食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增检测方法

目的建立食品过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。方法根据羽扇豆的ITS基因设计羽扇豆的特异性引物,进行特异度、灵敏度、稳定性测试,建立LAMP检测方法。结果本文建立的食品过敏原羽扇豆成分LAMP检测方法能有效对羽扇豆成分进行快速检测,具有较强的特异度和稳定性,灵敏度可达0.001%(w:w)。结论该方法特异度强、灵敏度高,可以快速、准确检测食品中过敏原羽扇豆成分。     

食品过敏原大豆成分LAMP实时浊度检测法的建立

根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明:该方法能够特异性检出食品中的过敏原大豆成分,特异性高,灵敏度达0.1%(w/w)。对含有大豆成分为10%、1%、0.1%、0%(w/w)的样品分别进行20次重复实验,其稳定性好,假阳性和假阴性率为0%。本实验建立的LAMP方法适用于特异性快速检测食品中的过敏原大豆成分。     

环介导等温扩增法检测食品过敏原大豆成分

目的 建立食品过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)分析方法。方法 根据大豆的内源管家基因Lectin基因设计6条过敏原大豆的特异性引物(两条内引物, 两条外引物和两条环引物), 建立LAMP检测方法。结果 环介导等温扩增法在63 ℃条件下, 40 min内可检出过敏原大豆成分, 该方法能够有效对大豆成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度可达0.01%(w/w)大豆粉。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测食品中过敏原大豆成分。     

小麦成分环介导等温扩增现场快速检测方法的建立和应用

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法现场快速检测小麦过敏原成分的分析方法,有助于食品安全突发事件现场和食品企业生产过程中的样品检测小麦成分。方法运用LAMP建立食品过敏原小麦成分LAMP现场快速检测方法,采用实时浊度仪和显色法进行结果判断,并进行反应条件优化。结果本方法特异性强,对35个对照样品无交叉反应;方法的灵敏度高,检测限可达到0.01%小麦;方法稳定性好,对0.1%和0.01%小麦样品重复检测结果稳定。通过对市场采集70份样品检测结果显示,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果一致。结论本方法操作简单,检测时限短,结果判断准确,可用于过敏原小麦成分的快速检测。     

食品过敏原羽扇豆成分的实时荧光PCR检测方法

羽扇豆是欧盟法规标签要求强制性标识的食品过敏原。采用现有参考文献TaqMan实时荧光PCR方法,研究建立食品过敏原羽扇豆成分的检测方法。研究表明建立的研究方法具有特异性,灵敏度高,检测限为1 mg/kg。此方法适用于食品中过敏原羽扇豆成分检测。     

食品中牛奶过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的建立食品过敏原牛奶成分LAMP(loop-mediated isothermal amplification)检测方法,并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品,没有出现交叉反应,具有良好的特异性。该方法的检测灵敏度为0.5%,与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品,检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于过敏原牛奶成分的检测,具有良好的应用前景。     

食品中牛奶过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的 建立食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法,并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法 针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果 本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品,没有出现交叉反应,具有良好的特异性。通过添加试验方法的检测灵敏度为0.5 %,与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品,检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论 本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于过敏原牛奶成分的检测,具有良好的应用前景。     

环介导等温扩增技术快速检测食品过敏原牡蛎成分

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)方法快速检测食品中的过敏原牡蛎成分。方法根据国家生物技术信息中心的牡蛎线粒体序列,通过Primer Explorer version 5.0软件设计引物并筛选出LAMP特异性扩增引物。并进一步对反应体系优化,对该方法的灵敏度、特异性以及稳定性进行验证。对10种牡蛎阳性样品、14种阴性样品、4类牡蛎相关食品进行检测。结果该方法可以检测出含牡蛎成分0.1%, DNA浓度为0.01 ng/μL的样品。在实验时间上大幅缩短,反应可在25～45 min内结束,并且可以在微量体系下完成,对于食品相关产品的检出率为100%。结论该方法操作简单、成本较低、特异性高、灵敏度好,适用于食品中过敏原牡蛎成分的检测。     

食品中芥末过敏原成分LAMP检测方法的建立

目的：建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测方法比对。方法：针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与RT-PCR检测方法比对。结果：建立的LAMP检测方法,经特异性验证,与所测试的13 种植物,无交叉反应。通过添加实验,方法的检测灵敏度为0.5%,与RT-PCR方法检测灵敏度相当。检测了25 份实际样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论：建立的食品过敏原芥末成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于芥末过敏原成分
的检测,具有良好的应用前景。     

环介导等温扩增技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分

目的 建立植物蛋白饮料中大豆成分环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplificantion,LAMP）快速检测技术方法。方法 根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和稳定性进行测试,并以实时荧光PCR方法为参比方法,对32种植物蛋白饮料进行检测应用验证。结果 本研究建立的LAMP方法特异性强,稳定性好,最低检出限为0.1%（以质量分数计）;通过参比方法验证,方法特异性和灵敏度为100%,不存在假阳性和假阴性。结论 本研究建立的LAMP技术快速检测植物蛋白饮料大豆成分的方法具有操作简单、快速准确、检测成本低等优点,可为植物蛋白饮料大豆成分掺杂掺假提供一种快速检测方法。     

植物蛋白饮料中榛子成分环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立

该研究基于植物蛋白饮料掺杂使假现象普遍,建立一种针对榛子成分为检测目标的环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）快速检测技术方法。根据欧洲榛子染色体Ca8（登录号：LR899430.1）基因保守序列（第19517533 ~19519500 bp）,设计榛子成分环介导等温扩增检测特异性引物,构建反应体系,并验证方法的特异性、灵敏度和稳定性;以Real-Time PCR（Polymerase Chain Reaction）为对照方法,采用显著性差异检验（McNemar’s检验）方法,通过32种植物蛋白饮料检测结果验证LAMP方法的性能指标和准确性。该研究建立的LAMP方法特异性强,33种植物成分中除了榛子DNA外,其它植物成分DNA均未获得阳性扩增结果;重复性实验稳定性好（扩增Ct值,RSD=5.41%）,最低检出限为0.1%（以质量分数计）;通过植物蛋白饮料产品应用性验证,得出方法特异性和灵敏度均为100%,不存在假阳性和假阴性。综上,该研究建立的植物蛋白饮料榛子成分LAMP检测技术,具有操作简单、快速高效（从样品处理到最终结果可在2 h内完成）、准确度高等优点,可应用于植物蛋白饮料榛子成分快速检测。     

肠炎沙门氏菌的LAMP检测方法的建立

建立肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对肠炎沙门氏菌的快速检测.通过针对肠炎沙门氏菌血清型特异性基因lygD设计LAMP内外引物对,优化LAMP扩增反应条件,采用包括肠炎沙门氏菌在内的10种不同菌株进行LAMP引物特异性检测;通过系列梯度稀释肠炎沙门氏菌菌液进行LAMP扩增,计算检出限;并对鲜鸡蛋模拟样本进行LAMP检测.结果表明LAMP法可快速特异地检测出肠炎沙门氏菌;细菌培养液检出限为2.33×101 cfu/mL,鲜鸡蛋模拟样品为2.67×l01cfu/mL.该方法反应灵敏度高,可用于食品中肠炎沙门氏菌的快速检测.     

溶血性链球菌LAMP检测方法的建立

目的：研究溶血性链球菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,实现对溶血性链球菌的快速检测。方法：针对溶血性链球菌的scpA 基因设计4 条特异性LAMP 内外引物进行LAMP扩增;优化扩增反应条件;采用包括溶血性链球菌在内的6 种不同菌株进行LAMP 的特异性检测,并酶切鉴定;对溶血性链球菌菌液以无菌水进行10 倍系列梯度稀释后,进行LAMP 扩增检测其灵敏度;将菌掺入牛奶样本并进行LAMP 检测。结果：本法可快速灵敏地检测出溶血性链球菌,反应特异性高,检出限为16.7CFU/mL,而牛奶样本的检出限则达10CFU/mL。结论：LAMP 法可用于食品溶血性链球菌的快速检测。     

环介导等温扩增技术检测花生过敏原

花生引起的过敏已经越来越受到重视,因此对花生过敏原进行检测也变得越来越重要。目前对花生过敏原的检测大多数采用抗原抗体法或PCR方法,抗原抗体法耗时比较长,而PCR方法需要昂贵的仪器设备。本项目通过建立环介导等温扩增快速检测技术来检测食物中花生过敏原的基因,为食品中花生过敏原成分检测提供方便。该方法快速,简便,灵敏度高,可以很好的应用到现实检测中去,这个方法的建立具有很重大的意义,为食品的安全检测提供了很大的方便。     

环介导等温扩增技术快速检测奶粉中的单增李斯特菌

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下特异、灵敏、快速的新型基因扩增技术。试验以单增李斯特菌为研究对象,根据其特有的hlyA基因设计了一套特异性引物,进行LAMP扩增。结果表明,LAMP检测单增李斯特菌的灵敏度为2.45×101cfu/mL,其对人工感染奶粉样品的检出限为7.32×101cfu/mL。对其它食品病原菌进行检测,结果均未出现目的条带,特异性强。表明LAMP法适合于食品中污染单增李斯特菌的快速检测。     

可视化LAMP检测常见肉制品中猪肉成分

根据GenBank中公布的猪线粒体色素细胞b基因序列设计6 条特异性环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）引物,通过简化线粒体DNA提取步骤,优化反应体系,以常见的牛、羊、鸡、鸭、马、驴肉为阴性对照验证该方法的特异性,掺假率梯度稀释以验证该LAMP法的最低检测限,建立常见肉制品中猪肉成分的可视化LAMP检测方法。结果表明：该方法提取目的基因操作简单、稳定,该可视化LAMP检测法以4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐为指示剂,能准确检测出常见肉类中猪肉是否掺杂,检测结果肉眼可见,灵敏度为10 pg/μL。