流感冷适应减毒活疫苗的研究进展

目前所使用的流感疫苗主要是三联灭活疫苗,其安全性和有效性虽好,但生产过程复杂,生产周期长。相对于传统的灭活疫苗,冷适应减毒活疫苗有很多优点,尤其是用哺乳动物细胞培养的病毒制备冷适应减毒活疫苗已成为流感疫苗的主要发展方向。本文主要介绍流感冷适应减毒活疫苗的研究历史以及今后的发展方向。     

流感病毒减毒活疫苗的研究进展

目前,疫苗接种仍是预防流感最有效的途径,流感疫苗主要有三价灭活疫苗和减毒活疫苗。灭活疫苗虽安全有效,但其抗原用量大,生产过程复杂,生产周期长,且黏膜免疫力弱;而流感病毒减毒活疫苗不仅能诱导机体产生抗体,同时可引起包括黏膜免疫和细胞免疫在内的一系列适应性免疫反应,因此,认为其免疫效果优于灭活疫苗。本文就流感减毒活疫苗的研究历史及现状、疫苗候选株的获得及基于细胞的流感减毒活疫苗的研发作一综述。     

冻干乙型肝炎减毒活疫苗和冻干麻疹减毒活疫苗结晶性状的分析

目的 对冻干乙型肝炎减毒活疫苗和冻干麻疹减毒活疫苗的外观结晶粗糙的原因进行分析,以改善疫苗冻干质量。方法 从制品入柜时的不同板层温度、制冷速度、冻结过程等,分析其对制品外观结晶性状的影响。结果 冻干机制冷系统的性能好坏、冻结过程的改变和制品入柜时冻干机板层温度的变化,是决定是否产生粗结晶的主要因素。结论 冻干机板层温度从常温降至－40℃以下的时间控制在2h左右,制品在冻结过程中,昼避免在－20℃左右的区域停留,制品入柜时,板层温度控制在5－15℃范围,能使制品冻干后的物理外观质量得到明显改善。     

减毒活疫苗的应用及其研究进展

减毒活疫苗可引发机体免疫反应,刺激机体产生特异性的记忆B和T细胞,获得长期或终生保护作用,与灭活疫苗比较,减毒活疫苗具有免疫力强及作用时间长的优点。减毒活疫苗在疫苗史的初期就发挥了关键作用,如通过接种牛痘预防天花;后续开发的麻风腮减毒活疫苗、乙脑减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗、轮状病毒减毒活疫苗、登革热减毒活疫苗及卡介苗等均具有良好的免疫效果;新开发减毒活疫苗还可用于预防和治疗肿瘤、糖尿病、肺炎及新结核病等疾病,具有广泛的应用前景。本文就减毒活疫苗在传染性疾病、肿瘤及其他疾病中的应用及研究进展作一综述。     

冻干乙脑减毒活疫苗保护剂的筛选

目的　筛选冻干乙脑活疫苗的保护剂。方法　通过优化组合筛选出A、C、D、E、F 5种保护剂配方 ,其中A为现行生产配方作为对照与其他配方进行比较。结果　使用A保护剂的疫苗在 37℃放置 7d和 2 1d ,病毒滴度分别下降 0 .98和 1.6 6LogPFU/ml;使用D、E保护剂的疫苗热稳定性最好 ,在 37℃放置 7d滴度分别下降 0 .19和 0 .0 7LogPFU/ml,2 1d分别下降 0 .42和 0 .39logPFU/ml。结论　D、E保护剂配方为最佳候选配方     

流行性腮腺炎减毒活疫苗生产工艺的改进

通过试验研究和生产实践 ,将腮腺炎减毒活疫苗生产工艺中细胞长成单层后接种病毒 ,改为细胞和病毒同时接种 ;收获病毒前置 4℃冷释放改为不释放 ,直接收获病毒 ;一批细胞收获一次病毒改为多次收获病毒 ;克氏瓶静置培养改为 15L瓶旋转培养等 ,使疫苗生产周期由 8d缩短为 6d ;生产工序由 6道减少为 4道 ,从而降低了染菌率和生产成本 ,稳定了质量 ,产量也有明显提高     

冻干水痘减毒活疫苗的生产工艺

目的以MRC-5人二倍体细胞为基质,建立制备Oka株水痘减毒活疫苗的生产工艺。方法Oka株水痘病毒在MRC-5细胞上培养,收获细胞,经冻融,超声波,纯化,澄清,冻干等工序,生产8批疫苗,按规程要求进行检定。结果 各项指标全部合格,制品质量稳定,37℃ 7d热稳定性良好,儿童免疫后抗体阳转率为92.7％。结论 工艺流程合理,制品质量符合WHO规程要求,免疫后副反应甚微,免疫原性良好。     

乙脑风疹联合减毒活疫苗病毒间的相容性

目的研究乙脑风疹联合减毒活疫苗中乙脑病毒和风疹病毒的相容性。方法将乙脑病毒SA14-14-2疫苗株制备的乙脑减毒活疫苗原液与风疹病毒RA27/3疫苗株制备的风疹减毒活疫苗原液按体积比1∶1比例混合,加入保护剂,冻干制成乙脑风疹联合减毒活疫苗。采用BHK21细胞蚀斑法测定联合疫苗中的乙脑病毒滴度,细胞病变法检测风疹病毒滴度;通过鉴别试验、热稳定性试验、乙脑疫苗免疫原性试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验以及基因稳定性分析观察联合疫苗病毒间的相容性。结果联合疫苗的乙脑和风疹病毒滴度与单价疫苗的病毒滴度变化在检测误差的允许范围内;联合疫苗于37℃放置7 d,与放置前相比,风疹病毒和乙脑病毒的滴度值下降分别小于1.0 LgCCID50/ml和1.0 LgPFU/ml,符合《中国药典》三部(2010版)要求;联合疫苗中的风疹疫苗对乙脑疫苗的免疫原性无明显的干扰效应;鉴别试验、安全性试验、异常毒性试验、无菌试验结果均符合《中国药典》三部(2010版)要求;联合疫苗在BHK21细胞上传代5次后,乙脑和风疹病毒基因序列均未发生变化。结论乙脑风疹联合减毒活疫苗中的乙脑和风疹病毒具有较好的相容性,本实验为乙脑风疹联合疫苗的进一步研制奠定了基础。     

浙江省水痘减毒活疫苗上市后安全性分析

目的评价长春祁健生物制品有限公司(简称长春祁健)生产的冻干水痘减毒活疫苗(freezed-dried varicella attenuated live vaccine,Var V,以下简称水痘疫苗)在浙江省大规模使用后的安全性。方法通过全国疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)信息管理系统,收集浙江省2014~2015年报告的接种水痘疫苗后发生的AEFI个案信息,采用描述性流行病学方法进行分析。结果浙江省共收到369例AEFI报告,估算报告发生率为28.04/10万剂次,其中异常反应89例,估算发生率6.76/10万剂次,所有案例男女性别比1.11∶1,时间分布集中在5~8月份,不良反应中一般反应主要表现为发热、红肿、硬结等临床症状,异常反应中则以过敏性皮疹为主(68例,76.40%),60.70%发生在接种后当天,99.19%的病例均治愈或好转。结论水痘疫苗接种后不良反应以一般反应为主,异常反应发生率低,预后良好,显示长春祁健生产的水痘疫苗在浙江省具有较好的安全性。     

流行性腮腺炎和甲型肝炎减毒活疫苗同时或分别接种的免疫效果

流行性腮腺炎 (流腮 )和甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗同时或分别接种 4～ 5岁儿童 ,结果同时接种组未发现有加重反应 ,两苗单独接种与同时接种的免疫应答差异无显著意义。提示两苗可以同时接种。     

甲型肝炎减毒活疫苗冻干保护剂的研究

目的 研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂。方法 甲型肝炎病毒L-A-l株经2BX二倍体细胞培养,制备成甲型肝炎减毒活疫苗,再添加不同保护剂进行冷冻干燥。结果 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂,对甲型肝炎减毒活苗病毒显示了较好的保护性,疫苗冻干前后感染滴度下降在1.0Log CCID50/ml以内,符合《中国生物制品规程》要求。结论 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂是一种安全性较高、疫苗冻干效果较好,适合于疫苗规模化生产的保护剂。     

甲型肝炎减毒活疫苗加强免疫的效果

目的　观察国产甲肝减毒活疫苗不同免疫程序的加强免疫效果 ,以探求适宜的甲肝减毒活疫苗加强免疫程序。方法　在河北省正定县对 1～ 7岁的儿童采血检测抗 -HAV ,筛选甲肝易感者 ,按出生月份的单双数随机分为疫苗组和对照组 ,疫苗组接种 1针 ,观察免疫效果。在 1针法的基础上 ,随机抽取部分观察对象 ,分别按0、12月和 0、2、6月程序进行加强免疫 ,并于免疫后 1、2、3、6、7、12、13和 2 4个月采血清 ,观察免疫后的抗体动态。结果　接种 1针疫苗后 2～ 3个月抗体阳转率和几何平均效价均达高峰 ,分别为 92 .2 %～ 94 .9%和 12 6 .2～ 131.3mIU/ml,以后开始下降 ,12个月时降至 79.8%和 79.6mIU/ml。加强免疫后 ,抗体阳转率均达 10 0 % ,抗体水平成倍上升 ,其中以 0、12月程序免疫后抗体几何均值最高 ,为 32 94 .5mIU/ml。结论　甲型肝炎减毒疫苗具有良好的免疫记忆反应 ,采用 0、12月程序免疫效果更佳     

冻干水痘减毒活疫苗的稳定性

目的 观察冻干水痘减毒活疫苗的稳定性。方法 将样品分别放37℃、22℃、8℃、-15℃及-70℃,不同时间取出,采用蚀斑形成单位（PFU）分别测定样品毒力滴度。结果-15℃以下保存5年或8℃保存92周,疫苗滴度仍很稳定,8℃保存100～124周滴度缓慢下降,但仍保持在规程规定的标准以上。22℃保存30周滴度不变。37℃（模拟长期老化试验）保存1周,滴度下降不超过一个对数指数。37℃保存4周,病毒滴度下降缓慢。结论 水痘 减毒活疫苗稳定性良好。     

国产水痘减毒活疫苗的稳定性观察

目的观察国产水痘减毒活疫苗的稳定性。方法取40批上海生物制品研究所有限责任公司(以下简称上海公司)2007~2013年生产的水痘减毒活疫苗,按照国家食品药品监督管理局批准的水痘减毒活疫苗注册标准和《中国药典》的要求进行各项检定:在0月进行热稳定性试验;在0和18月进行鉴别试验、物理检查、水分检测、无菌检查、异常毒性检查、牛血清白蛋白残留量检测、抗生素残留量检测(2010年10月以后生产的疫苗);在0、6、12、18月进行病毒滴定。结果上海公司2007~2013年生产的水痘减毒活疫苗在有效期内各项指标检定结果均符合水痘减毒活疫苗注册标准和《中国药典》的相关要求。结论上海公司生产的水痘减毒活疫苗质量稳定,安全有效。     

甲型肝炎减毒活疫苗的应用及其免疫原性评价

甲型肝炎疫苗(hepatitis A vaccine,Hep A)是防控甲型病毒性肝炎的重要手段。甲型肝炎减毒活疫苗(Hep Aattenuated live vaccine,Hep A-L)因其价格低廉、免疫效果良好,在我国被广泛应用。本文现对Hep A-L的应用及其免疫原性作一综述。     

不同剂量黄热减毒活疫苗的免疫原性分析

目的分析不同剂量黄热减毒活疫苗在小鼠体内的免疫原性。方法分别用原倍、1/2、1/3和1/5剂量的黄热减毒活疫苗免疫NIH小鼠,免疫后1、2、3、4、5、6周各经眼球采血1次,采用噬斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测各剂量组小鼠免疫后不同时间体内抗体水平。结果免疫小鼠后1~6周各时间点原倍剂量组与1/2、1/3、1/5剂量组的血清抗体滴度差异均无统计学意义(P均0.05),各剂量组小鼠免疫后1~6周血清抗体均100%阳转,可认为1/2、1/3、1/5剂量组与原倍剂量组相比,免疫原性基本一致。结论黄热减毒活疫苗注射剂量减少至1/5仍可保证免疫原性不变。     

大规模人群接种甲型肝炎减毒活疫苗的免疫效果

应用国产甲型肝炎（下称甲肝）减毒活疫苗采用整群随机分组方法对31421名中小学生进行接种,于接种后4～6周随机抽取1546人进行血清学观察,观察组抗HAV－lgG阳性率为78．7％,其中长春苗组为79．77％,昆明苗组为78．09％。观察组抗HAV－lgG明显高于对照组的14.2％和免疫前的10.4％。经4年的观察,观察组发病为3．97／10万,其中长春苗组为5．0／10万,昆明苗2．82／10万。对照组发病率为29．16／10万,长春苗组为30.26／10万,昆明苗组为28.24／10万。观察组与对照组比较保护率为86．9％,其中长春苗保护率为83．5％,昆明苗保护率为86．99％,两所疫苗效果差异无显著意义。     

乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性分析

目的分析乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定性。方法按照《中国药典》三部(2010版)及武汉生物制品研究所有限责任公司《乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠返祖传代试验及小鼠脑内致病力试验SOP》,对随机抽取的28批乙型脑炎减毒活疫苗进行乳鼠返祖传代试验的脑内致病力检测,同时测定发病乳鼠脑组织悬液的病毒滴度,并应用SPSS 13.0软件对28批疫苗病毒滴度、发病乳鼠脑组织上清病毒滴度及发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力检测结果进行Kendall相关性分析。结果 28批乙脑减毒活疫苗病毒滴度为6.0~7.1 Lg PFU/ml,发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力(LD50)均低于3.0 Lg LD50/0.03 ml,发病乳鼠脑组织上清病毒滴度为5.8~7.0 Lg PFU/ml。发病乳鼠脑内病毒对小鼠的脑内致病力与疫苗滴度及发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间不存在相关性,而疫苗滴度与发病乳鼠脑组织上清病毒滴度间低度相关。结论乙型脑炎减毒活疫苗毒力稳定,乳鼠传代返祖试验及其判定标准科学严谨,用于疫苗的质量控制是可行的,进一步表明SA14-14-2株遗传稳定性良好。     

甲型肝炎减毒活疫苗检定方法精确度的探讨

目的 提高甲肝减毒活疫苗检定方法的精确度。方法 比较不同刑量组与剂量组不同的试验数,以 及采用点斜法与Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法计算ＴＣＩＤ５０。结果 通过比较４种不同的试验设计,发现随着稀释倍数减小或／和各 稀释度试验管数增加,ＴＣＩＤ５０的标准误减小,以减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数,其标准误的缩小最为明显。 点斜法计算的ＩＣＩＤ５０９５％可信区间较Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法为窄。结论 减小稀释倍数同时增加各稀释度试验管数,并采 用点斜法计算ＴＣＩＤ５０,能使疫苗检定方法的精确度满足规范化甲肝活疫苗滴定的要求。     

应用Vero细胞生产乙型脑炎减毒活疫苗

<正>乙脑减毒活疫苗副反应小,注射针次少,但乙脑减毒括疫苗在生产过程中由于使用地鼠肾细胞,存在动物源性的各种污染和变化因素不易控制。所以我们尝试使用传代细胞制备乙脑活疫苗。方法是将乙脑SA14-14-2毒株接种于长成致密单层的Vero细胞瓶中,加入无血清维持液,35℃培养,于