多光谱法和分子对接模拟研究鞣花酸与牛血清蛋白的相互作用

鞣花酸（EA）是一种具有抗氧化、抗癌、抗突变、抗炎等多种生理活性的天然多酚,鞣花酸与蛋白的相互作用直接影响其在人体的转运与代谢。本文运用多种光谱学方法与分子对接模拟法研究EA与牛血清蛋白（BSA）互作的反应机理。紫外光谱和荧光光谱研究结果表明：EA通过静态方式猝灭BSA的内源荧光,EA与BSA按1.5∶1比例通过自发的放热过程结合,形成稳定的复合物,初步确定其主要作用力为范德华力和氢键。红外光谱和圆二色谱研究表明：EA的加入对BSA的二级结构影响显著,导致BSA中α-螺旋结构减少,β-折叠、β-转角和无规则卷曲结构增加,且EA与BSA间可能存在疏水作用力。分子对接模拟进一步验证了上述光谱分析结果,说明主导EA和BSA结合的作用力除范德华力和氢键外,还有一定的疏水作用力。EA在BSA上的最佳结合位点位于亚结构域ⅡA与亚结构域ⅢA间的疏水空腔内,距离site Ⅰ更近。EA与His145、Pro110、Arg458等残基间存在疏水相互作用,与Arg144残基间存在氢键作用。本研究阐明EA与BSA相互作用的分子机制,为EA在体内转运及代谢研究提供了参考。     

鞣花酸的护肝作用及机制研究进展

肝脏是人体重要的解毒器官,易受到有害物质损伤而演变为各种类型的肝脏疾病,严重危害人类健康,防治肝病备受关注。与传统化学药物治疗肝病相比,天然来源的护肝活性物具有安全、高效且副作用低等优点,已被广泛应用于肝病的防治,开发具有多途径、多靶点护肝作用的天然活性物是防治肝病的重要保障。鞣花酸(Ellagic acid,EA)是自然界中天然的多酚物质,具有良好的抗氧化、抗炎等生物活性,尤其在护肝活性方面展示出了极大的潜力,受到国内外学者广泛深入的研究;然而,EA护肝作用的研究工作尚缺少归纳总结。因此,本文旨在综述EA护肝作用及其分子机制研究进展,为其今后在防控肝脏疾病方面的研究与应用提供理论依据。     

新型天然抗氧化剂——鞣花酸

鞣花酸(EA)属多酚类化合物,存在于多种水果、坚果和蔬菜中。研究发现,鞣花酸具有较强的抗脂质过氧化、抗诱变及捕捉自由基的能力,是一种亟待开发的天然抗氧剂。本文综述了鞣花酸的生理活性、抗氧化作用机理及其制备途径。     

曲酸提取工艺优化及其对酪氨酸酶抑制作用的分子机制

目的：开发新型、高效、安全、精准的酪氨酸酶抑制剂。方法：采用正交试验对曲酸提取工艺条件进行优化,通过酶动力学研究曲酸对酪氨酸酶的抑制作用,并借助分子对接技术分析其与不同来源酪氨酸酶的作用机理。结果：曲酸提取最优工艺条件为活性炭用量5%,脱色温度75 ℃,pH 2.0,脱色时间50 min,此时曲酸纯度为97.85%;曲酸对酪氨酸酶单酚酶及双酚酶的IC₅₀分别为13.33,53.32 μg/mL;曲酸与蘑菇、小鼠、猩猩及人酪氨酸酶的XP对接得分分别为-7.515,-5.011,-5.537,-3.638,MM-GBSA结果分别为94.47,-110.80,-1.17,6.45 kJ/mol。结论：最优工艺条件下可显著提高曲酸的纯度,曲酸对酪氨酸酶为竞争性抑制作用,不同来源酪氨酸酶与曲酸结合形成不同类型的非共价键,即抑制剂与不同种类酪氨酸的结合稳定性存在差异。     

鞣花酸提取、纯化及其生物活性研究进展

植物界富含多种有益于人体健康的天然物质,并对人体健康起到一定的辅助功能。鞣花酸是一种存在于多种水果与坚果中的天然多酚二内酯,其具有抗氧化、抗炎、抑制细菌生长等多种生物活性,并在癌症治疗和疾病预防方面具有很大的应用潜力。国内外众多学者对鞣花酸生物活性进行深入研究,其在人类疾病、肿瘤治疗以及生产生活中应用前景十分广泛。本文对鞣花酸的提取方法、纯化方法以及抗癌、抗氧化、抗炎等多种生物活性的研究进行了归纳总结,为后续鞣花酸的研究提供一定的参考。     

石榴皮中鞣花酸的抗衰老性能及机理研究

利用光谱法研究了石榴皮中鞣花酸的抗衰老性能和机理。首先,通过分光光度法考察了鞣花酸对DPPH·、·OH和·O2-等3种自由基的清除率和弹性蛋白酶抑制率,结果证明了鞣花酸抗衰老能力强。其次,以弹性蛋白酶为研究对象,利用光谱法探讨了鞣花酸对弹性蛋白酶的作用机理。结果表明,鞣花酸与弹性蛋白酶发生作用并形成络合物,当鞣花酸的质量浓度为4.57 mg/m L时,鞣花酸对弹性蛋白酶的抑制率高达88.26%。当鞣花酸浓度低于4.0×10-5mol/L时,其荧光猝灭机理主要是静态猝灭,鞣花酸浓度较高时动态猝灭所占比例增加。因此,鞣花酸可以作为天然自由基清除剂与弹性蛋白酶抑制剂应用于抗衰老化妆品中。     

水解法制取五倍子鞣花酸的研究

以五倍子为原料浸取单宁酸,由单宁酸酸解制备鞣花酸。用高效液相色谱法测定水解后鞣花酸的含量,采用L9（34）正交设计实验,对盐酸浓度、水解温度和水解时间等因素进行了考察。鞣花酸的最佳水解条件为:盐酸浓度2mol·L-1、水解温度120℃、水解时间60min。      

苯甲酸及其类似物与酪氨酸酶分子对接研究

以AutoDock 4.2和iGEMDOCK 2.1分子对接软件对13 种苯甲酸类似物与酪氨酸酶进行模拟对接研究,探讨苯甲酸类似物对接结合自由能与实验测得的酶抑制活性的关系,并对分子对接结果进行分析。结果表明：AutoDock 4.2程序中Cu电荷数的设置对结合自由能有显著影响,铜电荷数为2.0时,苯甲酸类似物结合自由能和pIC50（－lgIC50）线性相关系数可达0.803 6。iGEMDOCK 2.1预测苯甲酸类似物的结果线性较差,即AutoDock 4.2较iGEMDOCK 2.1预测酪氨酸酶抑制剂的可靠性更高。     

HPLC法测定白兰地中鞣花酸

运用高效液相色谱法(HPLC)建立一种测定白兰地中鞣花酸含量的方法,该方法简单快速,准确性和稳定性好。通过测定发现,不同品质的白兰地中鞣花酸含量不同。该研究也为进口白兰地的品质和酒龄鉴定提供一种可行的方法。     

水解法制取五倍子鞣花酸的研究

以五倍子为原料浸取单宁酸,由单宁酸酸解制备鞣花酸。用高效液相色谱法测定水解后鞣花酸的含量,采用L9(34)正交设计实验,对盐酸浓度、水解温度和水解时间等因素进行了考察。鞣花酸的最佳水解条件为:盐酸浓度2mol·L-1、水解温度120℃、水解时间60min。     

甜茶中鞣花酸抗过敏性实验研究

以甜茶根为原料,经提取、溶剂萃取、重结晶等手段,得到鞣花酸晶体;对甜茶中鞣花酸进行抗过敏的研究。通过多种致敏动物模型实验证实,鞣花酸能显著降低被动皮肤过敏小鼠皮肤蓝斑的光密度值;以及能明显拮抗过敏介质组织胺所致的小鼠毛细血管通透性增加;明显抑制二硝基氯苯所致迟发型皮肤过敏反应;抑制磷酸组织胺引起的豚鼠致痒反应。结果表明,鞣花酸抗过敏作用很强。这是首次从甜茶中分出具有抗过敏活性的单体。     

保健品功能因子鞣花酸研究进展

鞣花酸是国内外正在开发的保健食品功能因子之一。本文综述目前现有的鞣花酸生产工艺,评价鞣花酸的毒性,介绍其抗氧化、抗癌及其他生理活性以及机理研究进展。     

石榴功能物质鞣花酸研究进展

鞣花酸是石榴中重要的酚类物质之一,具有抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌等生物学效应,与石榴保健功能密切相关。笔者概括了鞣花酸的结构、理化性质、石榴中鞣花酸提取工艺和含量测定、代谢途径和保健功能等,以期为石榴功能品质的栽培调控和加工产品的开发利用提供参考。     

RP-HPLC法测定石榴汁中鞣花酸的含量

目的:建立检测石榴汁中鞣花酸的含量测定方法。方法;采用高效液相色谱法,ArcusEP-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%TFA为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长254nm。结果:鞣花酸0.004～0.064μg之间线性关系良好,平均加样回收率为99.32%。结论:方法精密可靠,可作为检测石榴汁中鞣花酸含量的方法。     

对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化反应的抑制机理

本文研究了对羟基肉桂酸(HCA)对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸和催化二酚底物L-多巴的抑制能力,并利用紫外-可见光谱、荧光光谱以及分子对接技术探究了其抑制机理。结果表明对羟基肉桂酸对酪氨酸酶催化单酚底物L-酪氨酸比催化二酚底物L-多巴具有更强的抑制作用,半抑制浓度分别为0.096 mmol/L和0.500 mmol/L;紫外-可见分析发现对羟基肉桂酸能与Cu2+发生螯合,使光谱发生明显红移。进一步通过荧光光谱分析得到,对羟基肉桂酸在酪氨酸酶溶液中并没有出现荧光淬灭反而随着对羟基肉桂酸浓度的增大荧光强度变强,说明对羟基肉桂酸被酪氨酸酶催化氧化成对应的醌类物质。利用分子对接技术揭示了对羟基肉桂酸通过氢键和疏水作用竞争性地占据了单酚和二酚底物的空间位置,并与酪氨酸酶中双核铜离子螯合,从而抑制酪氨酸酶催化L-酪氨酸和L-多巴氧化的活性机理。     

葡萄汁中鞣花酸的定性与定量分析

鞣花酸的含量是影响葡萄汁感官指标的重要因素。对鞣花酸的测定有多种方法, 以纸色谱分析法、ＨＰＬＣ 分析法、光学分析法、质谱分析法等对葡萄汁中的鞣花酸作定性和定量分析。     

高效液相色谱法测定成熟龙眼各部位游离鞣花酸含量

采用高效液相色谱法测定石峡、储量两个品种成熟龙眼各部位游离鞣花酸含量。鞣花酸提取条件为80%甲醇溶液,70℃回流2h。色谱条件为:C18色谱柱(250mm×4.5mm,5μm)、柱温35℃、进样体积10μL、检测波长254nm、流速1mL/min,流动相为甲醇-水-冰乙酸(50:49.7:0.3,V/V)。鞣花酸在1～200μg/mL范围内与峰面积呈线性关系,相关系数为0.999。取5个样品瓶分别进样,得到样品保留时间相对标准偏差(RSD)值为1.0%,峰面积RSD值为0.8%。对同一瓶样品连续进样10次,保留时间和峰面积的RSD值分别为0.15%和0.2%。加标回收结果表明平均加标回收率为95.97%～101.9%。测定结果表明石峡和储量各部位鞣花酸的含量大小顺序均为果核>果皮>果肉,其中果皮和果核中鞣花酸远大于已报道的其他水果中的含量。     

高温高压条件制备石榴皮鞣花酸的试验研究

目的:探索制备石榴皮鞣花酸新方法。方法:以高压蒸汽灭菌器为反应装置,分别研究了水解温度(压强)、水解时间和硫酸浓度(v/v)对鞣花酸得率的影响,并对工艺参数进行优化。结果:在最佳工艺条件:水解温度(压强)115℃(169 k Pa)、水解时间2 h、硫酸浓度6%(v/v)时,鞣花酸得率最高达3.09%,与常压相比得率提高了25.10%。结论:高温高压条件下水解石榴皮单宁制备鞣花酸效率较高,为生产工艺的改进提供了技术依据。      

海藻酸钠-明胶-鞣花酸共混膜的制备及特性

以海藻酸钠和明胶为成膜基质,利用溶液共混法荷载鞣花酸,在不同pH值下制备5 种共混膜。采用不透明度、质量损失率、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率、抑菌圈直径以及傅里叶变换红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR）和扫描电子显微镜（scanning electronmicroscope,SEM）表征共混膜的性能和结构。结果表明：添加鞣花酸可以明显改善共混膜的不透明度和DPPH自由基清除率,5 种共混膜体系对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用,对革兰氏阴性菌（大肠杆菌、沙门氏菌）的抑制作用较强,改变pH值也会影响共混膜的性能。pH 9.0的海藻酸钠-明胶-鞣花酸共混膜性能最优,其不透明度为15.54,水溶性为0.38%,水蒸气透过系数为0.74×10－10 g/（m·s·Pa）,DPPH自由基清除率为57.42%。FTIR谱图和SEM图显示鞣花酸可以与海藻酸钠-明胶共混膜交联,5 种共混膜都有完整的形貌结构和良好的相容性。     

鞣花酸对甲醛致小鼠肝损伤的保护作用

为探究鞣花酸对甲醛引起的小鼠肝损伤的保护机制,选取32只8周龄雄性ICR小鼠随机分为对照组（生理盐水）,甲醛模型组（333 mmol/L）,鞣花酸低剂量组（33 mmol/L）和鞣花酸高剂量组（66 mmol/L）。连续灌胃14 d后,解剖并获取肝脏,用于称重且计算其肝脏指数,观察肝脏的形态学变化,分析肝脏中的丙二醛含量（MDA）和超氧化物歧化酶活性（SOD）,并通过荧光定量PCR检测肝脏的细胞因子表达水平。与甲醛模型组相比,鞣花酸给药组的肝脏组织,肝细胞排列规则,肝细胞中空泡减少;低剂量组SOD活性（0.97 U/mg）和SOD1（0.98）、SOD2（0.98）表达水平增加,MDA含量（38.51 nmol/mg）和NF-κB（0.78）、IL-1β（0.63）、IL-6（0.87）、TNF-α（0.85）、Bax（0.70）、Caspase-3（0.96）的表达水平降低,高剂量组SOD活性（1.16 U/mg）和SOD1（1.23）、SOD2（1.11）,表达水平增加,MDA含量（43.25 nmol/mg）和NF-κB（0.49）、IL-1β（0.61）、IL-6（0.38）、TNF-α（0.79）、Bax（0.68）、Caspase-3（0.93）的表达水平降低。结果表明,鞣花酸通过其抗氧化,抗炎和抗凋亡的特性对甲醛诱导的小鼠肝损伤具有一定的保护作用。