海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的制备及其性质研究

研究了以海藻酸钠包埋法制备固定化S-腺苷甲硫氨酸（sAM）合成酶的条件,并考察了固定化酶的酶学性质。结果表明,最适固定化条件为：海藻酸钠质量分数3％、CaCl2质量分数4％、SAM合成酶加量（以每克海藻酸钠计）75mg、固定化时问30min,在此条件下,固定化酶活力回收率达到42％。固定化酶热稳定性较好,在50℃下保温5h仍保留69％的酶活力,而游离酶则完全失活;固定化酶在碱性条件下的稳定性较好,在pH值7．5～9．0的缓冲溶液中4℃下保温10h仍保留84％以上的酶活力;将固定化酶用于SAM的合成,连续反应5批次后,仍保留82％的酶活力。     

海藻酸钠-明胶协同固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

以海藻酸钠和明胶为载体,对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行固定化。再用戊二醛对其进一步交联,增强固定化酶的稳定性。考察了海藻酸钠和明胶质量分数、CaCl2质量分数、酶和载体比例以及交联剂戊二醛体积分数等因素对固定化酶的影响。结果表明,最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数2.0%、明胶质量分数1.0%、CaCl2质量分数4.0%、固定化酶量为2.5 g/L凝胶、戊二醛体积分数0.6%。交联固定化酶热稳定性得到大幅度提高,在50℃下保温5 h仍保留72%的活力,而游离酶则完全失活。交联固定化酶在碱性溶液中的稳定性较高,在pH=8.0～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留87%以上。将交联固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应8批次后酶活性仍保留65%。     

高效液相色谱法分析胞内S-腺苷-L-甲硫氨酸含量及其合成酶活性的优化研究

对重组毕赤酵母胞内S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)含量以及SAM合成酶活性的高效液相色谱(HPLC)测定方法进行了优化。通过调整流动相浓度和洗脱程序,建立了保留时间适中、分离效果好的SAM定量分析方法。结果表明,SAM浓度在0.05～0.5 g·L-1时,其峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.99996,平均回收率...     

S-腺苷甲硫氨酸制备方法的研究进展

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是生物体内重要的生理活性物质,参与多种生化反应,临床上被广泛用于治疗抑郁症、神经紊乱、肝病、关节炎等.综述了SAM制备方法的研究进展,述及的SAM制备方法包括化学合成法、微生物发酵法、体外酶促合成法以及全细胞催化法.     

反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸

反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸,采用Luna C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为100%0.02 mol/L乙酸铵,用乙酸调pH值至4.0;流速为1.0 mL/min,用二极管阵列检测器检测,检测波长为254 nm,在200~800μg/mL范围内线性良好(r=0.9997),检出限为2.3 ng。     

大肠埃希菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸

目的为大规模工业化生产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)提供一套经济合理的生产工艺。方法将经DNA序列测定正确的SAM合成酶基因(SAMS)片段,经Eco RⅠ和NotⅠ双酶切,亚克隆至大肠埃希菌表达载体p ET-28a上,构建SAMS基因重组表达质粒p ET-28a-SAMS。将重组表达质粒转入大肠埃希菌表达宿主BL21(DE3),构建大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)。采用混合悬浮培养法,利用含有SAMS基因的重组大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)中的SAM合成酶系和酿酒酵母JM-310中的ATP生物合成酶系,构建一个以葡萄糖为能源的中间偶合ATP再生系统,并对两种细胞的偶联合成比例、偶联时间、通透剂的种类及浓度、偶联缓冲液主要成分的浓度进行优化。结果经双酶切及菌落PCR鉴定证明,重组表达质粒p ET-28a-SAMS及大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)构建正确。大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)与酿酒酵母的最佳偶联合成比例为4∶1,最佳偶联时间为5 h,添加5%甲苯通透效果最好,200 mmol/L磷酸缓冲液、200 mmol/L葡萄糖、10 mmol/L腺苷、30 mmol/L Mg Cl2·6H2O、30 mmol/L L-甲硫氨酸为最适偶联缓冲体系。最佳偶联条件下,偶联系统中SAM的浓度最高达1.7 g/L,对照组中SAM的浓度为0.17 g/L。结论本研究建立的方法操作方便,工艺简单,为SAM的廉价生产提供了一条新的途径。     

重组大肠杆菌全细胞催化合成S-苷甲硫氨酸

从大肠杆菌(E.ColiK12)基因组DNA中克隆出甲硫氨酸腺苷转移酶基因,构建了能高效表达甲硫氨酸腺苷转移酶的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。将重组大肠杆菌细胞用于催化合成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的研究中。实验发现,用φ(甲苯)=2%的水溶液对重组细胞进行通透化处理后,能大幅提高SAM的产率。探讨了底物浓度、温度、pH、反应时间以及菌体密度对反应转化率的影响。最佳反应条件为:底物浓度(ATP)30 mmol/L,反应温度35℃,pH=7.0,反应时间8 h,细胞密度80 g湿细胞/L反应液。在此条件下,底物ATP的转化率超过95%。     

以壳聚糖为载体固定化海藻糖合成酶

以壳聚糖为栽体,采用戊二醛为交联剂的方法来固定海藻糖合成酶。研究结果表明：在戊二醛质量分数为0．5％、液态酶与壳聚糖凝胶的配比为1：1、交联pH值为8．0、交联温度为15℃、交联时间为12h条件下,固定化海藻糖合成酶的活性最高,生成的海藻糖量最多,海藻糖的最高含量能达到40％左右。另外,固定化酶转化麦芽糖为海藻糖的最佳反应时间为18h,这时可以获得最高含量的海藻糖。     

S-腺苷酰-L-甲硫氨酸对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响

目的探讨S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAMe)对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响,为深入研究SAMe在肝癌治疗中的作用奠定基础。方法体外培养HepG2细胞,MTT法检测不同浓度SAMe作用不同时间对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕法检测最适浓度SAMe对HepG2细胞迁移能力的影响;RT-PCR、免疫细胞化学法及Westernblot法检测SAMe对HepG2细胞癌基因C-myc转录、蛋白定位及表达的影响。结果终浓度为15.0μmol/L的SAMe处理细胞5d,细胞抑制率达54.6%,且抑制作用呈时间与剂量依赖性;经15.0μmol/LSAMe处理的细胞迁移能力明显下降,愈合速率为对照组的76.78%;细胞中癌基因C-myc的转录和蛋白表达均明显下降,蛋白定位无明显变化。结论 SAMe可通过降低C-myc的表达,抑制HepG2细胞的增殖和迁移,为肝癌治疗性药物的研究提供了一个新的方向。     

氨基树脂固定胃蛋白酶的方法及性质研究

采用氨基树脂作为载体,戊二醛作为交联剂,对胃蛋白酶的固定化进行了研究,并对固定化条件和固定化胃蛋白酶的部分酶学性质进行了分析。确定固定条件为：戊二醛浓度为5%,载体处理温度为室温（25℃）,处理时间为5h,m（胃蛋白酶）：m（氨基树脂）为1：25,pH为3.0,固定时间为12h。此条件下固定化的胃蛋白酶活力为30U/g,酶的活力回收率为60%。与非固定化相比最适水解温度由50℃升高到60℃,最适pH值由2.0升高到4.0,游离酶米氏常数3.08g/L,固定化酶米氏常数1.2g/L,固定化胃蛋白酶的储存半衰期约为25天。对珠蛋白的操作半衰期为9天。     

氨基树脂的废水处理

论述了各类涂料用氨基树脂废水的来源,分析了各种废水的组分,以及针对各种氨基树脂废水的情况,提供了一些解决方法,最后对氨基树脂的清洁生产提出了一些展望。     

氨基改性丙烯酸乳液处理剂的研究

用烷基化氨基树脂对现有的丙烯酸乳济型无纺布处理剂进行改性,在不影响原性能的基础上,具有优良的耐水性和增硬效果。本文叙述了烷基化氨基树脂的合成配方和操作工艺,讨论了烷基化氨基树脂与丙烯酸类聚合物的反应机理,使用配比以及交联反应温度对性能的影响。     

一种新型胺基树脂的制备

以乙酰化聚苯乙烯微球为原料经Mannich反应制备了一种新型胺基树脂,该树脂可替代氯甲基树脂制备的阴离子交换树脂及酶固定化胺基载体,因此,避免了氯甲基树脂生产中使用氯甲醚等致癌物质及多取代、二次交联等副反应的问题. 讨论了反应温度和时间、物料比、加料方式、介质中的水量等因素的影响. 最佳反应条件为无水乙醇介质,胺:醛:盐酸:乙酰基(摩尔比) 10:10:3.3:1,反应温度100℃,反应时间12 h,制备的胺基树脂氮含量为13.7 mmol/g. 机理研究显示乙酰基发生 多取代反应.     

开发系列氨基漆产品及配方设计

讨论了氨基树脂的合成与固化机理,并对不同用途的氨基漆配方设计进行了研究。从制备氨基树脂原料的性能推导出如何根据用户的需求选择较为合适的配方。     

酶催化剂的固定化研究及其在催化反应中的应用

酶催化剂具有高效性,多样性,底物专一性,区域选择性、化学选择性、对映选择性以及反应条件温和的特点。而酶的固定化后除了保持原有的特点外,易与反应物和产物分离,可回收重复使用,降低生产成本。本文对酶催化剂的固定化方法以及在有机催化反应中的应用作了部分简述。并对固定化方法进行了比较和评价。     

利用酰胺活化聚乙烯醇作为载体固定漆酶的研究

交联聚乙烯醇经羧基化、酰胺化制成一种活性固定化酶的载体,并在温和的条件下对漆酶进行了固定。比较不同的固定化时间,pH值,温度和离子强度对固定化效果的影响,发现在12 h,40℃,pH值为3.2所制得的固定化酶的活力最高;在0.05~1.0 mol/L的范围内,随着作为固定化反应介质的缓冲溶液浓度的增加,所制得的固定化酶的活力有所下降。还发现固定化酶较游离酶的酶催化反应最适pH值有所升高。     

水可稀释性醇酸树脂及其氨基烘漆的制备

通过在醇酸树脂合成过程中,引入含磺酸盐基的5-(钠代磺基)间苯二甲酸(5-SSIPA)单体,制备了水可稀释性醇酸树脂。用该醇酸树脂,配以水性氨基树脂,制备了性能优异的水性氨基醇酸烘漆,并对影响树脂和漆膜性能的因素进行了探讨。     

海藻酸钙凝胶固定葡萄糖氧化酶的研究

利用海藻酸钙凝胶颗粒固定葡萄糖氧化酶(GOD).确定了固定化条件,并考察了温度、pH值、储存时间对固定化酶和游离酶酶活力的影响,测定了酶活回收率.确定的固定化较优条件为:CaCl2 5.0%(质量体积比),海藻酸钠3.0%(质量体积比);固定化酶的最适催化温度为31℃、最适pH值为6.3,较游离酶分别提高7℃和0.6;固定化酶的平均酶活回收率为61.69%.此外,酶的储存稳定性能也有所提高,可重复多次使用.