卡托普利与黄芪对氧化损伤人脐静脉内皮细胞保护作用的研究

目的: 观察血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)卡托普利、中药黄芪以及两者合用对损伤HUVEC的保护作用,并探讨其机制。方法: 将HUVEC分为：（1）正常对照组;（2）H₂O₂损伤对照组;（3）卡托普利和黄芪单用低、中、高浓度组;（4）卡托普利与黄芪合用低、中、高浓度组。收集细胞,测定各组细胞活力（MTT）、抗氧化指标（MDA、SOD、NO等）以及VEGF蛋白含量。结果: 除黄芪低浓度组外(P>0.05),正常对照组、卡托普利各浓度组、黄芪中高浓度组及合用组分别与H₂O₂损伤对照组比较,细胞活力（MTT）、SOD活性以及NO含量均显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。卡托普利、黄芪低、中、高浓度联合与单独作用比较,MDA含量降低,MTT ( OD )、SOD活性、NO含量以及VEGF蛋白含量升高,均具有统计学意义(P<0.05)。结论: 卡托普利、黄芪对氧化损伤HUVEC具有保护作用,可提高其活力,增强SOD活性,增加NO和VEGF含量,降低MDA含量,呈现一定的浓度依赖性,而相同浓度的两药联合应用时保护作用更明显。     

熊果酸减轻高糖高脂诱导的人主动脉内皮细胞损伤

目的：探讨熊果酸（ursolic acid, UA）对人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells, HAEC）高糖高脂损伤的影响及机制。方法：MTT法选取合适的高糖和棕榈酸钠（sodium palmitate, SPA）损伤浓度以及UA预孵浓度。采用试剂盒检测NO、ROS的含量,乳酸脱氢酶（LDH）的释放率以及抗氧化酶包括总超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。Western blot法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1）、半胱天冬酶-1（caspase-1）以及GSDMD的蛋白表达情况。Hoechst33342联合PI荧光染色检测细胞膜的完整状态以探讨焦亡发生情况。观察UA对HAEC的保护作用。结果：预孵UA（1 μmol/L和5 μmol/L）可以减轻高糖高脂（30 mmol/L GLU+0.1 mmol/L SPA）造成的HAEC损伤,提升HAEC活力,减轻氧化应激损伤,增加NO的释放和eNOS的蛋白表达,减少黏附分子的蛋白表达,减少细胞焦亡。 结论：UA可能通过减轻高糖高脂诱导的HAEC氧化应激反应,抑制细胞焦亡的发生,减轻内皮细胞损伤。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的: 研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法: 以不同浓度乙醇(50、100和 200 mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞 24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果: 乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论: 乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

丁苯酞通过内质网应激途径抑制氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探究丁苯酞（N-butylphthalide,NBP）通过内质网应激途径对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,给予NBP(5、10、20 mg/L)、4-苯丁酸（4-phenylbuturicacid,PBA,4 mmol/L）预处理1 h,再加入ox-LDL（100 mg/L）培养。CCK-8法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测培养基中乳酸脱氢酶（latic dehydrogenase,LDH）的水平,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的水平,Western blot法和RT-qPCR法检测内质网应激信号关键蛋白CHOP、GRP78的表达水平。结果:ox-LDL可以诱导HUVECs中内质网应激途径激活,从而促进细胞的凋亡;NBP呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的HUVECs损伤,细胞活力提高,凋亡率下调,同时LDH的水平降低;研究发现,NBP与PBA类似,可以抑制CHOP、GRP78的表达,抑制内质网应激的激活。结论:丁苯酞可以抵抗ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制与抑制内质网应激途径有关。     

蛹虫草提取物对内毒素引起小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:观察蛹虫草提取物对内毒素引起小鼠急性肺损伤的保护作用。方法:建立内毒素急性损伤小鼠肺病理模型, 造模4 和8 h 后, 用蛹虫草提取物治疗, 造模24 h 后, 对血细胞和肺灌洗液中细胞进行计数并测定肺灌洗液中蛋白酶的活性和蛋白的含量。结果:蛹虫草提取物对血液成分没有明显影响, 但可以使肺灌洗液中白细胞、粒细胞的含量有所降低, 而淋巴细胞和单核细胞的数量有所增加, 蛋白酶活性降低。结论:蛹虫草提取物可调节机体组织的免疫功能, 可以缓解由于内毒素或类似物质造成的肺部炎症, 具有一定的肺保护作用。     

白杨素减轻人脐静脉内皮细胞的氧化应激损伤

目的: 观察白杨素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）氧化应激损伤的保护作用。方法: 常规培养HUVEC细胞,分为5组：对照组,不加任何干预;H₂O₂组,用400 μmol/L过氧化氢处理2 h;白杨素高、中、低剂量组,提前用100、50、25 μmol/L的白杨素孵育12 h,然后用400 μmol/L过氧化氢处理2 h。处理结束后,用MTT法检测活细胞数目,并检测乳酸脱氢酶（LDH）的漏出。收集细胞上清液及细胞裂解液,检测NO、丙二醛（MDA）产量及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。用荧光染料DCEF-DA染色后,酶标仪检测活性氧（ROS）的产量。用荧光定量RT-PCR的方法检测黏附分子的表达。结果: 过氧化氢导致内皮细胞活细胞数目减少,LDH漏出增多,MDA、ROS产生增多,SOD活性下降,黏附分子表达增多,内皮细胞NO产生减少,eNOS活性下降。提前用白杨素预孵,可以增加细胞存活率,减轻氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,eNOS蛋白活性增加,细胞NO的产量增加。结论: 白杨素可以减轻HUVEC的氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,增加细胞NO的合成能力。     

烟酸姜黄素酯对低剪切应力诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的: 探讨烟酸姜黄素酯（curcumin nicotinate,CN）对低剪切应力（low shear stress, LSS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及机制研究。方法: 运用平行平板流动腔建立LSS诱导的HUVECs凋亡模型。采用Hoechst33258荧光染色,流式细胞术检测CN对LSS诱导的HUVECs凋亡的影响。Western blot检测CN对LSS诱导的HUVECs中前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）蛋白表达的影响。结果:Hoechst33258荧光染色结果显示,与静态培养组比较,LSS组（3 dyne/cm2,12 h）内呈现凋亡状态的HUVECs明显增多。与LSS组比较,各CN+LSS组内呈现凋亡状态的HUVECs明显减少,并且呈现浓度依赖性。其中以20 μmol/L CN+LSS组凋亡细胞数最少;流式细胞术结果显示,与静态培养组比较,LSS组HUVECs凋亡率明显增加,差异有显著统计学意义（P<0.01）;与LSS组比较,各CN+LSS组HUVECs凋亡率明显减少,并且呈现浓度依赖性,其中以20 μmol/L CN+LSS组HUVECs凋亡率减少最为明显,差异具有显著统计学意义（P<0.01）。Western blot结果显示与静态培养组比较,LSS组内PCSK9蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与LSS组比较,CN+LSS组内PCSK9蛋白表达下降,并且呈现浓度依赖性,差异具有统计学意义（P<0.05）。其中以20 μmol/L CN+LSS组PCSK9蛋白表达下降最为明显(P<0.01)。结论: CN能够抑制LSS诱导的HUVECs凋亡,其作用机制与CN下调LSS处理的HUVECs中PCSK9蛋白表达相关。     

β-榄香烯抗氧化损伤作用的实验研究

目的: 利用内皮细胞氧化损伤模型和鹌鹑饵食性高脂血症模型,研究β-榄香烯的抗氧化损伤作用。 方法: 采用过氧化氢(H₂O₂)建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤模型,观察不同浓度(0.1、1、10 mg/L)β-榄香烯对细胞内活性氧水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响;采用高脂饲料喂养法建立鹌鹑高脂血症模型,观察β-榄香烯对鹌鹑血清SOD活性、MDA和一氧化氮(NO)含量的影响。 结果: β-榄香烯可降低内皮细胞内活性氧水平,升高SOD活力,降低MDA含量;β-榄香烯升高鹌鹑血清中SOD活性和NO含量,降低MDA水平。 结论: β-榄香烯具有较强的抗氧化、清除氧自由基及保护血管内皮细胞作用。     

甘草素对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响及机制

目的: 研究甘草素对高糖干预下心肌细胞（H9C2）凋亡的影响,探讨其可能机制。方法: 培养H9C2细胞,分为正常对照组（Control组）,高糖组（HG组）,高糖甘草素（终浓度10、30、100 nmol/L）干预组（HG+Liq组）。采用CCK-8法测定各组细胞的存活率;应用Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测活性氧（ROS）含量;生化法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果: 高糖干预使H9C2心肌细胞活力减弱、ROS生成增多、SOD活性下降与MDA增加,并引起细胞凋亡增加、Bcl-2/Bax表达比值降低。与HG组相比,HG+Liq组（终浓度30、100 nmol/L）的细胞存活率显著提高（P<0.05,P<0.05）,ROS水平降低（P<0.05,P<0.05）,SOD活性升高（P<0.05,P<0.05）,MDA含量降低（P<0.05,P<0.05）,细胞凋亡率减少（P<0.05,P<0.05）。Western blot结果显示,高糖甘草素（终浓度100 nmol/L）干预组的Bcl-2和Bax表达比值与HG组相比有显著提高（P<0.01）。结论: 甘草素通过抑制ROS的产生,抑制氧化应激、抑制心肌细胞凋亡,从而减少高糖所致的H9C2心肌细胞损伤。     

白藜芦醇通过上调miR-26a改善高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤

目的:研究白藜芦醇（RES）对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19损伤的保护机制。方法:高葡萄糖（HG）刺激ARPE-19细胞诱导建立损伤模型。分别采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）实验检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率、DCFH-DA染色流式细胞仪检测活性氧（ROS）生成和定量即时聚合酶链锁反应（RT-qPCR）技术检测miR-26a表达水平。Western blot方法分析相关蛋白表达水平。结果:HG刺激明显降低ARPE-19细胞活力,凋亡率升高及氧化应激损伤加重。RES改善HG诱导的ARPE-19细胞损伤;上调HG诱导的ARPE-19细胞中miR-26a表达,miR-26a沉默部分逆转了RES对HG诱导的ARPE-19细胞损伤的保护效应。另外,RES还可通过上调miR-26a表达降低细胞外调节蛋白激酶（ERK）和Wnt/β-catenin信号通路活化。结论:RES通过上调miR-26a表达,伴随抑制ERK和Wnt/β-catenin信号传导,改善HG诱导的ARPE-19细胞损伤。RES可能成为治疗糖尿病视网膜病变的药物。     

血管紧张素-(1-7) 对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的:观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)] 对血管紧张素II(Ang II) 致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养的HUVECs随机分为4 组:对照组, AngII 组, Ang-(1-7) 组, AngII+Ang-(1-7) 组。采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH) 漏出;流式细胞仪检测细胞凋亡;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs 上清液中一氧化氮(NO) 和内皮素-1(ET-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II(0.1 μmol°L^-1)显著增加HUVECs LDH 漏出(P<0.01)、ET-1 分泌(P<0.01) 和HUVECs 凋亡率(P<0.01), 显著减少NO 的含量(P<0.05);Ang-(1-7) 呈剂量依赖性抑制了Ang II 的促LDH 漏出、ET-1 分泌、增加细胞凋亡等作用, 同时明显促进HUVECs 的NO 释放;单用Ang-(1-7) 对HUVECs 无明显影响。结论:Ang-(1-7)可抑制Ang II 所致的体外培养HUVECs 损伤, 对内皮细胞具有保护作用。     

丁苯酞对于糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞能量代谢的影响及保护作用

目的: 研究糖氧剥夺（OGD）条件下丁苯酞（NBP）对于人脑微血管内皮细胞（HBMEC）能量代谢的影响及保护作用。方法: 采用糖氧剥夺（OGD）方法处理HBMEC细胞,将细胞分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC细胞、模型组为OGD处理的细胞、低剂量组为OGD+5 μmol/L的NBP、中剂量组为OGD+10 μmol/L的NBP、高剂量组为OGD+20 μmol/L的NBP。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、钠-钾-三磷酸腺苷酶（Na ⁺ -K ⁺ -ATPase）和钙-三磷酸腺苷酶（Ca ²⁺ -ATPase）活性、细胞内钙离子的浓度;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst33342法进行活细胞染色;高效液相色谱法检测细胞中磷酸腺苷（AMP）、二磷酸腺苷（ADP）、 三磷酸腺苷（ATP）的含量,能荷EC值。结果: 模型组中细胞活力、Na ⁺ -K ⁺ -ATPase、Ca ²⁺ -ATPase的活性降低,而细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率明显提高,能量代谢中模型组ATP、ADP的含量降低,AMP含量增高,EC值明显降低。NBP干预后可以提高细胞活力,提高Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase酶活性,降低细胞中钙离子浓度和细胞凋亡率,且还可以提高细胞中ATP、ADP的含量,降低AMP的含量,提高EC值,具有剂量依赖性。结论: NBP可以保护HBMEC在OGD条件下的损伤,其作用机制和改善细胞能量代谢、抑制细胞内超钙有关。     

系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体和抗β2糖蛋白I抗体水平及其对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的: 检测抗内皮细胞抗体(AECA)和抗β₂GP-Ⅰ抗体在SLE患者血清中的水平及探讨AECA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。方法: 收集系统性红斑狼疮(SLE)患者90例和正常对照40例,留取血清,经酶联免疫吸附法(ELISA)检测AECA和抗β₂GP-Ⅰ抗体水平。收集SLE患者部分临床指标,分析AECA和抗β₂GP-Ⅰ抗体水平与临床指标间的关系。将不同浓度AECA的SLE患者血清加入HUVEC培养基,应用四唑盐比色试验(MTT)法检测各组OD值判断内皮细胞增殖状态。结果: SLE患者血清中AECA和抗β₂GP-Ⅰ抗体水平显著高于正常对照组(P<0.01)。在90例SLE患者中33例抗β₂GP-Ⅰ抗体阳性,该33例SLE患者对应的AECA、APTT水平和SLE活动评分(SLEDAI)积分均显著高于其余57例SLE患者(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。同时该33例患者AECA和抗β₂GP-Ⅰ抗体水平呈高度正相关(r=0.984, P<0.01),AECA和抗β₂GP-Ⅰ抗体水平均与SLEDAI呈正相关(P<0.05),抗β₂GP-Ⅰ抗体水平与凝血酶原时间(PT)间存在正相关(r=0.349, P<0.05)。空白对照组、健康对照血清组和低浓度AECA血清组间OD值无差异,而高浓度AECA血清组OD值显著低于以上3组(P<0.05)。结论: AECA和抗β₂GP-Ⅰ抗体与SLE疾病活动相关,AECA在体外对HUVEC增殖有抑制作用。