放射性核素凋亡显像检测细胞凋亡研究进展

放射性核素细胞凋亡显像具有直观、无创伤和实时在体观察细胞凋亡等特点,在脑及心肌细胞缺血再灌注损伤的观察、器官移植后排斥反应的检测、肿瘤放疗和化疗效果的评估和多巴胺能神经元早期凋亡的检测等方面具有较好的应用前景,但仍有许多问题有待于进一步探讨。     

γ射线诱导破骨细胞凋亡

参照上海医科大学放射医学研究所七室建立的破骨细胞培养方法,将分离的破骨细胞培养在玻片上,利用０．５、１、３、５Ｇｙ＾１３７Ｃｓγ射线照射破骨细胞,采用荧光染色方法观察辐射对破骨细胞形态的影响。结果表明：破骨地辐射敏感,较低剂量即可引起破骨细胞凋亡,其中３Ｇｙ为诱导破骨细胞凋亡的最佳反应剂量,此时破骨细胞凋亡比例最高,可作为凋亡基因研究模型,为进一步探讨辐射所致骨质疾病的机理、预防、治疗提供实验依据     

微量元素与癌细胞凋亡关系

在同步辐射3W1A新光束线上，用全反射荧光分析法（TXRF）进行了人体乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、宫颈癌细胞凋亡前后的研究，得到了它们的在凋亡前后不同元素的荧光谱。从它们的结果可以看到，凋亡前后的细胞某些微量元素有了变化，甚至明显变化。这是否可从改变人体微量元素入手去研究和治疗癌症呢？     

电离辐射诱发HL-60细胞凋亡及Bcl-2基因对细胞凋亡的影响

本实验采用＾６０Ｃｏγ射线（剂量分别为０、２、４、６、８、１０Ｇｙ）照射人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞,研究了辐射诱发的细胞凋亡,并对ＨＬ－６０细胞和转染的反义Ｂｃｌ－２基因的ＨＬ－６０细胞（ＨＬ－６０ａｓＢｃｌ－２）的凋亡情况进行了比较。结果表明,＾６０Ｃｏγ射线照射可抑制两种细胞的增殖,并可诱导细胞凋亡,细胞凋亡率与受照剂量呈正相关,随照后时间的延长细胞凋亡率也逐渐增加;比较照后不同时间的凋亡率     

细胞凋亡小分子PET显像剂的研究进展

细胞凋亡是细胞死亡的一种重要形式,细胞凋亡分子显像对于疾病的诊断和疗效评价具有重要的临床价值。分子影像学发展的关键技术之一是特异性分子探针的研究开发。正电子发射断层显像(PET)技术作为目前分子影像学发展最先进的技术,以及细胞凋亡PET显像剂的研发应用使活体内无创PET检测细胞凋亡成为现实,研发新型小分子PET探针将是该领域重要的发展方向。本文主要介绍细胞凋亡PET小分子探针及其最新研究应用进展。     

槲皮素促进电离辐射引起的衰老细胞发生凋亡

研究槲皮素对10 Gy的X射线及碳离子束辐照后衰老的人眼基底脉络膜黑色素瘤细胞系92-1凋亡发生及相关蛋白表达水平的影响。采用流式细胞术及衰老相关半乳糖苷酶检测试剂盒检测92-1细胞经10 Gy的X射线及碳离子束辐照后细胞凋亡及衰老情况。通过Cell counting kit-8(CCK8)法检测槲皮素对92-1细胞增殖活力的影响并结合细胞凋亡检测筛选槲皮素作用浓度。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同处理后92-1细胞的凋亡比例。采用蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的表达水平。结果表明,92-1细胞经10 Gy的X射线或碳离子束辐照后3 d,细胞出现明显的衰老表型,凋亡发生率较低。CCK8法结合细胞凋亡筛选出50μmol/L作为后续处理浓度。辐照后立即或3 d后给予槲皮素处理能诱导细胞发生明显的凋亡,且Cleaved caspase-3表达水平显著上调。因此,槲皮素可促使辐照(10 Gy)后衰老的92-1细胞发生凋亡。     

低聚壳聚糖对辐射损伤小鼠细胞凋亡的影响

从细胞凋亡角度探讨低聚壳聚糖提高辐射损伤动物存活率的机理。小鼠受到5 Gyγ射线照射后,检测骨髓淋巴细胞凋亡数、脾脏细胞凋亡相关基因和P53蛋白的变化。流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR技术检测凋亡基因,Western方法检测蛋白表达。与单纯照射组相比,低聚壳聚糖提高受照小鼠的存活率,降低骨髓淋巴细胞的凋亡细胞数量;下调凋亡相关基因Bax、caspas-3,上调Bc1-2,Bcl-2/Bax比值升高;抑制P53蛋白表达。低聚壳聚糖可能通过抑制P53蛋白表达,影响凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡细胞的产生,有效提高受照小鼠存活率。     

188Re诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

采用MTT法，光镜，电镜，流式细胞仪和免疫组化方法研究了^188Re诱导三种肿瘤细胞凋亡的形态学变化，剂量时间效应关系以及凋亡相关基因Bcl-2和Bax在其中的表达情况。结果表明：^188Re对三种肿瘤细胞有明显的杀伤效应，能效导其产生凋亡的形态学变化，并且随着浓度的增大和时间的延长，凋亡率增加，Bcl-24表达减弱，Bax表达增强，二者比值下降;细胞阻滞于G2／M期，三种肿瘤细胞对^188Re的敏感性由高到低依次为PC－3细胞，ER－75－30细胞，A549细胞。     

细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-AnnexinV的制备及其生物评价

合成了双功能螯合剂琥珀酰亚胺-6-肼基吡啶-3-甲酸(Annexin V。并将HYNIC成功地应用于Annexin V的偶连和标记中：每个Annexin V的蛋白分子能偶连2个HYNIC，标记率为98.8%，标记物的放化纯度在6 h后仍然保持95.1%；99Tcm-HYNIC-Annexin V在动物模型中能有效检测细胞凋亡并有望成为效检测肿瘤治疗效果的显像剂     

致死剂量辐射诱导小鼠骨髓细胞凋亡特征的研究

经＾６０Ｃｏ γ射线以不同剂量全射照射２１３只ＬＡＣＡ小鼠,于照射后４周内分批 杀,将骨髓标本分别进行Ｈ．Ｅ染色,半薄及超薄切片,并通过原位末端标记和ＤＮＡ交电泳观察其生化特性。结果表明：射后６ｈ,各一组小鼠骨髓造血细胞出现凋亡明显增多,且剂量赵大,凋亡细胞越多。凋亡的细胞形态上表现为染色质深度缩、边移,呈半月型,环状或不规则状,核碎片喜讯发小体形成,电泳下可见ＤＮＡ梯状图谱。在２．５～７．０Ｇ６     

新型凋亡显像剂99mTc-FM-2的制备及生物分布

用2-亚氨基噻吩盐酸盐(2-IT)修饰FM-2.用99mTc-GH转换络合标记法标记IT-FM-2,放化纯可达95%,且室温下可稳定8h以上.小鼠体内分布研究表明99mTc-FM2在体内主要通过肝、肾清除.正常心肌组织摄取率高、清除快.     

电离辐射对小鼠派伊氏板细胞凋亡的影响

采用原位末端标记(TUNEL)法研究不同剂量X射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡的时间效应及剂量效应关系.结果表明:2Gy全身照射后派伊氏板TUNEL阳性细胞数增加;0.05Gy、0.075Gy全身照射后派伊氏板TUNEL阳性细胞数减少.提示2Gy全身照射促进细胞凋亡,而低剂量电离辐射抑制细胞凋亡.     

微波辐射诱导HeLa细胞凋亡机制的初步研究

采用2.5、5、10、15和20 mW/cm2强度微波辐射HeLa细胞20 min,观察了不同强度微波辐射对HeLa细胞增殖、细胞周期的影响。结果表明,受微波辐射的细胞生长受到抑制,数量明显减少,细胞皱缩变形,体积缩小。随着微波辐射强度的增加,细胞增殖受到明显抑制,呈现剂量依赖性。5、10和20 mW/cm2微波辐射的HeLa细胞培养24 h后,G2/M期的比例分别为11.6%、14.5%和18.2%,与对照组相比有显著性差异(p<0.05),由此可见微波辐射可将细胞阻滞于G2/M期。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平下降,Bax和Caspase-3表达水平逐渐升高,证明其作用机制可能与Bcl-2表达水平下调,Bax和Caspase-3表达水平升高相关。     

硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射所致凋亡的影响

探讨硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤的保护作用。取新生大鼠神经干细胞进行培养,用免疫荧光法进行神经干细胞的鉴定后用含有不同浓度硫酸镁的培养基培养神经干细胞,选择出硫酸镁的合适浓度为0．00125g／mL。将神经干细胞分为空白对照组、实验对照组（照射）和实验组（照射＋硫酸镁）。分别用2和4Gy ^10Coγ射线对实验对照组和实验组进行照射,分别于照射后24、48和72h用流式细胞仪对各组神经干细胞凋亡率进行检测,同时采用透射电镜对神经干细胞凋亡形态进行观察。与空白对照组比较,实验对照组各时间点神经干细胞的凋亡率明显升高,（t（2Gy,72h）=30．60,t（4Gy,72h1=31．85,p〈0．05）,细胞呈现出明显的凋亡形态,并可见凋亡小体。与实验对照组比较,实验组各时间点神经干细胞的凋亡率明显降低,（t（Gy,72h）=9．08,t（4Gy,72h1p〈0．05）,且细胞形态损伤明显减轻。硫酸镁能降低电离辐射对神经干细胞的凋亡率,减轻电离辐射所致神经干细胞核损伤的形态。     

电离辐射诱导HeLaS_3细胞凋亡时程变化的影响

采用PI和Hoechst33342双染、流式细胞术 (FCM)和图像分析术 (ICM)检测了不同剂量电离辐射对HeLaS3 细胞凋亡的影响。结果表明 ,HeLaS3 细胞在分别受到 0 .5 - 4 .0GyX射线照射后 8h ,其细胞凋亡呈增高趋势 ,但无统计学意义。照射后 12h ,细胞凋亡显著增加 (p <0 .0 1) ,并达峰值。随后 ,细胞凋亡率迅速下降 ,4 8h ,又有所回升。且流式细胞术与图像分析术所得结果数据相近 ,趋势一致。     

小鼠脾淋巴细胞辐射死亡与凋亡之间的关系

探讨细胞凋亡在小鼠脾脏辐射损伤与重建中的作用及其机制,为急性放射病的防治提供依据.用原位末端标记、DNA电泳和免疫组化技术观察经2～8Gy不同剂量γ射线整体照射后,小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的动态变化过程和Bax、Bcl-2蛋白在其中的作用.结果表明,(1)照射后早期淋巴细胞凋亡率迅速增加,如6Gy照射后4h和1d凋亡率分别为对照值的4.9和9.7倍;凋亡率还随照射剂量的增加而迅速升高,照射后8h当照射剂量为2、4、6、8Gy时,凋亡率分别为对照值的3.7、5.4、6.2和8.3倍.(2)透射电镜观察表明,6Gyγ-线照射后,小鼠脾脏淋巴细胞出现早、中、晚期典型凋亡细胞的形态学特征.DNA凝胶电泳显示6Gy照射后4和6h,脾脏淋巴细胞出现特征的DNA梯形谱;末端标记法显示6Gy照射后4h凋亡率约为照前值的3.4倍.(3)照射后Bax、Bcl-2蛋白的异常表达证实两者在淋巴细胞凋亡的调控中起重要作用.细胞凋亡参与了小鼠脾脏辐射损伤与修复的全过程,Bax和Bcl-2蛋白对淋巴细胞凋亡的调控起重要作用.     

放射性Annexin V活体检测细胞凋亡的研究进展

概述了放射性Annexin V活体检测细胞凋亡的研究状况，介绍了这类显像剂在医学临床研究上的优越性，并对放射性标记Annexin V显像剂的研究方法和进展进行了评述。     

肺癌、宫颈癌细胞凋亡前后微量元素的变化

全反射荧光分析（TXRF）比常规荧光分析（XRF）具有更高的灵敏度。我们在北京正负电子对撞机同步辐射3W1A新光束线改建的同步辐射荧光站上（更换了新探测器及相应谱仪系统）。用TXRF对肺癌细胞和宫颈癌细胞进行了凋亡前后的研究,得到了这些细胞凋亡前后的荧光谱。从分析这些谱的结果我们可以看到,凋亡前后这些癌细胞中某些微量元素的含量有了变化,甚至是明显变化。从这些变化中我们可得到一些启发,如果能找到它们的变化规律是否可为治疗癌症做一点贡献呢？