单核细胞增生李斯特菌菌膜形成突变株的筛选

通过对功能和调控基因的研究,探讨单核细胞增生李斯特菌菌膜的形成机制,建立防治该细菌污染食品的方法.使用电转化的方法,将携带转座子Tn917的质粒pTV1-OK转化到单核细胞增生李斯特菌中,诱导转座,获得1 880个突变株,加上前期构建的突变株,使突变库增加到2 200株.使用96孔细胞培养板对随机挑选的1 000余株突变株进行菌膜培养,结晶紫染色后测OD595值.以此值作为菌膜形成量的筛选依据,最终挑选出菌膜形成能力变小的突变株8株.目标突变获得率约8‰.对筛选的菌膜形成量变小的突变株进行荧光显微现察,证实该8株突变株菌膜形成能力弱于野生菌株.通过PCR验证,这8株突变株的基因组中插入了Tn917,这可能是它们的表型发生变化的原因.     

牛乳中单核细胞增生李斯特菌的分离与鉴定

牛乳中单核细胞增生李斯特菌的分离与鉴定唐敏莉，刘敏娟，孙钊，黄金文（齐齐哈尔市卫生防疫站）前言李斯特菌是引起人、畜单核细胞增生的一种致病菌，已逐渐被人们注意，世界卫生组织１９８８年报告，在乳及乳制品、肉类、禽类等食品中均发现李斯特菌的存在［１］．近年...     

肉桂醛对猪肉糜中单核细胞增生李斯特菌的 抑制作用及其机制

目的研究不同温度条件下肉桂醛对猪肉糜中单核细胞增生李斯特菌的抑制作用,并分析其机制。方法在不同温度(55、60、65和70℃)条件下,对添加不同浓度肉桂醛的猪肉糜中单核细胞增生李斯特菌的活细胞变化曲线进行测定分析,并采用扫描电子显微镜技术研究肉桂醛对其菌体形态的影响。结果在猪肉糜中添加肉桂醛能明显增大单核细胞增生李斯特菌的热失活速率,缩短热处理的时间,这种促进作用也随着肉桂醛浓度的增大而逐渐加强。在70℃下,添加有1.0%肉桂醛的猪肉糜样品在0.5 min之内可使得单核细胞增生李斯特菌活细胞的数目从9.03 Log CFU/g迅速减少到2.89 Log CFU/g,而未添加肉桂醛的对照样品则需要3 min。扫描电子显微镜结果显示,肉桂醛处理后单核细胞增生李斯特菌的菌体变长,细胞色泽暗沉。结论肉桂醛能够显著改变单核细胞增生李斯特菌的形态,降低其在猪肉糜中的热抵抗能力,因而加快了其热失活速率。本研究为肉桂醛在食品中食源性致病菌的安全控制领域的应用提供了参考。     

单核细胞增生李斯特菌进化家系的研究进展

单核细胞增生李斯特菌（以下简称单增李斯特菌）是危害严重的食源性致病菌之一,作为一种兼性厌氧的革兰氏阳性短杆菌,广泛存在于食品、环境及动物宿主体内。根据分子特征和流行情况的不同,可将其分成4 个进化家系,不同家系的菌株毒力和致病性各不相同。本文分析归纳了单增李斯特菌不同进化家系的特点,总结概述了其致病性和流行特征等,以期为研究与单增李斯特菌家系有关的食源性疾病提供一定参考。     

噬菌体对虾仁中单核细胞增生李斯特菌的抑制效果

以虾仁为研究对象,通过人为模拟在虾仁中接种单核细胞增生李斯特菌后,再用噬菌体ListexTMP100在常温(20℃)、冷藏(4℃、0℃)和冷冻(-18℃)环境下进行处理,分析虾仁中该菌的抑制效果,单核细胞增生李斯特菌采用平板计数法进行计数。结果表明:噬菌体浓度大于2×107PFU/mL时,能有效杀灭虾仁中单核细胞增生李斯特菌(P<0.05);该浓度在20℃下作用虾仁1 h,便能降低1.50 Log10CFU/g(死亡率为99%以上)的单核细胞增生李斯特菌;在0℃和4℃,作用24 h下,单核细胞增生李斯特菌的死亡率达到99.9%;在-18℃下贮藏30d,单核细胞增生李斯特菌在第1天下降了1.38Log10CFU/g。这些结果表明,噬菌体ListexTMP100对虾仁中的单核细胞增生李斯特菌具有明显的抑制效果,可作为一种理想的生物杀菌剂用于水产食品中。     

纳豆菌抗菌肽对对虾中单核细胞增生李斯特菌的抑菌效应

本文采用牛津杯法和液体二倍稀释法测得纳豆菌抗菌肽对单增李斯特菌有很好的抑菌、杀菌效果,其MIC和MBC分别为0.625、1.875mg/mL;通过细菌菌落计数测得终浓度为1MIC的抗菌肽即可抑制其生长,终浓度达到2MIC时,在27h内菌数降低了4个数量级;且在培养初始阶段以及在菌体低浓度时加入控制效果更明显;以对虾为培养基质,检测得低浓度的抗菌肽已有很强抑制效果,终浓度增加到2MIC时单增李斯特菌的生长即可受到抑制。纳豆菌抗菌肽对单增李斯特菌的抑制效果明显,可用作对虾基质中单增李斯特菌的控制,为水产品绿色控制剂的开发提供指导。      

基于磁性金属有机框架分离的纳米金比色法检测单核细胞增生李斯特菌

以磁性金属有机框架复合材料作为捕获探针,免疫功能化纳米金作为信号探针,建立一种纳米金比色法快速检测单核细胞增生李斯特菌的方法。结果表明：在最适条件下,单核细胞增生李斯特菌的可视化检出限为1.2×10³ CFU/m L,紫外光谱检测结果在1.2×10¹～1.2×10⁸ CFU/mL范围内有良好的线性关系(Y=0.519-0.043X,R²=0.978),检出限低至0.45 CFU/mL,各浓度梯度的批内变异系数在0.31%～1.30%之间。将单核细胞增生李斯特菌接种到鸡胸肉上进行检测,其加标回收率在91.1%～108.7%之间,变异系数不高于7.4%,且结果与平板计数法一致。本方法具有准确、灵敏、快速等特点,在食源性致病菌检测方面具有较好的应用前景。     

抗菌肽zp37抑制果汁中单核细胞增生李斯特菌的活性及其作用机制

单核细胞增生李斯特菌（简称单增李斯特菌）作为一种常见的食源性致病菌,是影响果汁食用安全性的主要威胁因子。本实验设计并获得一种抗菌肽zp37,通过测定抗菌肽zp37最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,分析抗菌肽zp37处理后单增李斯特菌的生长曲线、膜电位、膜完整性、细胞微观结构、细胞聚集率、DNA结合情况以及胞内活性氧等,研究抗菌肽zp37抑制果汁中单增李斯特菌的活性及其作用机制。结果表明,抗菌肽zp37对单增李斯特菌的MIC为16μg/mL,当其质量浓度大于4MIC时,单增李斯特菌生长受到明显抑制。同时,8MIC的抗菌肽zp37处理1h能杀死绝大部分的单增李斯特菌,且在7 d贮藏期内,2MIC的抗菌肽zp37能将草莓汁、猕猴桃汁和苹果汁中的单增李斯特菌控制到检测限以下。抗菌肽zp37处理后,单增李斯特菌细胞膜离子通透性增加、膜电位消失,细胞膜完整性被破坏,细胞出现明显的凹陷变形,细胞间发生聚集。荧光标记示踪法结果显示,抗菌肽zp37同时作用于单增李斯特菌的细胞膜和细胞质。在细胞质中,当抗菌肽zp37质量浓度大于DNA质量浓度的1/4...     

SPA-ELISA用于单核细胞增生性李斯特菌检验的应用研究

本研究创造性地将SPA-ELISA应用于食品中单核细胞增生性李斯特菌(简称LM)的检验中,建立了快速检测该菌的ELISA方法.试验表明:该方法可特异性检测肉品中的LM,样品中最低检出量为5个/10克,经增菌后的培养液最低检测限可达到105CFU/ml,并可在48小时内报告结果,比常规分离培养鉴定方法快5～6天,适于LM的快速筛选.     

SPA-ELISA用于单核细胞增生性李斯特菌检验的应用研究

创造性地将SPA-ELISA应用于食品中单核细胞增生性李斯特菌(简称LM)的检验中,建立了快速检测该菌的ELISA方法。试验表明:该方法可特异性检测肉品中的LM,样品中最低检出量为5cfu/10g,经增菌后的培养液最低检测限可达到105cfu/mL,并可在48h内报告结果,比常规分离培养鉴定方法快5￣6d,适于LM的快速筛选。     

乳酸菌细菌素Durancin GL对单增李斯特菌的抗菌活性及机制

单增李斯特菌广泛分布于肉类、禽类、蛋类、乳制品及蔬菜中,且适应能力强,即使在4 ℃的冷藏环境下仍可生长繁殖,是食品中主要的食源性致病菌之一。乳酸菌细菌素Durancin GL是由干酪中肠球菌产生的一种新型细菌素,对单增李斯特菌具有靶向抑制作用。本实验研究了Durancin GL对单增李斯特菌的抗菌活性及作用机制。通过最小抑菌浓度和抑菌动力学实验检测Durancin GL对单增李斯特菌的抑制作用,结合监测胞内物质泄漏、菌体存活情况以及形态学分析,探讨Durancin GL对单增李斯特菌的抑菌机制。Durancin GL对单增李斯特菌最小抑菌浓度为（2.5±0.4）mg/L,可引起李斯特菌细胞质泄漏,增加细胞外液电导率,导致菌体细胞死亡,从而发挥其抑菌活性。     

鳀鱼抗菌肽脂质体的制备与抗单增李斯特菌生物被膜活性研究

本文采用薄膜蒸发法制备得到鳀鱼抗菌肽AAP脂质体,分析了脂质体的平均粒径、形态结构、包封率和贮存稳定性,研究了其对单增李斯特菌及其生物被膜的抑制活性。结果表明制备得到的AAP脂质体平均粒径为(131.65±1.63)nm,包封率为69.75%,AAP有效载量为4.17%,为内部呈环形层状分布的近球形。脂质体在4℃下的贮存稳定性高于其在25℃下的稳定性。脂质体型AAP和未包封AAP均能抑制单增李斯特菌的生长,但因脂质体的控释作用,两者对指示菌生长曲线的改变历程略有差异。脂质体型AAP抗单增李斯特菌生物被膜活性高于未包封AAP。结晶紫染色和银染实验结果表明AAP脂质体能抑制单增李斯特菌生物被膜的形成。扫描电镜和激光共聚焦显微镜形态观察表明AAP脂质体可引起细菌细胞结构的明显坍塌、细胞膜破损和胞内物质外溢,从而抑制生物被膜的形成。     

Characterization of the Effect of Sprouting or Solid-State Bioprocessing by Dietary Fungus on the Antibacterial Activity of Soybean Extracts Against Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is one of the most severe food-borne bacterial infections causing Listeriosis. As L. monocytogenes can survive harsh adverse conditions - such as low pH, high NaCl, and refrigeration temperatures - as well as resist current antimicrobial measures such as the use of disinfectants and antibiotics, there is a need for alternative anti-Listeria strategies. In the search for new antimicrobial agents, much recent research has focused on the potential of dietary phenolic compounds. In this study, soybean extracts enriched for phenolic content via dark-germination sprouting or solid-state bioprocessing by the dietary fungus Rhizopus oligosporus or Lentinus edodes were investigated for in vitro antibacterial activity against L. monocytogenes.L. monocytogenes growth was inhibited most effectively by R. oligosporus bioprocessed soybean extracts, which showed anti-Listeria activity at total phenolic concentrations as low as 10 µg 100 µL^-1. In both sprouted soybean extract and L. edodes-bioprocessed soybean extract the anti-Listeria activity was not observed until at least 200 µg total phenolic content 100 µL^-1 was used. Anti-Listeria activity by soybean extract was associated with phenolic mobilization but not with antioxidant activity. Further, R. oligosporus bioprocessed soybean extracts were shown to inhibit the growth of L. monocytogenes in fish and meat systems at refrigeration temperatures. The potential involvement of mobilization of antimicrobial versus non-antimicrobial phenolics during sprouting and solid-state bioprocessing was hypothesized and discussed.     

棘托竹荪提取液对单增李斯特菌的抑菌机理初步研究

在细胞超微结构观察的基础上,采用实时荧光定量PCR技术初步分析棘托竹荪提取液对单增李斯特菌的抑菌机理。使用最小抑菌浓度（15.0mg/m L）的棘托竹荪提取液分别对单增李斯特菌菌液进行0.5、1.0、1.5h处理,提取对照组与处理组菌株的总RNA,通过反转录获得各自c DNA,并选择相关基因合成引物作Real-time PCR分析。以本菌的16S r RNA作为内参基因,以prf A、Act A、Iap为转录过程与表达蛋白基因,分析提取液对单增李斯特菌相关基因表达量的影响。由细胞超微结构观察可知,单增李斯特菌经提取液处理后,菌体细胞的细胞壁变薄,细胞膜的完整性发生改变,内容物从胞内释放出来。由荧光定量PCR法对不同处理时间下的相关基因相对表达量变化情况分析得出:处理组的prf A基因在0.5h时表达量有所上调,后期表达量上调速度减慢。1h后表达量基本停止上调,1.5h后,表达量转为下调,说明提取液能在转录阶段对单增李斯特菌的生命活动构成影响。Act A和Iap基因在处理0.5h后基因表达量上调,处理1h后上调量最大,Act A基因在1.5h后表达量上调量有所降低,Iap基因表达量出现下调,说明提取液能在转录水平上调控单增李斯特菌的生命活动,特别是多种毒力因子的表达过程。由此可知,棘托竹荪提取液能对单增李斯特菌细胞的转录过程和抗性产生显著影响,使菌体的细胞膜受损,细胞质溶出,从而导致菌体细胞死亡。      

Antibacterial activity of egg yolk antibody (IgY) against Listeria monocytogenes and preliminary evaluation of its potential for food preservation

BACKGROUND: Egg yolk antibody (IgY) is a unique type of immunoglobulin found in egg yolks, and many reports have described its ability to inhibit corresponding antigen bacteria. The objective of this study was to evaluate the antibacterial activity of IgY specific to Listeria monocytogenes, an important food pathogen to both humans and animals, as well as its potential use for food preservation. RESULTS: Specific IgY was generated by immunising Leghorn chickens with whole cells of L. monocytogenes, and its inhibitory effect on bacterial growth was tested in liquid medium and food samples. After 8 h of incubation with specific IgY, there was a significant decrease in the growth (absorbance at 600 nm) of L. monocytogenes in comparison with controls. IgY also inhibited the growth of L. monocytogenes inoculated onto fresh or smoked salmon samples. Compared with those of blanks, numbers of L. monocytogenes were reduced by more than 2 log units after 15 days of storage at 6 ± 1 °C in the presence of specific IgY. CONCLUSION: The results suggest the potential application of specific IgY as a natural antimicrobial agent for food preservation. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

亚甲基蓝对单增李斯特菌菌膜的光动力杀伤作用

探讨单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）生物菌膜的生长特性及亚甲基蓝对LM生物菌膜光动力杀伤作用。通过结晶紫染色法判断与观察LM生物菌膜的形成并用酶标仪在595 nm波长处对其不同生长阶段的生物量进行测定,同时通过细菌平板菌落计数法研究亚甲基蓝对LM生物菌膜的光动力杀伤作用。结果表明：结晶紫染色法可用于定性判断与观察LM生物菌膜,且随着培养时间的延长,LM生物菌膜生物量不断增加,形成的网状结构越来越致密。当光敏剂质量浓度为10 μg/mL的亚甲基蓝在光功密度为200 mW/cm2 的可见光照射30 min时,即可使LM生物菌膜的失活率达到99.99%以上,其菌落数降低了4.08（lg（CFU/mL））。亚甲基蓝对LM生物菌膜的光动力灭活作用非常显著,其杀伤效果主要取决于光敏剂质量浓度和光照时间。