纳米免疫传感器法快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B1

摘要：本文以改性壳聚糖为固定化材料,包埋固定纳米金胶微粒及黄曲霉毒素B1抗体制备信号放大型纳米免疫传感器,建立了免疫传感器测定黄曲霉毒素B1的方法;优化了纳米免疫传感器的制备条件及检测参数;基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究了其免疫反应对传感器响应电流的影响,结果表明免疫响应电流与底液中AFB1的浓度在0.1～1.1 ng mL-1范围内成线性关系,其校正曲线方程为IP =-4.9274x +15.108（R 2= 0.9912）,其最低检测限为0.05 ng mL-1（S/N=3）;该免疫传感器的稳定性和重现性较好。利用该法对花生油、玉米油等实际样品中的AFB1进行了检测,其回收率为在87.8～98.2%,检测精确度优于ELISA试剂盒法,用于粮油食品中黄曲霉毒素的快速检测是可行的。     

基于石墨烯/离子液体构建免疫传感器快速测定食品中黄曲霉毒素B1

采用壳聚糖、石墨烯和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合膜修饰玻碳电极,包埋固定黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）抗体,构建了一种免疫传感器,用于快速测定食品中的AFB1。在pH值为7.0含1 mmol/LK3[Fe(CN)6]和0.1 mmol/L KCl的磷酸盐缓冲溶液中,基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,运用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究免疫反应对传感器响应电流的影响。在优化实验条件下,免疫传感器峰电流的降低值随溶液中AFB1质量浓度对数的增大而增大,且二者在0.1～8.1 ng/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.04 ng/mL（RSN=3）。该免疫传感器的稳定性和重复性较好,利用该法对花生和玉米油样品中AFB1进行检测,回收率为94.73%～104.41%,检测结果与高效液相色谱法基本一致,用于食品中AFB1的快速检测是可行的。     

基于金标抗体的电化学免疫传感器检测米糠油中黄曲霉毒素B1

目的 为了快速检测食品中黄曲霉毒素B1的含量,本文提出一种以胶体金标记抗体的电化学免疫传感器用于米糠油中AFB1的检测。方法 首先在金电极(AuE)表面修饰抗原,再进一步修饰制备好的金标抗体,最后带有辣根过氧化物酶的二抗(IgG-HRP)通过与抗体反应结合到电极表面。当目标物AFB1存在时,与抗原竞争结合金标抗体,HRP催化过氧化氢(H2O2>)将溶液中对苯二酚(HQ)氧化成苯醌(BQ)的电流信号会下降,间接检测AFB1。结果 该免疫传感器在抗原包被量和金标抗体用量为3 μL且金标抗体与AFB1孵育80 min条件下具有最佳性能。该法线性范围为0.02 ng/mL~80 ng/mL,检出限为0.027 ng/mL。将该传感器应用于米糠油中进行加标回收实验,回收率在88.7%～108.0%。结论 该传感器具有良好的特异性、重现性和稳定性,可用于植物油中AFB1的快速检测。     

LC/MS法测定粮油食品中黄曲霉毒素B_1

研究了液湘色谱-离子阱质谱技术检测粮油食品中AFB1。样品用80%甲醇溶液提取,经自制的净化柱,以甲醇-水为流动相,在C18柱上对样品中的黄曲霉毒素B1进行分离,采用质谱正离子模式对AFB1进行检测。方法的线性范围为0.139~1.39μg/L,线性相关系数为0.9998;S/N=3时,检出限为0.510μg/kg。试验证明,该方法具有操作方便、快速、结果准确、检测限低等特点。     

基于铜离子显色反应的磁珠免疫分析快速检测黄曲霉毒素B_1

本文提出了一种基于抗体功能化纳米氧化铜信号示踪的比色免疫分析检测黄曲霉毒素B_1。本方法的建立是基于羧基化磁珠表面共价结合抗体与黄曲霉毒素B_1高效结合后,再与静电吸附在纳米氧化铜表面的抗体特异性识别,定量结合的氧化铜标记物可经酸溶解释放出高浓度的铜离子,加入腙类铜离子显色剂即可生成红色络合物,紫外-可见吸收光谱法测定该红色溶液的吸光度,或直接通过目视比色法即可方便地实现免疫分析信号转导从而实现快速检测黄曲霉毒素B_1。结果表明,在培育时间为15 min及加入显色剂浓度为10μmol/L时,该方法具有较高的检测灵敏度并在0.01~100 ng/mL范围内具有良好的相关性,检测下限是0.035 ng/mL。此外,该方法已经成功应用于分析大米样品中的黄曲霉毒素B_1,其结果与GB 5009.22中的方法相一致。     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。     

食用油中黄曲霉毒素B1免疫亲和检测技术研究

采用国内自主研制的黄曲霉毒素专用荧光快速检测仪及配套的免疫亲和试剂盒建立一套快速的免疫亲和检测方法,对食用油中的黄曲霉毒素B1进行测定。用10 mL石油醚和15 mL70%甲醇对5.0 g样品进行初步提取,过滤后,萃取液用免疫亲和微柱纯化富集,洗脱液放入黄曲霉毒素专用荧光快速检测仪中自动读取结果。实验结果表明,该方法的直接读数的线性范围为0.3-25μg/kg,R2=0.999 5,方法的平均回收率为87.11%,相对标准偏差为1.44%-6.33%,最低定量浓度为0.3μg/kg;应用于食用油样品AFB1检测,方便快速,安全准确,测定全过程所需时间可以控制在30 m in左右,检测成本低于其他仪器方法。     

构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B1

构建下转换荧光-适配体免疫层析试纸条用于食品中黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1,AFB1)的快速高效检测.体系中AFB1存在会减弱下转换荧光-适配体纳米颗粒层析至T线时与AFB1半抗原的结合能力,从而导致下转换荧光信号衰减,进而实现对AFB1的高效检测.该方法在AFB1质量浓度1～40 ng/mL范围内与荧光...     

间接竞争ELISA检测试剂盒测定粮油食品中的 黄曲霉毒素B1

目的建立一套适用于食品中黄曲霉毒素B1的快速、简便、准确的检测方法,同时,进一步验证本公司研制的黄曲霉毒素ELISA检测试剂盒的检测效果。方法用酶联免疫法和高效液相色谱法分别对市售的食用油、花生、谷物样品中AFB1的污染程度进行检测分析。结果用ELISA法和HPLC法测定食用油样品的回收率分别为87.1%~92.7%和85.8%~100.8%;花生样品的回收率分别为76.0%~92.8%和76.3%~92.9%;谷物样品的回收率分别为82.6%~92.7%和82.7%~106.4%,花生加标样品6次平行测定的RSD分别为1.29%~2.46%和5.15%~8.70%,11份阳性样品测定结果表明2种方法具有很好的一致性(r2=0.995)。结论 ELISA法和HPLC法均有很好的线性关系,且测定结果相近。本公司研制的黄曲霉毒素ELISA试剂盒可以快速地检测食品中黄曲霉毒素B1,分析周期短,分析效率高。     

基于纳米抗体-荧光素酶的黄曲霉毒素B1检测方法构建

黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种剧毒、致癌的食源性污染物,严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析（BLEIA）方法,系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体（NB）与纳米荧光素酶（Nluc）融合蛋白（G8-Nluc、Nluc-NB26和Nluc-NB28）的可溶性表达、纯化情况及酶催化活性。基于3种融合蛋白分别建立BLEIA检测体系,选择Nluc-NB26用于谷物样品的分析和验证。结果表明,Nluc-NB26的可溶性表达量最高,稳定性更好,Nluc-NB28的可溶性表达量次之,而G8-Nluc基本不可溶。不同表面活性剂对G8-Nluc的促溶解性研究表明,添加N-月桂酰肌氨酸钠可显著提高其溶解度,纯化得到的3种融合蛋白均具有良好的酶活性及抗原结合活性。基于融合蛋白的BLEIA检测结果显示,Nluc-NB28-BLEIA、G8-Nluc-BLEIA和Nluc-NB26-BLEIA体系检测AFB1的IC50值分别为4.213,1.697,2.169 ng/mL,表明G8-Nluc-BLEIA体系的灵敏度最高,Nluc-NB26-BLEIA与前者接近,Nluc-...     

基于交流电动作用的免疫传感器快速高灵敏检测花生油中的黄曲霉毒素B_1

该文建立了花生油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)快速准确的检测方法。利用交流电动作用对AFB_1进行加速和富集,然后在敏感元件微芯片上与固定的抗AFB_1单克隆抗体发生免疫反应从而导致电容规律性变化,构建AFB_1免疫传感器。结果表明,该方法可在30 s内完成加样、孵育和检测,实现对食用花生油中AFB_1的高灵敏度定量分析。该方法针对测试液中AFB_1浓度的线性范围为10~(-6)～10~(-2)μg/m L(R~2=0. 993 6);相对标准偏差(n=5)为6. 63%～15. 60%,最低检出限为2. 01×10-7μg/m L(3σ/S),定量限为2. 35×10~(-7)μg/m L(10σ/S),平均加标回收率为85. 20%～97. 70%,对AFB_2、AFM_1、AFG_1、OTA、DON、ZEN等可能共存毒素具有抗干扰性。     

Development of a label-free electrochemical immunosensor based on carbon nanotube for rapid determination of clenbuterol

We have fabricated a label-free electrochemical immunosensor for the detection of clenbuterol, a kind of β-agonist. Clenbuterol was covalently linked to multi-wall carbon nanotubes (MWCNTs) through a two-step process using 1-(3-(dimethylamino)-propyl)-3-ethylcarbodiimide and N-hydroxysulfo-succinimide as crosslinkers. The clenbuterol-MWCNT conjugates were cast on a glassy carbon electrode. Cyclic voltammetry and differential pulse voltammetry were employed to monitor the fabrication steps of immunoreaction system using the redox probe of K₃Fe(CN)₆. In the presence of monoclonal antibody against clenbuterol, the redox peak current of [Fe(CN)₆]^3−/4− was decreased, presumably due to that antibody in solution could adsorb on the electrode surface modified clenbuterol-MWCNT conjugates. The selected monoclonal antibody showed very high sensitivity and specificity for clenbuterol, and was used for the detection and quantitative determination of clenbuterol in solution with a competitive mechanism. This approach provided a detection limit of 0.32 ng mL⁻¹. Accurate detection of clenbuterol in spiked animal feeds was demonstrated by comparison with conventional ELISA assays and LC–MS method.     

Development of a rapid and highly sensitive determination of triacylglycerol in lipids fraction of foodstuffs

This study describes the development of a fast and accurate method to determine the triacylglycerols (TAGs) content in lipids fraction. It comprises a solid phase chromatographic separation and a use of a commercially available kit followed by spectrophotometric determination. Evaluations of TAGs contents in heated edible oils (canola oil and sesame oil) by the new methods were good agreements with those by the conventional open column method. Furthermore, this method was applied to estimate TAGs contents in the lipids from rice grains with different polishing levels.     

A rapid method for iron determination in fortified foods

The objective of this study was to develop and evaluate a rapid method for iron determination in fortified and unfortified foods. Method: samples were mixed with an iron-extracting solution (1.2 M HCl, 0.6 M trichloroacetic acid, and 0.7 M hydroxylamine hydrochloride) and heated in a boiling water bath for 15 min. The mixtures were cooled and filtered. The filtrate was mixed with a chromogen reagent (0.03% bathophenanthroline disulfonic acid in 3 M sodium acetate). Iron concentration was determined by measuring absorbance at 535 nm. The accuracy of the rapid method was validated by comparing results to a standard laboratory method for iron determination. Results: the rapid method produced accurate results for the majority of the food samples tested, including wheat flour fortified with FeSO₄, electrolytic iron, NaFeEDTA, Ferrochel® or ferrous fumarate; powdered drink mixes, and enriched rice. However, results obtained using the rapid method were significantly lower than results obtained using the standard method for the enriched cornmeal (30.04 vs. 33.16 μg Fe/g; P=0.0118) and the enriched flour (41.90 vs. 47.28 μg Fe/g; P<0.0001). Conclusion: The rapid method is simple, inexpensive, and suitable for monitoring iron concentrations in fortified foods.     

无需衍生化样品处理快速测定食品中 黄曲霉毒素B1

建立无衍生-超高效液相色谱法测定食品中的黄曲霉毒素B1的快速检测方法。样品经甲醇-水提取,免疫亲和柱净化,C18色谱柱分离、大体积流通池荧光检测器检测。黄曲霉毒素B1在0.10 ng/ml~5.00 ng/ml范围内与峰面积呈良好线性关系,R2>0.999,在6种基质,0.50 μg/kg~2.00 μg/kg范围内加标,平均回收率在71.7%~111.2%之间,相对标准偏差(RSD)为3.8%~11.5%,检出限(LOD)为0.05 μg/kg。本方法灵敏、快速、无衍生、结果准确,能够满足食品中黄曲霉毒素B1残留的检测需求。     

婴幼儿辅助食品(谷类)中黄曲霉毒素B1的 检测能力研究

目的对来自30个省(自治区、直辖市),分布于质检、食药、农业等各行业的实验室的婴幼儿辅助食品(谷类)中黄曲霉毒素B_1的测定能力进行评价和研究,了解全国食品检测机构黄曲霉毒素的测定能力,帮助实验室提高检测技术及质量控制能力。方法对各参加实验室婴幼儿辅助食品(谷类)中黄曲霉毒素B_1的测定结果进行稳健统计分析,通过稳健Z比分数评价实验室检测能力,并对离群数据进行技术分析。结果 158家实验室参加了本次能力验证计划,满意结果数为142家,满意率为89.9%;可疑结果数为4家,可疑率为2.5%;不满意结果数为12家,不满意率为7.6%。结论大多数参加实验室检测能力评价为满意,表明在全国范围内,婴幼儿辅助食品(谷类)中黄曲霉毒素B_1检测水平总体较好。     

高效液相色谱-串联质谱法快速检测粮油制品中黄曲霉毒素B1的含量

目的建立高效液相色谱-串联质谱法快速测定粮油制品中黄曲霉毒素B_1含量的分析方法。方法样品中的黄曲霉毒素B_1经提取、免疫亲和柱净化、浓缩等步骤,以5 mmol/L乙酸铵溶液、乙腈-甲醇溶液(50:50,V:V)为流动相,按照梯度洗脱程序,通过液相色谱-串联质谱法进行测定,外标法定量。结果黄曲霉毒素B_1在0.2～20ng/mL浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系,线性方程为Y=68577.3X-20845,r0.998,加标回收率在85.0%～94.1%之间,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)5.5%,方法检出限和定量限分别为0.07和0.2μg/kg。结论该方法测定结果准确、可靠,可用于快速测定粮油制品中黄曲霉毒素B_1的含量。     

酶法快速测定植物油中游离甾醇

目的 基于甾醇在胆固醇氧化酶的作用下与显色剂产生显色反应,建立了固相萃取结合酶法测定植物油中游离甾醇含量的快速检测方法。方法 采用固相萃取（Solid Phase Extraction, SPE）结合酶法40 min内实现对植物油中的游离甾醇含量测定,并应用于植物油中游离甾醇含量的测定。结果 方法学验证的结果显示,植物甾醇含量在浓度范围0.3~7.5 mg/mL之间线性良好,检出限为0.018 mg/g,日内精密度为7.94%,日间精密度为6.88%,回收率在84.75%~99.50% 之间,实际样品的检测结果显示,酶法与气相色谱-串联质谱法（gas chromatography-tandem mass spectrometry, GC-MS）的相对误差在±20%以内,且酶法的检测效率比GC-MS法提高3倍。常见的几种植物油中,游离甾醇含量较高的是玉米油和菜籽油,分别为1.53~3.66 mg/g和1.98~3.02mg/g。结论 本研究建立的SPE结合酶法检测植物油中游离甾醇的快速检测方法稳定性、重现性好、灵敏可靠,可满足植物油中游离甾醇的现场批量快速检测。     

高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇

本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A快速测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法。玉米样品经磨碎后用水匀浆提取,提取液经过免疫亲和柱净化,超高效液相色谱LC-30A紫外检测器检测。试验结果表明：线性范围0.05~10.00μg/mL,相关系数大于0.999 9;标准样品的仪器检出限为0.016μg/mL,仪器定量限为0.05μg/mL;3个浓度标样的保留时间和峰面积相对标准偏差分别在0.041%~0.043%和0.11%~1.57%之间;玉米样品3个浓度加标回收率在81.2%~90.0%之间。该方法简便快速,且易操作。