锌指蛋白在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中的研究进展

简要介绍了C2H2型、C4型和C6型三类锌指蛋白,分别从三类锌指蛋白总结了其在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中发挥的作用,举例分析了锌指蛋白在纤维二糖水解酶Ⅰ和纤维二糖水解酶Ⅱ编码基因上表达调控的过程,结合相关研究总结了锌指蛋白在丝状真菌产纤维素酶中应用,最后指出通过该方面研究将有助于在分子水平上揭示纤维素酶表达调控的机理,为高效率、低成本生产纤维素酶奠定基础。     

生物产纤维素酶研究进展

纤维素酶是降解纤维素最有效的生物催化剂.自然界存在很多产纤维素酶的生物.综述了纤维素酶的类别、族属、结构;产纤维素酶的原生动物、后生动物及微生物菌种(细菌、真菌、放线菌等);目前已发现的编码纤维素酶的基因及其表达;纤维素酶的主要作用机理等方面的研究进展,并就今后的研究方向及重点提出了建议.     

人乌头酸脱羧酶1基因及其编码蛋白的生物信息学分析

目的 对人乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase 1,ACOD1)基因的转录调控因素及其编码蛋白的分子功能进行分析。方法 采用多种生物信息学软件对人ACOD1基因启动子区域转录因子结合位点、甲基化CpG位点、单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphism,SNP）位点进行预测,对人ACOD1基因编码的蛋白进行GO(Gene Onotology)蛋白功能注释分析及蛋白互作网络分析。结果 人ACOD1基因启动子区域存在3个启动子序列,17个转录因子结合位点,无甲基化CpG位点,并存在12个SNP位点;人ACOD1蛋白具有多种分子功能并参与多种生物过程,可能与白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、C-C基序趋化因子-4(C-C motif chemokine-4,CCL-4)、干扰素调节因子1(interferon regulatory factor 1,IRF1)和C-X-C基序趋化因子10(C-X-C motif chemokine 10,CXCL10)等蛋白具有相互作用关系。结论 本文为进一步研究人AC...     

真菌多药耐药相关的外排蛋白基因研究进展

真菌的多药耐药现象日益严重,受到人们广泛重视。外排蛋白表达增强,导致细胞内药物浓度降低是产生多药耐药的重要机制。本文就外排蛋白分类、结构、功能、相关基因及其调控因子的研究进展作一综述。     

DNA甲基化对调控胰岛分化基因表达的影响

目的探讨DNA甲基化对调控胰岛分化基因表达的影响,为调控干细胞分化为胰岛细胞提供理论依据。方法采用甲基化DNA免疫共沉淀-实时定量PCR法(MeDIP-qPCR)检测129/J小鼠胚胎干细胞、NIT1细胞及NIH3T3细胞中Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Oct4四种调控胰岛分化基因的DNA甲基化程度;同时采用实时定量RT-PCR检测上述3种细胞中4种基因mRNA表达水平,分析这些基因DNA甲基化水平差异与基因表达之间的关系。结果 Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因在129/J小鼠胚胎干细胞和NIT1细胞中呈低甲基化,在NIH3T3细胞中则呈高甲基化,前两种细胞的甲基化程度明显低于后者(P<0.05);Oct4基因在129/J小鼠胚胎干细胞中未甲基化,在NIT1和NIH3T3细胞中呈低甲基化,NIT1细胞的甲基化程度明显低于NIH3T3细胞(P<0.05)。低甲基化的Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因在NIT1细胞中可高效表达,而在NIH3T3和129/J小鼠胚胎干细胞中则未见表达(P<0.05);Oct4基因在129/J小鼠胚胎干细胞中可高效表达,在NIT1和NIH3T3细胞中则未见表达。结论转录起始区DNA甲基化程度可影响Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Oct4基因的表达,参与β细胞的分化过程。     

Fancd2os基因及其编码蛋白的生物信息学分析和表达谱鉴定

目的利用生物信息学手段对Fancd2os基因及其编码蛋白进行结构分析和功能预测,并检测该基因在小鼠组织中的表达。方法利用生物信息学分析软件和技术对该基因及其编码蛋白的同源性、结构定位、理化性质及表达谱等特征进行分析和比对;采用半定量RT-PCR、实时定量PCR及Western blot法分别检测Fancd2os m RNA及其编码蛋白在雄性小鼠不同组织以及不同发育阶段睾丸组织的表达;利用免疫组织化学染色方法检测Fancd2os蛋白在小鼠曲细精管中的细胞定位。结果生物信息学分析表明小鼠Fancd2os蛋白的氨基酸系列与人、大鼠和牛的同源性分别为92.1%、97.8%和93.3%,该蛋白主要定位在细胞浆,二级结构以无规则卷曲和α螺旋为主,无信号肽,含有多个磷酸化位点;EST电子表达谱显示该基因主要在睾丸组织中表达;GEO数据库分析提示Fancd2os基因的表达可能与线粒体Clp P蛋白酶的表达密切相关;MGI Interaction Explorer数据库检索发现Fancd2os基因与95个mi RNA具有相互作用。Fancd2os基因及其编码蛋白在小鼠睾丸组织中表达量高,且具有明显的时序性,以8周龄小鼠表达水平最高;Fancd2os蛋白主要定位于曲细精管精母细胞和圆形精子细胞的胞质中。结论 Fancd2os基因为小鼠睾丸组织高表达基因,其表达水平随着睾丸的发育过程呈上调趋势,结合生物信息学分析结果,该基因可能与睾丸的发育及生精过程相关。     

基于DLEC1基因表观遗传学调控探讨重楼皂苷Ⅰ的抗卵巢癌作用

目的通过基于DLEC1基因表观遗传学调控探讨重楼皂苷Ⅰ抗卵巢癌作用及其分子机制。方法 MTT法检测不同浓度重楼皂苷Ⅰ(5、10、15与20μmol/L)对卵巢癌SK-OV-3及OVCAR-3细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR及Western blot法检测重楼皂苷Ⅰ对SK-OV-3与OVCAR-3细胞DLEC1表达的影响;RNAi技术及MTT法检测DLEC1基因对重楼皂苷Ⅰ抑制SK-OV-3及OVCAR-3细胞增殖作用的影响;甲基化特异性PCR及甲基化DNA免疫沉淀-qPCR技术检测重楼皂苷Ⅰ对SK-OV-3及OVCAR-3细胞中DLEC1基因启动子甲基化的影响。结果重楼皂苷Ⅰ可显著抑制SK-OV-3及OVCAR-3细胞增殖(P0.05),且具有一定的浓度依赖性;可显著上调SK-OV-3及OVCAR-3细胞中DLEC1基因m RNA转录及蛋白的表达水平(P0.05);可显著增强SK-OV-3及OVCAR-3细胞中DLEC1基因启动子的去甲基化作用(P0.05)。同时,下调DLEC1表达可明显减弱重楼皂苷1对SK-OV-3及OVCAR-3细胞增殖抑制作用(P0.05)。结论重楼皂苷Ⅰ可通过表观遗传学调控对DLEC1基因启动子发挥去甲基化作用,进而诱导DLEC1的表达而发挥抗卵巢癌作用。     

A组轮状病毒非结构蛋白NSP2的研究进展

A组轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒复制过程中起重要作用。本文就NSP2蛋白编码基因和基因型、蛋白的表达、结构、功能及其免疫学性质的研究进展作一综述。     

嗜热真菌β-葡萄糖苷酶基因克隆表达与调控的研究进展

β-葡萄糖苷酶是一种糖苷水解酶,可水解纤维二糖生成两分子的葡萄糖。该酶在纤维素糖化水解过程中起关键性作用,是纤维素酶代谢途径中的限速酶。嗜热真菌因其极端的生长环境,是耐高温酶的主要来源,嗜热真菌来源的β-葡萄糖苷酶种类日益丰富。构建了含13种嗜热真菌β-葡萄糖苷酶的进化树,并对嗜热真菌中β-葡萄糖苷酶的来源、嗜热真菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达、及已知的β-葡萄糖苷酶调控因子进行了综述。     

BRD9抑制剂的研究进展

组蛋白N末端赖氨酸的乙酰化在转录调控中有重要作用。多种含Bromodomain的蛋白可以与乙酰化赖氨酸结合并招募其它染色质因子来协同调控基因转录,这一过程与人体很多疾病的产生和发展密切相关。本文中对近年来Bromodomain-containing protein 9(BRD9)选择性的小分子抑制剂的研究进展进行了总结。     

抑癌基因WWOX对Lewis肺癌细胞c-jun蛋白表达及其转录活性的影响

目的研究抑癌基因WWOX对Lewis肺癌细胞c-jun蛋白表达及其转录活性的影响,探讨WWOX基因的抑癌机制。方法采用脂质体转染法将WWOX基因重组真核表达质粒转染Lewis肺癌细胞,RT-PCR和Western blot法检测WWOX基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;免疫组化法检测WWOX基因转染后Lewis细胞中c-jun蛋白的表达水平;半定量RT-PCR法检测c-jun调控的4种肿瘤相关基因p21、cyclinD1、FasL及VEGF mRNA的转录水平。结果重组真核表达质粒pcDNA4.0/Myc-His-WWOX转染Lewis细胞后,WWOX基因在mRNA和蛋白水平上均得到表达;与未转染细胞和空载体转染细胞相比,WWOX基因转染细胞胞浆中c-jun蛋白的表达量升高,而细胞核中c-jun蛋白的表达量未见明显差异;p21基因mRNA的转录水平升高,cyclinD1、FasL和VEGF基因mRNA的转录水平降低。结论WWOX基因可在Lewis细胞中表达,其转染Lewis肺癌细胞后,不直接调控c-jun蛋白的表达量,但可影响其转录活性。     

丝状真菌产纤维素酶相关碳代谢阻遏因子的研究进展?

简述了酵母和丝状真菌中普遍存在的一种碳代谢抑制因子CRE(CreA、CreB、CreC、CreD和Cre1、Cre2、Cre3、Cre4);利用纤维素所必须的锌双核簇转录因子CLR-1,负责大部分纤维素酶基因表的CLR-2和CLR-1的活性阻遏者CLR-3;真菌响应外界环境有重要作用的VIB1以及协调初级代谢、碳代谢阻遏和真菌生长重要参与者cAMP依赖蛋白激酶A(PkaA)在丝状真菌纤维素酶生产中的调控方式及相关联系以及它们在不同的丝状真菌中的影响,进而综述它们对丝状真菌生产纤维素酶的影响。     

非编码RNA在癌症中的功能研究

人类基因组约含有超30亿个DNA碱基对,其中约含有2-2.5万个蛋白质编码基因,这些蛋白质编码基因只占据不到2%的基因组序列,剩余的近99%的DNA都位于非编码区。基因组中大量的非编码区域曾被认为基因组中的"暗物质",普遍认为其没有任何实际的功能。但是随着基因测序技术的发展,越来越多的"垃圾"DNA被证实并不"垃圾"。科学家们发现,这些非编码基因虽然不表达蛋白质,但是会生成非编码RNA,并且越来越多的证据表明非编码RNA具有重要的生物学功能,在真核生物的基因表达调控过程中发挥重要的核心作用,这些非编码RNA可作为基因调控网络中的主要参与者促进基因的转录调控,与各种人类疾病的机制密切相关。本文综述了非编码RNA的定义、性质特点、原理及其在癌症中的功能。     

青蒿素对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的探究青蒿素(artemisinin,ART)对乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验分为对照组(加入1μL/mL DMSO)和ART处理组(加入终浓度为300μmol/L的ART)。ART作用48 h后,采用平板克隆试验检测乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞(MCF-10A)的克隆形成能力,免疫荧光染色法检测细胞增殖标记Ki-67蛋白的表达,流式细胞术分析3种细胞的凋亡变化,RT-qPCR检测乳腺癌细胞中DNMTs家族与抑癌基因FHIT、CDH1、PTEN等的表达变化,Western blot分析BAX、BCL-2、DNMT1和DNMT3A蛋白的表达水平,亚硫酸氢盐测序法分析FHIT和CDH1基因的甲基化水平。结果 ART显著抑制乳腺癌细胞的增殖,并诱导乳腺癌细胞的凋亡(P 0. 01),同时对正常人上皮细胞有明显的诱导凋亡作用(P 0. 01);ART抑制DNMT1的表达,促进DNMT3A的表达(P 0. 05);ART处理乳腺癌细胞后,抑癌基因FHIT和CDH1的甲基化水平降低,表达水平增加。结论 ART通过改变DNMT1和DNMT3A的表达,降低某些抑癌基因如FHIT、CDH1的甲基化水平,促进这些抑癌基因的表达,从而发挥抑制乳腺癌细胞增殖与诱导凋亡的作用。此外,ART用于乳腺癌治疗的安全性需进一步评估。     

新一代杀虫剂——在叶部能稳定应用的dsRNA

正在过去10年间,人类对RNA分子生物学的认识有了显著的提高。其中一个重大的进步是RNA干扰(RNAi)的发现,RNA干扰是利用约18~30个核苷酸的非编码RNA来调控基因和基因组的表达,调控可以发生在染色体合成、染色体分离、转录、RNA修饰和RNA翻译等过程中。小RNA一般抑制基因的表达和调控,此被称为RNA沉默。     

新疫苗简介

<正> 免疫原性蛋白编码基因的鉴定和表达研制新疫苗的第一步是鉴定免疫原性蛋白编码基因。有关病毒基因组信息的绝大部份是由病毒复制研究而来。大多数病毒基因组除编码免疫反应中的结构蛋白外,还编码另外几种蛋白。就微小核糖核酸病毒簇而言,其成员之一,口蹄疫病毒,只有大约三     

鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的　以鸡脾细胞mRNA为模板扩增编码鸡IL 18成熟蛋白的cDNA ,并在大肠杆菌中进行表达。方法　用PHA和LPS激活的AA肉鸡脾细胞 ,提取mRNA ,以RT PCR法扩增出编码鸡IL 18成熟蛋白的cDNA并测序 ,与pET 2 8b载体构建重组质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS中表达 ,用SDS PAGE检测表达产物。结果　所克隆的核苷酸片段包含了鸡IL 18全部成熟蛋白编码基因 ,其大小为 5 0 7个核苷酸 ,编码 16 9个氨基酸 ;构建的重组表达载体在大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS中表达出相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白。结论　已成功克隆和表达了鸡IL 18成熟蛋白基因。     

动物乳腺生物反应器的应用及研究进展

动物乳腺生物反应器是利用转基因技术获得药物蛋白的动物个体表达系统,其利用乳腺特异性调控元件指导外源基因在乳腺中特异地表达,以转基因动物的乳腺组织生产药用重组蛋白。本文就动物乳腺生物反应器的操作流程、应用、优点、存在的问题及其国内外研究进展和产业化现状作一综述。     

短暂前脑缺血再灌注对大鼠海马脑区脑源性神经营养因子蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨短暂前脑缺血再灌注(transient forebrain ischemia-reperfusion,I/R)对脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)蛋白及mRNA表达的影响,为进一步探索大鼠海马CA1区神经元损伤机制提供新的思路。方法将雄性SD大鼠随机分为control组、sham组和I/R组,利用Western blot和荧光定量PCR分析I/R后大鼠BDNF蛋白及mRNA表达的变化;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)试验检测I/R后大鼠BDNF基因启动子上H3K27的乙酰化水平。结果与control组相比,sham组大鼠CA1和CA3区BDNF蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。与sham组相比,I/R组大鼠CA1区BDNF蛋白表达显著下降(P<0.001),而CA3区BDNF蛋白表达增高(P<0.05);I/R组大鼠CA1区BDNF mRNAⅠ、Ⅱ和Ⅵ的表达均显著增高(P<0.01),而mRNAⅣ的表达显著下降(P<0.01),在CA3区4种mRNA均显著增高(P<0.01)。与sham组相比,I/R组大鼠CA1区BDNF启动子4的H3K27乙酰化水平显著下降(P<0.001),而CA3区BDNF启动子区域H3K27乙酰化水平增高(P<0.01)。结论I/R诱导大鼠海马CA1区BDNF蛋白及mRNA表达降低,并改变了BDNF基因启动子区乙酰化水平,为进一步研究BDNF表达降低引起神经元死亡的机制提供了新的方向。     

籽鹅卵巢产蛋性能相关基因全长cDNA序列的克隆与分析

目的克隆并分析籽鹅卵巢产蛋性能相关基因EST1的全长cDNA序列。方法利用实时荧光定量PCR技术对EST1基因在籽鹅产蛋前期与产蛋期卵巢中mRNA表达水平进行检测,并采用RACE(Rapid amplification of cDNAends,RACE)技术对该基因全长cDNA序列进行克隆,应用生物信息学预测方法对其编码的蛋白质进行分析。结果籽鹅产蛋期卵巢组织中EST1基因mRNA的表达水平显著高于产蛋前期(P<0.05)。经RACE技术获得EST1基因全长cDNA序列长1715bp,具有单一的完整开放阅读框(ORF,14～1318bp),推测编码蛋白含434个氨基酸残基,相对分子质量为107100,等电点为5.00。该蛋白为细胞质内蛋白,含3个跨膜螺旋,蛋白序列中含1个信号肽切割位点。结论经分子生物学软件进行蛋白质功能预测,初步确定EST1基因为籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因,推测该基因可能参与籽鹅产蛋性能的分子调控。