达,从而影响了果实酯类香气物质的合成,降低了冷藏南果梨的香气品质。     

原料乳生产过程中微生物污染的来源追溯研究

为研究原料乳微生物污染的来源,2011-2012年间,研究者对北京市原料乳产地的牛乳、牛体涂抹、挤乳设备涂抹等及生活用水、卧床土壤、饲料等进行了大量采样分析和调查,并针对采集样品中分离出的目的菌株进行了生化鉴定及分析.研究结果表明,该地区原料乳中的特征病原菌为金黄色葡萄球菌,对后期加工乳品质影响较大的微生物种类为嗜冷菌和芽孢杆菌属.在此基础上,研究者对原料乳和其他来源样品中的这三种菌利用16S rRNA分子生物学技术建立了目的菌株来源系统发育树,以此来进行基因序列比对分析,确定了原料乳中这三种菌的主要来源,为有效减少和控制该地区原料乳污染提供了参考.     

原料乳中嗜冷菌的危害分析及控制研究

采用分离培养基从牧场的原料乳样品中分离得到嗜冷菌,经鉴定为荧光假单胞菌.进一步研究了不同杀菌方式下嗜冷菌对贮存过程中乳品品质的影响,结果表明,原料乳经115℃高温灭菌,然后进行55℃保温1h灭酶处理,有助于控制嗜冷菌的生长,与25℃贮存相比,在4℃贮存8d后,其蛋白质和脂肪含量相对较高.     

牛乳和驼乳中酪蛋白的差异蛋白组学分析

为深入研究牛乳和驼乳中酪蛋白的差异蛋白组学分析,采用双向电泳和质谱联用技术在蛋白质水平上探讨牛乳和驼乳的差异性,获得其中差异蛋白质,并以此为标识物建立了驼乳中牛源性成分的检测方法,进一步促进驼乳以及驼乳酪蛋白的研究和开发。用双向电泳技术（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）对牛乳和驼乳中酪蛋白进行了初步分离分析。结果表明：与牛乳酪蛋白相比,在驼乳酪蛋白的2-DE图谱中发现差异蛋白斑点有40个,其中33个蛋白在驼乳酪蛋白中表达缺失,7个蛋白在驼乳酪蛋白中表现为低表达,对低表达的蛋白斑点（10、11、13、16、63、64、127）进行Maldi-TOF-TOF质谱鉴定,成功回收和鉴定了这7个低表达蛋白的中5个,归属为3个蛋白,分别是酪蛋白2、κ-酪蛋白A片段、β-酪蛋白。说明驼乳和牛乳酪蛋白之间的确实存在一定差异性,可以以此差异蛋白为检测标识物来建立驼乳中牛源性成分的检测方法,来满足驼乳及乳制品真实性问题的检测需求。     

不同冷藏时间牦牛乳中细菌群落结构和理化性质比较

低温贮藏有利于确保原料乳质量,然而也面临原料乳中嗜冷菌增多的风险,因此,了解不同冷藏时间原料乳中细菌群落结构变化对乳品工业持续发展具有重要意义。为此,该试验利用高通量测序技术和乳成分分析仪,分析和比较了4 ℃下贮藏24、72 h牦牛乳的细菌群落特征和理化特性。结果表明：冷藏24、72 h牦牛乳中第一、二优势菌属为乳球菌属、金黄杆菌属,该两类菌属的细菌分别占到冷藏24、72 h牦牛乳中细菌相对丰度的59.48%和67.51%。冷藏72 h牦牛乳中乳球菌属、金黄杆菌属相对丰度比冷藏24 h牦牛乳高出22.74%、3.56%,但是冷藏72 h牦牛乳中链球菌、不动杆菌属呈现降低趋势。冷藏24、72 h牦牛乳中假单胞菌属相对丰度较低,分别为1.69%和1.78%。冷藏72 h牦牛乳中酪蛋白、脂肪含量低于冷藏24 h牦牛乳,酸度增加到14.66 ºΤ。72 h的低温冷藏有助于控制牦牛乳细菌繁殖,维持乳品质。该研究为牦牛乳贮藏,干酪等乳制品加工,确保其品质和质量安全提供了理论依据。     

山羊乳及绵羊乳外泌体miRNAs表达谱的分析与差异比较

为揭示山羊乳和绵羊乳外泌体的潜在功能差异,对山羊乳和绵羊乳外泌体进行提取和鉴定,利用Illumina平台对羊乳外泌体中非编码小RNA(sRNA)进行高通量测序,并对微小RNA(miRNA)表达谱和功能进行注释。在山羊乳外泌体中鉴定出161种已知miRNAs序列和5种新型miRNAs序列;绵羊乳外泌体中鉴定出80种已知miRNAs序列和7种新型miRNAs序列,其中miR-148a、miR-26a和let-7b在2种羊乳样本中表达量较高。miR-151只在山羊乳外泌体样本中检出。通路富集发现山羊乳miRNAs靶基因分子功能集中在结合和催化活性等方面,而绵羊乳外泌体miRNAs靶基因具有肠菌素结合的功能,且对宿主发育具有一定促进作用。结果提示山羊乳和绵羊乳来源的miRNAs可能具有某些共性和独特的靶基因类型,可能在缓解病原微生物感染、炎症、抑制癌细胞增殖迁移等方面发挥不同功能。上述miRNAs测序与分析研究可为羊乳外泌体的后续功能开发提供参考。     

原料乳中铵盐掺假检测方法

通过向原料乳中人为添加定量铵盐测试试剂,研究原料乳中铵盐掺假物质定性检测的方法。实验结果表明,该方法用于检测原料乳中铵盐质量分数在0．025％以上,具有良好的可操作性,同时方法操作简单,结果便于观察,适用于在养殖、收购、乳制品企业等进行原料乳质量验收检验。     

牛乳与山羊乳中乳桥蛋白的比较研究

山羊乳是近年来备受瞩目的动物乳源,含有在婴儿早期发育中发挥多种生物活性的乳源性骨桥蛋白（osteopontin, OPN）,也被称为乳桥蛋白（lactopontin, LPN）,但目前关于山羊乳LPN的研究还较少,对于其结构特点及与牛乳LPN的差异还未见相关报告。通过对山羊乳和牛乳中LPN进行序列相似度分析,并进行富集和测定,比较两者在磷酸化修饰的差异,探讨山羊乳LPN与牛乳LPN结构的异同。结果显示,山羊乳和牛乳LPN完全相同的氨基酸比例高达90.94%,并且均存在同样的整合素蛋白结合序列。山羊乳LPN未鉴定到O-糖基化修饰,山羊乳LPN和牛乳LPN的磷酸化修饰位点基本一致,但同一位点的磷酸化修饰位点覆盖率在两者间略有差异。结果说明,山羊乳LPN可能具有与牛乳LPN相似的生物活性。     

原料乳中微生物的多样性

牛乳营养丰富,适合各种微生物的生长繁殖。该文介绍了原料乳中微生物的种类,综述了国内外近年来关于原料乳中微生物多样性的研究进展。并对非培养微生物学在研究原料乳中微生物多样性的应用进行了总结,高度评价了非培养方式的快速、敏感以及可定义纯培养方式无法发现的微生物的特点。     

原料乳中碳酸钙掺假的检测方法

研究了原料乳中碳酸钙掺假的检测方法,样品通过离心沉淀出的碳酸钙遇盐酸生成二氧化碳,产生气泡,根据是否有气泡产生定性判定牛乳中是否掺有碳酸钙.结果表明,该方法用于检测原料乳中碳酸钙含量在0.1％的浓度添加量.以上含量具有良好的重现性,同时方法操作简单,结果准确,适用于乳品企业进行原料中碳酸钙含量的检测.     

原料乳中体细胞检测方法

本实验通使用亚甲基蓝作为染色剂,对原料乳中体细胞核进行染色,详细的规范了操作细节,通过公式进行计算,得到原料乳中体细胞数目,该方法实用有效。     

草原红牛原料乳品质分析

以草原红牛原料乳为研究对象,分析了泌乳期、胎次和饲养方式对草原红牛乳品质的影响。结果表明,泌乳期、胎次和饲养方式均对草原红牛乳的品质有显著影响(P0.05)。种牛基地饲养、泌乳前期、二胎草原红牛乳的干物质质量分数较高。将草原红牛乳与荷斯坦牛乳进行对比分析,发现草原红牛乳的常规成分、氨基酸和脂肪酸组成均优于荷斯坦牛乳。可以说,草原红牛乳是高营养价值的优质乳。     

原料乳中尿素掺假检测方法的研究

研究原料乳中尿素含量的定性检测,结果表明,该方法用于检测原料乳中“尿素”含量在0.5g/L以上具有良好的可操作性,同时方法操作简单,结果便于观察,适用于在养殖、收购、乳制品企业等进行原料乳质量验收检验.     

原料乳中嗜冷菌的检测

针对原料乳中嗜冷菌的一种快速检测方法进行了初步研究。由于嗜冷菌能在乳中产生大量的耐热性脂肪酶,所以我们在脂肪酶活与嗜冷菌数之间建立了一种线性关系,进而通过4-硝基苯酚游离释放法测定脂肪酶的活力来得到嗜冷菌数。     

原料乳中硫氰酸钠掺假定性检测方法

研究了原料乳中硫氰酸钠掺假快速定性检测方法,通过向原料乳样品中加入一定量的铁盐溶液,乳样与铁盐溶液接触面的颜色变化与硫氰酸钠掺入量有关,通过显色判定乳样中是否掺有硫氰酸钾。结果表明,该方法用于检测原料乳中硫氰酸钾质量分数在0．01％以上具有良好的重现性,同时方法操作简单,结果准确,适用于乳品企业进行原料乳质量验收检验。