三聚氰胺人工抗原及多克隆抗体的制备

采用戊二醛法将三聚氰胺(Melamine,MEL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(MEL-BSA).三聚氰胺甲醛树脂法对三聚氰胺衍生化,再偶联到鸡卵清蛋白(OVA)合成包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(MEL-OVA).对纯化后的合成抗原进行紫外扫描、红外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定.免疫新西兰大白兔,检测抗体的生成.结果表明,免疫兔血清的效价达到了1∶20 000,从而为进一步建立三聚氰胺的免疫检测方法奠定了基础.     

Pd(Ⅱ)与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究

采用荧光光谱法研究了Pd(Ⅱ)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.使用高斯多峰拟合法对Pd(Ⅱ)-BSA体系荧光光谱的各荧光成分进行了解析.结果表明,BSA的荧光主要来源于色氨酸(Trp)残基,并推测Pd(Ⅱ)与BSA结合作用的位置在第212位Trp残基上.研究了Pd(Ⅱ)与BSA相互作用的荧光猝灭光谱,通过紫外吸收光谱的变化和猝灭速率常数Kq的比较对Pd(Ⅱ)与BSA相互作用的荧光猝灭机理进行了判别.结果表明,Pd(Ⅱ)对BSA的荧光猝灭属于静态猝灭.     

分子量为3000的壳聚糖与牛血清白蛋白相互作用的研究

在模拟人体生理条件下,利用荧光光谱、圆二色谱、紫外-可见吸收光谱法和三维荧光法研究了3 000分子量的壳聚糖(CS)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,CS对BSA的紫外吸收光谱具有增强作用,而对荧光光谱具有较强的荧光猝灭作用且峰位明显蓝移8~10 nm。用Stern-Volmer方程分别对实验数据进行分析,得出结论,CS对BSA的荧光猝灭作用是属于静态荧光猝灭;与其反应生成了新的复合物,发生了分子内的非辐射能量转移;并求得相互作用过程的结合常数KA(Kb)和热力学参数(ΔG、ΔH、ΔS),确定了它们之间的主要作用力是静电作用力,但疏水作用也不可忽略。圆二色谱、同步荧光光谱和三维荧光光谱法表明了CS对牛血清白蛋白的构象和所处的微环境发生了一定程度的变化。     

含硅羟基磷灰石粉体的合成及其与蛋白质的相互作用研究

将硅掺入羟基磷灰石(HA)晶格中能有效地提高HA的生物相容性.采用湿法合成了含硅羟基磷灰石微粉(Si-HA),用X射线荧光光谱(XRF)、X射线衍射(XRD)、红外光谱(FTIR)、扫描电镜(TEM)和荧光光谱等对Si-HA的晶相、结构、化学组成、形貌及其与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用进行了表征和分析.结果表明:Si元素溶入磷灰石晶格中,使HA晶胞参数和结构发生变化,随着Si含量的增加,HA中-OH和PO3-4的吸收峰呈减弱趋势,表明SiO4-4可能部分取代了PO3-4.Si-HA与BSA作用后的PO3-4吸收峰发生变化,在Si-HA图谱中出现了蛋白质的酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带吸收峰,随着Si-HA与BSA作用时间由2h～3d的变化,BSA溶液酰胺I带位置出现蓝移,半峰宽减小且峰型变得尖锐,酰胺II带则向低频区移动.Si-HA与BSA作用3d后,开始在1139处出现PO3-4的吸收峰.荧光光谱显示:加入相同质量的HA和Si-HA后蛋白质内源荧光强度较纯BSA溶液下降,随着Si-HA中Si质量分数的增加BSA荧光强度下降幅度增大,发射峰也出现红移,且Si-HA与BSA作用较纯HA与BSA的作用强,说明Si-HA使蛋白质二级结构发生改变,Si-HA中的Ca、PO3-4、SiO4-4与BSA之间发生了相互溶解、吸附和键合等作用,证明了Si-HA与生命物质蛋白质之间具有较高的反应性能,对Si-HA的生物活性及其与BSA相互作用的机理进行了详尽的阐述.     

离子液体双水相中PB与BSA的作用研究

运用荧光光谱,研究了在离子液体双水相体系中吡罗红B(PB)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,在离子液相中PB对BSA产生了荧光猝灭作用,且属于静态猝灭过程。计算得到在298K和308K下的结合常数分别为5.80×105Lomol-1和4.42×105Lomol-1,结合位点数分别为1.18和1.17。热力学参数表明PB与BSA之间的相互作用为静电作用力。用同步荧光法探讨了PB对BSA构象的影响。     

牛血清白蛋白辅助合成Ag2Se-Se复合纳米粒子

本文利用牛血清白蛋白(BSA)作为表面活性剂,在水相中成功合成了具有复合结构的Ag2Se-Se纳米粒子。该复合纳米粒子具有较好的分散性。整个实验过程均在室温下进行,合成方法简单、可控且重复性好。结合傅立叶变换红外光谱(FTIR)和紫外吸收光谱(UV-vis)的结果,分析了纳米粒子复合结构的形成过程;采用高分辨透射电子显微镜(HRTEM)结合选区电子衍射(SAED)和能谱分析(EDS),对制备的复合粒子形貌和成份组成进行了分析测定;利用X射线粉末衍射(XRD)分析了复合粒子的晶体结构和相组成。采用BSA修饰制备得到的纳米粒子生物相容性好,可以在生物医学领域中得到广泛应用。     

荧光光谱及分子模拟研究β-榄香烯与牛血清白蛋白的相互作用

在模拟生理p H条件(p H=7.40)下,用荧光光谱和分子模拟法研究β-榄香烯与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。在308 K和318 K温度下,激发波长(λex)为280 nm,测定BSA在340 nm的内源性荧光强度随着β-榄香烯浓度增加的变化,用分子对接方法研究β-榄香烯与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。β-榄香烯与牛血清白蛋白的反应机制为静态猝灭,作用力类型为疏水作用。分子模拟结果表明:β-榄香烯与牛血清白蛋白亚结构域A结合,二者之间有疏水作用和静电作用,且以疏水作用为主,这与荧光光谱结果一致。β-榄香烯与BSA具有较强的相互作用,以血清白蛋白为载体,β-榄香烯作为药物可通过血液循环到达病变部位,发挥药效。     

壳聚糖与牛血清白蛋白分子印迹聚合物的制备与表征

利用壳聚糖为功能单体,在模板分子牛血清白蛋白存在下,采用滴加成球法制备出对牛血清白蛋白(BSA)具有特异识别性能的分子印迹聚合物,并用原子力显微镜(AFM)及红外光谱进行了表征。实验结果表明,利用壳聚糖制备的牛血清白蛋白分子印迹聚合物对牛血清白蛋白具有特异识别功能,显示出明显的印迹效果。这种特异分子印迹介质的制备,为分离提纯特种结合蛋白提供了一种优良方法。     

N-组氨酸壳聚糖多孔支架对牛血清白蛋白的吸附性能

通过改变组氨酸/壳聚糖的配比及壳聚糖的相对分子质量合成了6种N-组氨酸壳聚糖(NHCS)多孔支架,考察其在模拟体液中吸附牛血清白蛋白(BSA)的能力,用紫外-可见分光光度法测定NHCS不同温度的吸附等温线和不同起始浓度下的吸附动力学曲线等。结果表明,在37.0℃、BSA的初始浓度为2.5 mg/mL时,壳聚糖的相对分子质量为50×103、组氨酸/壳聚糖的摩尔比为3∶1制得的50kD-NHCS-3多孔支架吸附BSA效果最好,吸附容量(Qe)为820.90 mg/g;吸附遵循Langmuir吸附等温式和准一级动力学方程,且是一个自发、熵增、吸热的物理吸附过程。50kD-NHCS-3多孔支架可以重复使用,有望用于BSA或其他蛋白的分离纯化。     

采用荧光光谱法研究DDAF与BSA的相互作用

研究新型反离子季铵盐DDAF与BSA的相互作用。通过单因素法,选出适宜的作用时间、Na+浓度和pH值;并采用荧光光谱法和三维荧光光谱法研究DDAF与BSA的相互作用机制。作用时间15 min、钠离子浓度为0.04 mol/L、pH值为待测液的初始pH值为适宜的实验条件;不同温度(290.15,296.15,303.15,310.15 K)下二者的双分子猝灭常数(Kq)分别为7.03×10~(10),8.53×10~(10),1.09×10~(11),1.12×10~(11) L/(mol·s);结合位点数(n)分别为1.17、0.84、0.97和1.02;?H和?S均大于0;三维荧光光谱显示,加入DDAF后,BSA的荧光峰发生蓝移,且荧光强度下降16.63%。DDAF和BSA为混合猝灭;二者以1∶1结合;二者间的作用力是疏水作用力;DDAF使BSA氨基酸残基周围的疏水环境增强。     

苏丹红Ⅰ号多克隆抗体的制备与特异性鉴定

采用琥珀酸酐法,分别以BSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原并通过SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和苏丹红I号的复合物.将合成的免疫抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体,经辛酸纯化,间接ELISA法测得有高效价血清抗体;进一步采用琼脂双扩散试验和免疫金试纸法鉴定出血清中含有苏丹红Ⅰ号特异性抗体.     

携载蛋白质的氧化钛纳米管表面成骨细胞行为

通过阳极氧化技术,在光滑钛表面制备一层管径约100nm的纳米管,并选用小牛血清白蛋白（BSA）和纤维连接蛋白（FN）以及两种蛋白的混合溶液（BF）进行蛋白吸附试验。将吸附蛋白后的试样进行细胞培养,所用细胞为MC-3T3E1成骨细胞株,结果表明,较光滑钛吸附蛋白前后的纳米管试样显示出更好的成骨活性,同时,吸附单组分纤维连接蛋白的纳米管试样能更好地促进成骨细胞的黏附和生长,具有更高的生物活性。     

壳聚糖包覆二氧化硅纳米粒及其作为蛋白载体的研究

通过壳聚糖在二氧化硅纳米粒表面的沉积制备了壳聚糖包覆的二氧硅（CS@SiO2）。采用BSA作为模型蛋白,研究了CS@SiO2作为蛋白载体的可能性。结果表明,CS@SiO2可有效吸附BSA且可控释放被吸附的BSA。     

Study on protein conformation and adsorption behaviors in nanodiamond particle-protein complexes

In the present research, the conformation of bovine serum albumin (BSA) in the nanodiamond particle (ND)-BSA complex was studied by Fourier transform infrared spectroscopy, fluorescence spectroscopy, UV-vis spectroscopy, and circular dichroism spectroscopy. The spectroscopic study revealed that most BSA structural features could be preserved in the complex though the BSA underwent conformational changes in the complex due to ND-BSA interaction. In addition, BSA adsorption isotherms and zeta-potential measurements were employed to investigate the pH dependence of the ND-BSA interaction. The changes in surface charge of the ND-BSA complex with pH variations indicated that the binding of BSA to ND might lead to not only the adsorption of BSA onto the ND surface but also the partial breakup of ND aggregates into relatively small ND-BSA aggregates because of the strong binding force between ND and BSA. The results show that ND is an excellent platform for protein immobilization with high affinity and holds great potential to be used for biosensor applications.     

新型芳香刚性单体改性PET共聚酯的合成及表征

以对羟基苯甲酸甲酯和对苯二甲酰氯为原料,在1,1—2,2四氯乙烷中合成了含三个苯环的刚性第三单体（Thethird monomer,TM）;将所合成第三单体按照不同（0,0．5％,1％,2％,5％,以对苯二甲酸摩尔量为基准）加入聚合釜中,与对苯二甲酸（PTA）、乙二醇（EG）进行熔融共缩聚合成了改性PET聚合物;并用差热分析（DSC）、红外光谱（FTIR）,热台偏光显微镜（POM）等方法对其结构和性能进行了表征;研究发现,芳香刚性第三单体改性后的共聚酯冷结晶温度（Tc）和熔体结晶温度（Tm,c）下降,熔点（Tm）升高,结晶度增大,结晶性能有所改善。     

[Bmim]BF叔水相中苋菜红与牛血清白蛋白作用研究

在离子液体四氟硼酸1-丁基-3-甲基咪唑（[Bmim]BF4）和NaH2PO4形成的双水相体系中,研究了离子液相中食用色素苋菜红（AT）与牛血清白蛋白（BSA）复合物的光谱行为。实验了离子液体用量、盐的浓度、溶液酸度、反应时间及共存物质对体系测定的影响。结果表明,在pH6．0的条件下,苋菜红牛血清白蛋白（BSA）复合物的最大吸收波长在540nm处,比单纯AT红移15nm,复合物表观摩尔吸光系数为2．81x10^4L·mol^-1·cm^-1,用摩尔比法求得最大结合数为150。应用加入无机离子及不同类型表面活性剂方法,初步探讨了食用色素苋菜红与牛血清白蛋白之间的作用机理。     

负载BMP-2和BSA的丝素蛋白/聚左旋乳酸-己内酯三维纤维屏障膜的制备及性能

利用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的骨诱导作用和牛血清白蛋白(BSA)的稳定作用,结合同轴静电纺丝技术和共混静电纺丝技术,制备了三组纤维膜,包括同时携载BMP-2和BSA的丝素蛋白(SF)/聚左旋乳酸-己内酯(PLCL)同轴载药纤维膜(BMP-2-BSA@SF/PLCL,Mat A);同时携载BMP-2和BSA的SF/PLCL共混载药纤维膜(BMP-2-BSA-SF/PLCL,Mat B)和非载药SF/PLCL纤维膜(SF/PLCL,Mat C)。通过研究纤维膜的表观形态,得出三种纤维膜均呈均匀网状结构,其中Mat A组具有稳定的核层结构;理化性能研究证实三组纤维的接触角和力学性能依次增大;体外细胞实验和膜屏障实验表明,三组纤维膜均具有良好的生物相容性和屏障功能,且具有药物缓释作用的组纤Mat A维膜能够更加有效地刺激细胞生长和早期骨向分化。所制备的BMP-2-BSA@SF/PLCL能够满足引导性骨组织再生(GBR)生物膜的基本要求,是促进骨缺损修复的理想载体。     

MIL-88B（V）和MIL-101（V）的合成及其NH3_SCR反应催化性能研究

采用水热法合成出两种新型金属有机骨架化合物MIL-88B（V）和MIL-101（V）,通过模拟烟气分析研究其在NH3-scR反应中的催化性能,结果表明,与MIL-101m相比,酸性条件下合成的MIL-88Bm具有更高的结晶度,比表面积和孔体积分别为1332．2m2／g和0．136cmLg-1,280℃时的脱硝效率可以达到70％以上。     

色氨酸在自制牛血清白蛋白手性柱上的拆分

利用三氯聚氰活化的氨丙基硅胶与牛血清白蛋白反应,快速而经济地制得牛血清白蛋白手性固定相。在反相模式下,将该手性固定相用于色氨酸的拆分,系统探讨了流动相pH值、柱温、有机修饰剂的种类及含量等对手性拆分的影响。色氨酸在自制牛血清白蛋白手性柱上得到了理想的拆分,分离因子可达4.33。     

Nanogel surface coatings for improved single-molecule imaging substrates

Surfaces that resist protein adsorption are important for many bioanalytical applications. Bovine serum albumin (BSA) coatings and multi-arm poly(ethylene glycol) (PEG) coatings display low levels of non-specific protein adsorption and have enabled highly quantitative single-molecule (SM) protein studies. Recently, a method was developed for coating a glass with PEG–BSA nanogels, a promising hybrid of these two low-background coatings. We characterized the nanogel coating to determine its suitability for SM protein experiments. SM adsorption counting revealed that nanogel-coated surfaces exhibit lower protein adsorption than covalently coupled BSA surfaces and monolayers of multi-arm PEG, so this surface displays one of the lowest degrees of protein adsorption yet observed. Additionally, the nanogel coating was resistant to DNA adsorption, underscoring the utility of the coating across a variety of SM experiments. The nanogel coating was found to be compatible with surfactants, whereas the BSA coating was not. Finally, applying the coating to a real-world study, we found that single ligand molecules could be tethered to this surface and detected with high sensitivity and specificity by a digital immunoassay. These results suggest that PEG–BSA nanogel coatings will be highly useful for the SM analysis of proteins.