急性放射性肺损伤肺组织CD36表达及意义

采用健康雄性Wistar大鼠,6 MV X射线单次全胸野照射15 Gy,于照后不同时间HE和Masson染色观察大鼠肺组织的病理改变,免疫组化方法分析凝血酶敏感蛋白-1受体CD36在肺组织中的表达,以探讨放射性肺损伤大鼠肺组织病理和CD36在不同时间段的表达和意义。结果表明,HE和Masson染色提示照射后的1周肺泡腔有炎性细胞渗出,继之间质水肿,4及8周出现肺泡腔变小甚至结构破坏,局部实变,肺间质出现胶原纤维;CD36免疫组化标记显示:照射组在照后的第1、2、4、8周时间段CD36表达均明显强于对照组(p<0.01)。以上结果说明CD36参与了放射性肺损伤的发生发展过程,阻抑其表达可能对放射肺损伤有防治作用。     

Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的表达及意义

探讨转化生长因子β(Transforming growth factorβ TGFβ)的Smad信号转导通路中信号蛋白Smad3、Smad4和Smad7在大鼠放射性肺纤维化中的变化及其意义。采用25Gy^60Coγ射线全胸照射二级雄性Wistar大鼠60只,建立大鼠放射性肺纤维化模型,分别于照射后1天、1周、1月及3月活杀后取材并进行肺泡巨噬细胞的分离培养,采用免疫组化SP法检测信号蛋白Smad3、Smad4和Smad7的表达变化。正常肺组织中较大血管内皮细胞及平滑肌细胞胞浆中存在Smad3、Smad4、Smad7蛋白弱阳性表达,Smad4在支气管上皮细胞胞浆也有阳性表达;照射后l天,上述3种蛋白在部分肺泡上皮细胞和部分巨噬细胞胞浆出现阳性表达;照射后l周及1月,Smad4蛋白在肺间质内纤维／成纤维细胞胞浆也出现阳性表达;照射后3m,Smad4蛋白在部分肺泡上皮、巨噬细胞、成纤维／纤维细胞胞核出现阳性表达。信号蛋白Smad3、Smad4、Smad7主要表达于放射性肺纤维化发生发展相关的靶细胞和效应细胞,包括部分肺泡上皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞、支气管上皮细胞,并呈一定时相性动态分布,证明TGFβ的Smad信号通路在放射性肺纤维化中起调节作用。     

钙结合蛋白S100A8在放射性肺纤维化早期的表达及意义

本研究结合体内外实验,探讨了钙结合蛋白S100A8在放射性肺纤维化早期的表达及意义.20Gy6oCoγ射线全胸照射大鼠,建立大鼠放射性肺纤维化模型,分别于照射后1周、2周及4周活杀后取肺,采用免疫组化方法检测S100A8蛋白水平的变化;采用RT-PCR方法检测S100A8及与其形成复合物的S100A9 mRNA水平的变化.对于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用T-PCR方法检测该细胞受γ射线与脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)处理后S100A8 mRNA水平的变化.照射后4周,S100A8蛋白在大鼠肺部巨噬细胞胞浆增强表达,S100A8和S100A9 mRNA在大鼠肺部也增强表达.结果表明,RAW264.7细胞中,γ射线与LPS能够协同作用增强该细胞S100A8 mRNA的表达.S100A8在放射性肺纤维化早期于巨噬细胞表达增强,发挥其趋化活性,参与炎症发生,进而在放射性肺纤维化形成过程中发挥作用.     

吸入一氧化氮对放射性肺纤维化中细胞因子及丝裂原物质变化的影响

观察了吸入NO对放射性肺纤维化中细胞因子及丝裂原物质表达变化的影响 ,以期对NO防治肺纤维化的可能机理进行探讨。6 0 Coγ射线照射Wistar大鼠建立放射性间质肺炎模型 ,分别在照射前 1d (B和C组 )以及照射后一个月 (D和E组 )开始吸入NO ,NO吸入浓度分别为2 0 μg·g- 1(B和D组 )和 1.0× 10 - 5μg·g- 1(C和E组 )。分别于照射后 1d、1周、1个月、3个月和 6个月取材应用免疫组化、原位杂交等方法检测TGFβ、ET - 1mRNA及其蛋白和TNFα、AII蛋白表达情况。结果表明 ,照射后大鼠肺脏TGFβ、ET - 1mRNA及其蛋白和TNFα、AII蛋白表达明显增强 ,照射前开始吸入NO组与正常大鼠相比前述各指标表达增强 ,但低于其它组。表明TGFβ、TNFα、ET - 1和AII均参与了放射性肺纤维化的病理发展过程 ,吸入NO可抑制上述因子的过度表达 ,从而减轻炎症 ,延缓和抑制肺纤维化的发展     

CpG-ODN减轻放射性肺纤维化的作用及机理

使用单次全肺照射至吸收剂量15 Gy的C57BL/6雌性小鼠建立放射性肺纤维化模型,连续20周观察照射小鼠的基本情况和大体肺组织变化,制作肺组织Masson染色切片,并进行Ashcroft纤维化评分和纤维化面积定量,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞因子TGF-β1的表达水平,免疫组化法检测肺组织内TGF-β1、TβR、磷酸化Smad 2/3和Smad 7蛋白的表达。实验结果显示,照射后给予CpG-ODN处理,能使小鼠肺组织损伤及纤维化程度减轻,Ashcroft评级降低2分,纤维化面积减少约11%,促纤维化细胞因子TGF-β1表达水平下降近1/2,肺组织内的TGF-β1、TβR和磷酸化Smad 2/3蛋白的表达皆出现不同程度降低,Smad 7蛋白的表达升高。这些结果提示CpG-ODN能通过降低促纤维化细胞因子TGF-β1的表达水平抑制TGF-β1/Smad依赖性纤维化信号通路,从而减轻放射性肺纤维。     

TGF-β1在照射后肺损伤早期重建中的作用研究

探讨TGF-β1在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用.用酶标记免疫吸附测定法(Enzyme-labeled immunosorbent assay,ELISA)检测照射后不同时期(1、2和4周)大鼠血清中TGF-β1的水平变化;用甲基噻唑基四唑比色法(Methyl thiazolyl tetrazolium colourimetry,MTT)检测照射后4周大鼠血清对人肺成纤维细胞(Human lung fibroblast,HLF)的促增殖作用;用ELISA检测HLF经大鼠血清刺激后合成分泌MMP-9(Matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和Ⅳ型胶原的作用.照射后不同时间提取的大鼠血清中TGF-β1水平从2至4周逐渐增加;照射后大鼠血清能促进HLF增殖,10%血清浓度的培养液促细胞增殖的作用最强;受照后大鼠血清不但能促进Fb增生,而且能显著促进HLF合成释放Ⅳ型胶原和MMP-9.放射性肺损伤早期肺组织TGF-β1表达增加,进而促进肺成纤维细胞增生、合成和释放Ⅳ型胶原和MMP-9,参与早期肺损伤的组织重建过程.     

X射线全身照射对成年小鼠睾丸Smad4表达的影响

探讨转化生长因子-β超家族细胞内信号转导分子Smad4在X射线全身照射后小鼠睾丸中表达变化及其意义。采用不同辐射剂量0．1 Gy、0．5 Gy、1．0 Gy、1．5 Gy和2．0 Gy对成年BALB／c小鼠进行全身照射,于照射后16h、1周、2周、3周、4周分别取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测Smad4的表达及变化,并通过图像分析技术对实验结果进行统汁学分析。正常小鼠睾丸Smad4的阳性表达主要集中在间质细胞,支持细胞有少量表达,生精细胞呈阴性反应。照射后各时间点Smad4在间质细胞的表达明显减少;而Sertoli细胞的表达随剂量增加和时间延长均无明显变化。照射后16h 2．0 Gy组,Smad4在生精小管的减数分裂前生精细胞内出现少许表达,从第2周起,1．0 Gy和1．5 Gy组生精细胞内也出现少量表达;第3周,各照射剂量组Smad4在减数分裂前精原细胞和精母细胞内呈强阳性反应,持续至第4周。统计学分析,随辐射剂量增大,观察时间延长,Smad4在减数分裂前生精细胞内的表达量逐渐增加。Smad4在小鼠睾丸不同剂量全身辐射后不同时间点表达及分布的变化,表明Smad4及其介导的TGF-β／Smad信号转导通路参与了小鼠皋丸辐射损伤及损伤修复过程。     

超重环境下微波辐射对大鼠肝细胞超微结构的影响及林蛙油营养液的保护作用

为了解超重环境下微波辐射对大鼠肝组织超微结构的影响及林蛙油营养液的保护作用,采用离心机模拟6G超重环境,微波照射(微波源统一由大功率微波雷达发射机改装而成的微波发射机所发射,200mW/cm2,照射5min),用以长白山特产林蛙油为主要成分制成的林蛙油营养液于不同时间给予大鼠,分别观察各组(A组为空白对照,B组为林蛙油营养液,C组为超重+辐射,D组为超重+辐射+林蛙油营养液,E组为林蛙油营养液+超重+辐射,F组为林蛙油营养液+超重+辐射+林蛙油营养液)大鼠肝的超微结构变化,检测大鼠血清己糖激酶活性。结果表明,各组大鼠肝脏超微结构的损伤从轻到重的排列是依次为F、B、A、D≌E、C;A、B和F组大鼠血清己糖激酶活性高于C、D和E组(p0.05),A、B、F组之间,C、D、E组之间无显著差异(p0.05)。说明林蛙油营养液对在超重和微波辐射环境下的大鼠肝脏有一定的保护作用,林蛙油营养液使用时间越长,作用越明显。     

氚水单次注入妊娠大鼠对其仔鼠神经系统机能和体重发育的影响

以脑电图、游泳机能和体重为指标,观察了氚水单次注入妊娠大鼠后对其仔鼠神经系统机能及体重发育的影响。实验是在15只雌性大鼠及其所产的120只仔鼠分 A、B、C 三组进行的。A 组大鼠于妊娠第1d(胚胎期),B 组大鼠于妊娠第13d(胎儿期)经腹腔注入氚水,使动物体水氚放射性浓度达到1.85MBq/ml(50μCi/ml)。A、B 两组仔鼠在子宫内受氚水照射的吸收剂量分别为0.59±0.01和0.51±0.01Gy,C 组为对照组。结果表明,A、B 两组仔鼠第18,32和36天龄基础 EEG 与对照组相比无明显改变,但32和36天龄仔鼠 EEG 对节律光刺激同步化反应和对声刺激的阻抑反应皆受到阻碍,A 组尤为明显。A、B 两组仔鼠第8和18天龄时游泳机能明显受阻,两组受阻程度相同。第5、8和18天龄时两组仔鼠体重发育不良的发生率皆有所增加,B 组更为明显。     

凝溶胶蛋白在C57BL／6小鼠急性放射肺损伤中的表达

为研究小鼠辐射诱导肺损伤后凝溶胶蛋白（Gelsolin,GSN）在血浆和肺组织中的表达,分别采用4Gy和20Gy剂量的X射线对C57BL／6小鼠进行全身及胸部单次照射。且在照射后取不同时间点ELISAKit检测小鼠血浆型Gelsolin（Plasma GSN,pGSN）蛋白含量和Westernblot法检测小鼠肺组织胞浆型Gelsolin（Cytoplasmic GSN,cGSN）蛋白含量。同时,检测20GyX射线胸部照射后不同时间点小鼠右肺肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中的细胞总数和总蛋白的含量。结果表明,全身照射组小鼠在照射后24h时,pGSN水平降低,而胸部照射组pGSN水平在24—48h持续降低,下降速度慢于全身照射组,之后两组pGSN均逐渐上升。在照射后24h时小鼠肺组织cGSN含量低于正常水平,照射后48h时则高于正常水平,48-96h持续下降。但在照射后96h时全身照射组cGSN含量恢复到正常,胸部照射组仍高于正常水平。小鼠胸部照射后在24h时,右肺BALF中细胞总数和总蛋白浓度显著高于正常水平,约达正常值的16倍,24—96h持续下降,与肺组织cGSN含量变化存在一定程度的负相关。推测GSN可能促进急性放射肺损伤的修复。     

电离辐射对大鼠脑组织中稀醇化酶、S-100蛋白表达的影响

观察了超大剂量6MeV电子线照射后大鼠脑组织NSE、S-100蛋白的动态变化.对成熟的(Sprague-dawle,SD)大鼠用6MeV电子线进行10Gy、20Gy和30Gy全脑单次照射,应用免疫组织化学法测定大鼠脑损伤后不同时间、不同剂量脑组织中稀醇化酶(Neuro-specific enolase,NSE)、S-100蛋白的相对含量.60只大鼠随机分为对照组和实验组,用6MeV电子线对实验组大鼠进行20Gy全脑单次垂直照射,分别于照射后1d、7 d、14 d和30 d处死大鼠,取其脑组织,用免疫组织化学法测定NSE、S-100蛋白的相对含量,并与对照组进行比较.在上述时间点,脑内海马区S-100和NSE表达有时间规律,照射后7 dS-100蛋白的表达和照射后24h NSE的表达组间存在一定差别.与对照组相比,实验组大鼠脑组织中NSE表达显著下降(p＜0.05),S-100表达显著升高(p＜0.05).在照射后7 d,上述各指标变化的幅度为30Gy组＞20Gy组＞10Gy组.电离辐射可诱导脑组织中S-100蛋白的表达,同时下调NSE在神经元中的表达,脑组织中S-100和NSE表达水平的变化可作为辐射诱导的急性脑损伤的敏感指标.     

姜黄素对辐射诱导的胰腺外分泌细胞损伤的保护作用

将大鼠胰腺外分泌细胞(AR42J)分为实验组与对照组,两组细胞根据姜黄素处理水平又分为A/B/C/D/E 5个姜黄素处理组,分别经0、2、4、8、16 μM姜黄素处理,实验组予以一次性大剂量X射线照射(6 Gy),模拟急性辐射损伤事件。照后收集细胞蛋白行免疫印迹试验(Wensten-blot)检测凋亡相关蛋白PARP、BCL-2,应激及能量代谢相关因子HIF-1ɑ、LDHA、PDH表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,荧光酶标仪检测细胞ATP及ROS生成情况。清洁级大鼠24只随机分为对照组、单纯加药组、单纯照射组、照射+加药组,予以12 Gy X射线照射或假照射,射后24小时处死并解剖取出胰腺组织,Wensten-blot检查能量代谢相关蛋白表达情况,以探讨姜黄素在胰腺外分泌细胞辐射损伤中的作用及其机制。结果表明,与对照组相比,单纯照射组细胞在受照24 h后,凋亡蛋白PARP表达升高,BCL-2蛋白下调,线粒体膜电位下降表明线粒体受损。辐照促使缺氧诱导因子HIF-1α表达上调,介导糖酵解的关键因子LDHA表达增强,PDH表达下调。细胞增殖活力下降,ROS生成增多,沉默HIF-1表达在一定程度上抑制了辐照诱导的这种能量代谢转变。经姜黄素预处理,纠正了HIF-1α及LDHA的表达上调,部分恢复PDH表达,有效清除氧自由基,并且对细胞的增殖能力及ATP生成具有正向作用。动物实验显示辐照诱导HIF-1α表达加强,调控能量代谢相关蛋白表达发生改变,LDHA表达增强,PDH表达下调;经姜黄素预处理,纠正了HIF-1α上调所介导的能量代谢相关蛋白的表达变化,趋势与细胞实验相符。以上结果说明,胰腺外分泌细胞在电离辐射损伤下,通过上调HIF-1α表达,促使能量代谢发生转变,糖酵解途径加强,而经线粒体的有氧氧化受到抑制。姜黄素通过下调HIF-1α,纠正了辐射诱导的细胞能量代谢紊乱,并有效清除氧自由基,保护线粒体,从而发挥其对胰腺外分泌细胞的辐射损伤的保护作用。     

电离辐射对小鼠胸腺细胞p16、CyclinD1、CDK4表达的影响

采用流式细胞术 (FCM)检测了不同剂量X射线全身照射后 ,昆明种小鼠胸腺细胞p16、CyclinD1、CDK4蛋白表达的时程变化和量效关系。结果表明 ,2GyX射线照射后 8h小鼠胸腺细胞p16表达明显增高 ,2 4h达到峰值 ,持续至照射后 4 8h ,72h降至正常水平 ;CDK4表达水平在照射后8h明显降低 ,12h降至最低 ,照射后 4 8h恢复近正常水平 ;周期蛋白CyclinD1表达轻度下调。不同剂量 (0 .5 - 4Gy)照射后p16蛋白表达随着剂量的增加而增加 ,2Gy组与假照射组相比显著增多 (p<0 .0 1) ;CDK4蛋白表达在 2Gy照射后明显低于假照射组 (p <0 .0 1) ;CyclinD1表达在 0 .5 - 2Gy照射后可见下降趋势。结果提示 :p16 /CyclinD1/CDK4 /pRb通路在电离辐射诱导胸腺细胞G1期阻滞中可能起着十分重要的作用。     

Vam3对小鼠体外胸腺细胞的辐射防护效应

探讨白藜芦醇二聚体(Amurensis H,Vam3)对辐射致小鼠胸腺细胞损伤的保护作用。体外无菌分离小鼠胸腺细胞,实验分为6组:对照组(Control)、白藜芦醇组(Resveratrol,Res)、Vam3组、照射组(Irradiation,IR)、照射+Res组和照射+Vam3组。照射+Res组和照射+Vam3组于照射前30 min给予Vam3和Res孵育,对照组、Res组、Vam3组以及照射组加等量RPMI-1640培养基或对应药物处理,除对照组、Res组和Vam3组外,其余3组均给予4 Gy ~(137)Cs γ-射线单次照射。照射后分别用生物发光法检测小鼠胸腺细胞活力,活性氧探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,荧光抗体标记检测γ-H2AX表达水平以及FITC-Annexin V和PI双染标记法检测细胞早期凋亡率。结果显示,与对照组比较,照射组细胞活力显著下降,细胞内ROS和γ-H2AX水平明显升高,同时细胞早期凋亡数目增加;而照射+Vam3组与照射+Res组比较显示,Vam3在提升细胞活力,降低细胞内ROS和γ-H2AX水平以及抑制细胞凋亡方面的作用比Res更加明显。研究结果表明,Vam3对辐射引起的小鼠胸腺细胞急性损伤有一定保护作用,且保护作用优于白藜芦醇。     

钙结合蛋白S100A8在γ射线损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用

为探索钙结合蛋白S100A8在γ射线对造血免疫系统损伤中的作用,构建S100A8真核表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,研究S100A8在γ射线诱导RAW264.7细胞周期紊乱和胞内活性氧改变中的作用。运用RT-PCR和细胞荧光免疫方法鉴定增强表达S100A8的RAW264.7稳定细胞克隆。流式技术检测10Gyγ射线照射6h后细胞周期及H2O2刺激后胞内活性氧的变化。结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,增强表达S100A8细胞克隆G0/G1期细胞比例增高,S期细胞减少,不发生G2/M阻滞;并且H2O2作用后细胞中活性氧水平低于转染空白质粒的细胞。因此,增强表达S100A8的RAW264.7细胞与转染空白质粒细胞相比对辐射更具抗性,其可能原因是与增强表达的S100A8分子具有抗氧化功能有关。     

微波辐照诱发Wistar大鼠外周血淋巴细胞亚群变化

采用微波辐照雄性清洁级Wistar大鼠,观察其对大鼠外周血淋巴细胞亚群的影响。实验结果显示：与对照组相比,10mW／cm2组、30mW／cm2组照射后第7天,5mW／cm2组、10mW／cm2组、30mW/cm2组照射后第14天,CD3＋降低显著;10mW/cm2组照射后第14天,CD4＋降低显著。各辐照组照射后第1、...     

羧酸富勒烯C3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经^1H-NMR,^13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V／PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg／L时,清除效率高达93％左右。对1．12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。     

盐诱导激酶2对电离辐射诱导的自噬与凋亡的影响

为探索盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2, SIK2)对电离辐射引起的自噬与凋亡的影响,以期为肿瘤的放射治疗提供新的思路,以慢病毒颗粒LV-GFP和LV-SIK2体外转染HeLa细胞,48 h后用荧光显微镜观察转染是否成功,RT-PCR和Western blot检测转染细胞SIK2的干扰效果。通过Western blot检测SIK2低表达对8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射下细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ 和P62表达的影响来观察自噬的变化;利用流式细胞术来检测SIK2低表达对8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射下细胞凋亡的影响。结果表明,SIK2低表达的稳转细胞系被成功构建;8 Gy γ射线照射后,SIK2低表达细胞系LC3-Ⅱ表达下调,P62表达上调,表明自噬被减弱;流式细胞术检测发现SIK2低表达细胞系在照后12 h FITC⁺PI^-细胞比例就显著增加,表明SIK2低表达增加了细胞凋亡。因此,SIK2低表达会导致电离辐射引起的细胞自噬大大减弱,凋亡显著增加。     

电磁脉冲辐射对小鼠睾丸Smads表达的影响

探讨转化生长因子-β（Transforming growth factor-β，TGF-β）超家族细胞内信号转导分子Smads在电磁脉冲辐射后成年小鼠睾丸中的表达变化及其意义。采用场强为400kV／m的辐射场对成年Balb／c小鼠进行全身照射，于照射后1、7、14、21、28d分别取小鼠睾丸组织制备标本，免疫组织化学ABC法检测Smad4、Smad1和Smad5的表达及变化，并通过图像分析系统以及统计学软件对实验结果进行统计学分析。结果显示辐射组小鼠Smad4、Smad1和Smad5在睾丸中的表达部位发生了细胞和时期特异性的变化，表达强度也发生了显著变化。结果提示Smad4、Smad1和Smad5及其介导的信号转导通路在小鼠睾丸辐射损伤及其修复过程中可能发挥了重要作用。     

电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G_1期阻滞及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL 1细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记 ,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明 ,2 0Gy和 4 0Gy照射后 12 72h ,G1期EL 4细胞百分数显著高于假照射组 ( p <0 0 5- p <0 0 0 1)。 4 0Gy照射后EL 4细胞 p53蛋白表达从照射后 2h开始明显增高 ,持续至照射后2 4h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1) ;p2 1蛋白表达在照射后 2h开始明显增高 ,持续至照射后 4 8h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1) ;GADD4 5蛋白表达在照射后 2h开始明显增高 ,持续至照射后 4 8h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1) ;MDM 2蛋白表达在照射后 4h开始明显增高 ,持续至照射后 2 4h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1)。结果提示 ,中等剂量X射线照射可诱导EL 4细胞G1期阻滞。p53、p2 1和GADD4 5蛋白表达在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中起重要作用