农杆菌介导的棉花茎尖遗传转化及转betA植株的产生

以棉花种子无菌苗裸露的茎尖分生组织为受体,采用农杆菌介导法进行转化。感染小苗经共培养后移栽入花盆,用选择剂除草剂筛选。然后对除草剂抗性植株进行分子检测,获得了转基因植株。通过不同菌液浓度、浸染时间、真空渗透处理和表面活性剂Silwet—L77、Tween80等使用的比较实验,优化了转化条件,提高了转化频率,最高转化率达13．23％。该技术体系避开了棉花组织和细胞培养过程,能高效获得转基因植株。采用该体系我们将胆碱脱氢酶基因betA和突变的乙酰乳酸合成酶基因als导入到3个棉花优良品种中,获得了抗除草剂氯磺隆和耐盐性提高的转基因植株及其子代。     

基因枪法转化小麦及转基因植株的获得

应用基因枪法转化了小麦幼胚,成熟胚及胚性愈伤组织,成功地将携带有豇豆胰蛋白酶抑制剂（ＣｐＴＩ）基因以及选择标记潮霉素磷酸转移酶基因的质粒ｐＢＣＡ－Ｈｐｔ导入小麦胚性愈伤组织。通过在选择培养基上严格筛选后获得潮霉素抗体愈伤组织,并进一步分化培养获得完整的小麦再生植株。ＰＣＲ检测结果显示抗性愈伤组织和再生植株细胞内存在有目的基因序列,证实其为转基因材料。     

Tid基因对水稻的转化及转基因植株的抗虫性

利用基因枪转化法将大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)基因Ti^d转入北方推广的水稻(Oryza sativa L)品种丰优301和通887，所获得的潮霉素抗性植株通过GUS组织化学分析、PCR检测、Southern blot分子检测，证实Ti^d基因已经转入水稻基因组中，为转基因植株。用转基因水稻植株叶片进行了室内饲喂水稻二化螟(Chilo suppressalis)实验，抗虫性分析结果表明，与对照比较，部分转基因水稻植株明显地增强了对水稻二化螟虫的抗性。对转基因R1代植株进行PCR和PCR Southern分析，表明外源基因在转基因植株后代今稳定遗传。     

南荻遗传转化系统的建立及转基因植株的获得

建立了南荻愈伤组织高频诱导与再生系统及其转化愈伤组织的筛选系统 ,并通过本研究所建立的基因枪转化系统 ,将马铃薯蛋白酶抑制基因导入南荻愈伤组织而获得转基因植株     

南荻遗传轮系统的建立及转基因植株的获得

建立了南荻愈伤组织高频诱导与再生系统及其转化愈伤组织的筛选系统,并通过本研究所建立的基因枪转化系统,将马铃薯蛋白酶抑制基因导入南荻愈伤组织而获得转基因植株。     

发根农杆菌R1000对野葛的遗传转化及其影响因素

初步研究了发根农杆菌R10 0 0对野葛 (Puerarialobata)的遗传转化及其影响因素。结果表明 :经发根农杆菌R10 0 0感染 13d左右可获得毛状根 ,毛状根诱导率及诱导密度分别为 17 9%和 3 9;降低YEB活化液的 pH值 ,或以肌醇 (10 g/L)代替酵母提取成分 ,可明显提高该菌种的致根性 ;叶片预培养 2～ 3d可提前 4d出根     

菰黑粉菌遗传转化体系启动子的筛选

目的:构建菰黑粉菌(Ustilago esculenta P. Henn.)高效的遗传转化体系。方法:基于菰黑粉菌RNA-seq结果,筛选出10个高强度启动子,以pUMa932为基础载体,将异源启动子P_(otef)使用DNA无缝克隆技术替换成所筛选的启动子构建相关载体,以菰黑粉菌UeT55为实验材料,基于PEG介导原生质体转化构建表达菌株。通过qRT-PCR测定不同启动子下eGFP的表达量,并用Image J软件分析测定转化子的荧光强度。结果:启动子P_(mdh1)、P_(mix17)、P_(eno)、P_(qcr8)驱动的eGFP基因表达量和荧光强度与对照P_(otef)无显著差异,启动子P_(mia40)、P_(sti1)、P_(odc2)驱动的eGFP基因表达量和荧光强度均显著低于对照,而启动子P_(hsp)、P_(ef)、P_(cox12)驱动的eGFP基因表达量分别比P_(otef)驱动的高9倍、5倍、2倍以上,荧光强度分别高6倍、4倍、1.5倍以上,均显著高于对照。结论:P_(hsp)启动子表达能力最强,且表达稳定,适宜作为强启动子用于菰黑粉菌遗传转化体系构建。     

根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化方法

利用根癌农杆菌介导转化系统，成功实现了丝状真菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的遗传转化，转化率约为60～190个转化子／10^6个孢子。PCR检测和Southern杂交分析表明，T-DNA已整合进木霉菌基因组中，而且大多都是以单拷贝的形式整合，转化子都能够稳定遗传。农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点，因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。     

转PSAG12-ipt基因水稻植株的获得及其延衰性的初步研究

运用农杆菌转化法将叶片衰老抑制基因PSAG12-ipt转入南方推广的优质籼型不育系中A、恢复系明恢63、南胜10号,所获得的潮霉素抗性植株通过GUS组织化学分析、PCR检测、Southern blot分子检测证实,PSAG12-ipt已经转入水稻基因组中.对转基因植株进行了延衰性考察,结果表明,与对照组相比,部分转基因水稻植株明显表现出叶片推迟衰老,提高了单株有效穗数、千粒重.对转基因R1代植株进行了PCR和PCR Southern分析,表明外源基因在转基因植株后代中稳定遗传.     

转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析

利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因（sck）导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中,经筛选剂PPT3次筛选及再生过程,获得可育的再生植株。经PCR及Southern blot分子检测,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示：外源基因在植物已获表达,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。     

农杆菌介导的油菜脂肪酸调控基因工程研究

采用农杆菌介导法,将反义的油酸脱饱和酶基因（Fad2基因）导入油菜,获得了7株转基因植株。与对照植株比较,有5株转基因油菜产生的种子中脂肪酸含量发生变化,表现为油酸含量升高,亚油酸、亚麻酸含量降低,其中油酸最高含量为68．72％,比对照高20％以上。     

模具钢表面激光沉积316L不锈钢的组织转变及差异性

为了揭示Cr系注塑模具钢表面采用异种材料沉积过程的组织演变机制,在两种模具钢表面沉积316L不锈钢,利用扫描电镜、电子探针、X射线衍射仪等表征微观组织及硬度特征,并结合熔凝动态过程及Schaeffler相图分析界面及沉积层区组织转变机理。结果表明:由于基体元素组成及组成相分布的差异,导致在沉积层界面的组织转变呈现明显差异性。高Cr莱氏体钢组织过渡区厚度为200μm,过渡区组织形态和组成相明显区别于沉积层其他区域,碳化物在过渡区经历了先局部聚集性长大、之后枝晶间均匀分布等复杂变化;而P20钢沉积层的组织过渡区厚度小于20μm,组织以枝晶方式生长且与沉积层非过渡区连通,同时枝晶内发现了弥散分布的颗粒状碳化物。在熔池中C,Cr,Ni等元素的动态变化作用下,两种钢沉积层的非过渡区组成相也呈现明显差异,高Cr莱氏体钢和P20钢沉积层的基体相分别为奥氏体相与马氏体相,由此导致其硬度值变化范围分别为295~325HV_0.2和500~575HV_0.2。     

拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜的遗传及表达

通过卡那霉素抗性鉴定,对甘蓝型油菜westar转基因后代T2代株系进行了研究.结合PCR检测及序列比对验证,对拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜后的遗传表现进行了分析,并利用GUS染色和花色素苷积累量的比较,对CRY1基因C末端在转基因油菜中的表达进行了研究.结果表明:转化的外源目的基因多数以嵌合形式,少数以单拷贝和嵌合的混合形式整合到转基因油菜的基因组中;目的基因能稳定地遗传给后代,株系间遗传传递率为62.5%;T2代的遗传行为少数呈现孟德尔遗传,多数呈现非孟德尔遗传现象;拟南芥CRY1基因能在转基因油菜中表达,但也出现了沉默现象.     

Effect of Hf additions on phase transformation,microstructural stability,and hardness of nanocrystalline 304L stainless steels synthesized by mechanical alloying

304L stainless steels with Hf additions were nanostructured by mechanical alloying (MA) and annealed at temperatures up to 1100 °C. The results showed that face-centered cubic (fcc) phase in 304L transformed to body-centered cubic (bcc) phase during MA. The in-situ studies revealed that bcc-to-fcc phase transformation completed after 105 min annealing at 900 °C for 304L, whereas Hf addition increased the required time and temperature for the complete transformation. The grain size of 304L stainless steel was ~10 nm after MA and remained ~167 and ~293 nm after annealing at 900 and 1100 °C, respectively, with Hf addition in comparison to 960 nm average grain size of base 304L stainless steel after annealing at 900 °C. The hardness of 304L increased from ~200 HV to 408 HV after MA and remained 329 HV after annealing at 1100 °C with Hf addition as opposed to 195 HV hardness of 304L.     

原子吸收光谱法测定海洋动物石蚴中的微量元素含量

本文采用火焰原子吸收光谱法测定了石蜐中的锌、铜、铁、锰四种微量元素和镁、钙两种常量元素的含量,精密度为0.26～5.54％,回收率为94.9～104.5％,同时用原子发射法测定了钾元素的含量。     

无毒藏红花组培芽的获取及其病毒检测

为解决病毒感染藏红花问题和获得无毒种质资源,在球茎诱导愈伤组织以及愈伤组织再分化成苗的过程中进行了脱毒处理,并首次采用间接ELISA和RT-PCR方法检测了国内外报道的侵染藏红花的芜菁花叶病毒(TuMV)、鸢尾花叶病毒(IMV)、菜豆黄花叶病毒(ByMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草脆裂病毒(TRV).结果表明:在藏红花愈伤组织和再分化芽中没发现国内外报道的侵染藏红花的病毒TuMV、 TRV、 CMV 和potyvirus,获得了无毒藏红花种质资源.     

四季豆种子蛋白的高效液相色谱分析研究

介绍采用新的分离方法从四季豆种子中分离出2种蛋白,用高效凝胶蛋白柱(HPGFC)结合光电二极管阵列检测器,对2个蛋白进行紫外光谱分析以及各自的分子量测定之后,用柱后衍生法测了2个蛋白的氨基酸组成,并对其中出现的问题进行了讨论。     

Evaluation of the strain-induced martensitic transformation by acoustic emission monitoring in 304L austenitic stainless steel: Identification of the AE signature of the martensitic transformation and power-law statistics

The aim of the present investigation is to characterize plasticity-induced martensite formation of metastable austenitic stainless steel at room temperature. Acoustic Emission (AE) monitoring is performed on a 304L austenitic stainless steel during fatigue tests. This work aims at identifying the acoustic emission signals associated with the formation of the strain-induced martensite. The present work includes the study of the influence of the specimen geometry. The use of statistical pattern recognition allowed the identification of the acoustic emission signatures for three mechanisms: dislocation motion, mechanical damage and martensitic transformation (MT). Moreover statistics on the energies of the AE signals were found to obey power laws (P(E)  E^−α) with exponent α = 1.75 ± 0.15 for the cluster associated with martensite formation.     

红鳍东方鲀与假睛东方鲀的微卫星DNA多态性分析

为了对中国近海分布的红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）资源进行深入调查,以确定红鳍东方鲀与假睛东方鲀（Takifugu pseudommus）的种间关系,利用根据红鳍东方鲀基因组序列设计的9对微卫星引物,对野生红鳍（WR）、野生假睛东方鲀（WP）两个地理种群和一个养殖红鳍东方鲀（CR）群体进行了遗传多样性分析。结果表明：9对引物在三个群体中均表现为多态;共获得106个等位基因,每个位点的等位基因数目在5～25之间,9个位点在三群体观测杂合度的范围从0．8167到1．0000,三群体平均杂合度观测值E,排列顺序为wR（0．8661）〉WP（0．8272）〉CR（0．7832）;3个群体之间的遗传距离较小,其中WR和WP群体间的遗传距离最小（0．0586）,WR和CR群体的遗传距离最大（0．0923）;3群体的遗传分化系数Gsr很小,其中,WR和WP两群体间遗传分化系数最小（0．0177）,WR和CR群体间的遗传分化系数最大（0．0290）,与遗传距离的分析结果相一致。群体遗传结构的分析结果表明：红鳍东方鲀养殖群体遗传多样性显著下降,应及早加强对其种质的保护;从分子遗传学的角度来看,红鳍东方鲀与假睛东方鲀应为同一个种。