转基因产品检测方法及应用

目前转基因产品检测方法分为两大类:蛋白质检测和DNA检测;蛋白质检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、试纸条检测和Western杂交;DNA检测方法有PCR(polymerase chain reaction)、 PCR-ELISA、Southern杂交等。该文对以上各种方法应用及特点作一概述。     

转基因食品及其检测技术的发展现状

概述了转基因食品的国内外发展现状 ,以及各国对转基因食品的不同管理模式。还着重介绍了转基因食品检测技术的基本方法、发展方向以及所面临的一些问题。     

转基因食品及其检测技术的发展现状

概述了转基因食品的国内外发展现状，以及各国对转基因食品的不同管理模式。还着重介绍了转基因食品检测技术的基本方法、发展方向以及所面临的一些问题。     

转基因油菜籽PCR检测技术研究

以转基因抗草甘膦油菜籽F4—27和转基因抗草丁膦油菜籽T—21为材料,通过使用特异性引物,对转基因油菜籽常见启动子、终止子、筛选标记基因和转入目的基因等多个外源转基因元件进行采用PCR检测,以期建立一套快速、准确、高效转基因油菜籽筛查鉴定技术。     

深加工转基因产品检测技术的研究进展

随着植物基因工程技术的快速发展,大量转基因作物及其加工食品进入商品化生产和销售,据国际权威机构统计,全球由转基因作物加工生产的转基因食品和食品成分达4000余种.虽然缺乏科学依据证明转基因产品对人类健康和环境的安全性,但其潜在风险仍引起世界各国政府极大关注,纷纷出台转基因产品的标签管理制度和出入境产品报告制度.     

转基因产品的PCR-ELISA液相杂交检测条件的研究

确定杂交液成分,选择探针浓度,将5’端标记生物素的PCR扩增产物与5’端标记地高辛的探针呈液相混合,在PCR管中按优化后的条件(92℃,5 min;55℃,5 min)进行液相杂交.杂交产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面,同时在含高浓度二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的杂交液中将非特异结合的探针解离,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测.PCR-ELISA液相杂交检测方法操作简便,特异性高,避免了繁琐的杂交程序和对人体有害的溴化乙锭,适用于转基因产品及其加工食品的快速检测.     

转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状

转基因大豆及其制品日益增多，已经直接或间接地成为人类消费的食品，进入人们的食物链。转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响越来越引起人们关注，阐述了转基因大豆及其制品的安全性，并对其检测现状进行了概述。     

实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 0倍     

多重实时荧光PCR快速检测转基因大豆及其加工产品

本研究运用多重实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因大豆及其深加工制品进行筛选检测。通过设计大豆内源基因植物凝集素(Lectin)和常用的外源基因花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止(nos)的特异性引物和探针,反应条件和反应体系的优化,特异性、重复性和灵敏性的实验比对分析等开发建立了多重荧光定量PCR检测技术。以10%Roundup Ready转基因大豆标准品为材料,建立并优化转基因大豆的定量检测体系,对大豆中的转基因成分进行定量分析。结果表明:该方法重复性好,检测特异性强,扩增效率在90%～110%,标准曲线相关系数R2≥0. 98,确定了最低检测限为每20μL反应2. 4个拷贝。结论:由于使用多重实时荧光PCR技术,可实现一管多检的实际需要,降低试剂成本,缩短检测时间,为大豆及其深加工产品转基因成分的快速检测提供了有效方法,为促进农产品和食品进出口提供技术保障。     

用PCR检测熟食中的转基因Bt-玉米

用8种已知并已发表的PCR（聚合酶链反应）引物组进行比较，用以测定熟食中转基因Bt“极产”玉米“event 176”的zein(玉米醇溶蛋白－－泽注）基因，crylA(b)基因，bla基因、bar基因和35S cauliflower mosaic virus promoter(花椰菜马赛克病毒启动区－－译注）。以转基因爆玉米花、粟粉粥、酥饼作样品。粟粥粉和酥饼用含有不同百分率（100％，1％，0．1％，w/w)的转基因玉米粉制作。在不同熟时间从样吕提取的DNA，其平均DNA碎片长度逐渐下降，但仍能通过PCR扩增。试验的几种引物组，以Cyr 03/04表现最好，可以检测出仅含0．1％Bt-玉米DNA的熟食中的转基因DNA。     

PCR法定性检测食用油脂中转基因成分

食用油脂（尤其是精炼油）被认为几乎不含DNA和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA含量极低、破坏严重的特点，成功地建立了食用油脂中DNA提取方法，并从中检测出玉米、大豆内源基因（IVR、Lectin）以及外源抗虫基因[CryIA(b)]和抗除草剂基因（EPSPS），为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。     

PCR Detection of Genetically Modified Organisms: A Review

There are two common approaches for the detection of Genetically Modified Organisms (GMOs): DNA based methods, mainly founded on the Polymerase Chain Reaction (PCR), which detect genetically modified DNA sequences, and protein based methods, relying on immune assays (e. g. Enzyme‐Linked Immunosorbent Assay, ELISA). The latter detect and measure levels of proteins expressed by transgenic genes. Official standard tests, yet to come, will be based on these two methodologies. DNA based tests are now preferred for their sensitivity and their capability to detect a wider range of constructs. Protein‐based immune assay tests, although less sensitive, are quicker and require less lab skills. Collaborative study results put in evidence that PCR tests are generally well suited for detecting the presence of GMOs on a qualitative basis (yes/no). Difficulties arise when GMOs have to be quantitatively identified in food ingredients. Real‐Time, or kinetic PCR, points out quantification and interpretation limits when quantification has to be done on a very small total DNA amount. An essential requirement for PCR‐based techniques is the knowledge of the GMO‐specific DNA sequence target. Many labs find it difficult to keep up with the rate at which life science companies are creating new GMOs and the finding of adequate reference standards to be used as positive analytical controls.     

转基因玉米的七重PCR鉴定方法

以玉米内源基因IVR、外源抗除草剂基因(BAR、PAT)、抗虫基因Cry1Ab、筛选基因NPTII、CaMV35S启动子和NOS终止子为检测的目的片段,分别设计了7对引物,通过研究较佳引物终浓度配比和退火温度,建立了玉米转基因成分七重PCR检测体系。结果表明,建立的七重PCR体系用于同时检测内源基因和转基因成分是可行的,检测方法效率高、稳定性好。     

9种大豆制品中转基因成分定性PCR检测

本研究从豆粕、豆粉、豆腐等9种大豆产品中提取到高质量的DNA,在对内标准基因Lectin进行扩增的基础上,设计相应的特异性引物,建立了稳定的定性PCR反应体系,对35S启动子基因、外源目的基因Cp4-epsps基因进行了扩增,发现豆粕、豆奶粉、豆腐、豆皮、豆豉中含有转基因成分,而其它产品中未发现转基因成分存在.     

ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究

以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。     

四重实时荧光PCR快速检测转基因玉米及其加工产品

本研究运用四重实时荧光聚合酶链式反应技术（polymerase chain reaction,PCR）对转基因玉米及其深加工制品进行筛选检测。选定花椰菜花叶病毒35S启动子（pCaMV35S）、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子（tNOS）以及根癌农杆菌CP4蛋白基因和5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因（EPSPS）为外源基因,选定编码玉米淀粉合成酶异构体zSTSII-2 (zSSIIb) 基因作为玉米物种的内参照基因。设计和合成靶标基因特异性引物和多重荧光探针,经特异性、重复性、灵敏性和适用性等方法学验证建立了四重实时荧光PCR检测方法。结果表明该方法检测特异性强,重复性好,扩增效率在90%~110%,标准曲线相关系数R2≥0.99,最低检测限为每20 μL反应13个拷贝,最低定量限为每20 μL反应1.3个拷贝,其检测结果与SN/T 1204-2016标准方法检测结果一致,由于四个目标基因可以在一个反应管中进行扩增反应,且含有内源基因和外源基因,可降低试剂成本,简化操作程序,缩短检测时间,为玉米及其深加工产品转基因成分的快速检测提供参考。     

利用PCR方法检测转基因大豆加工食品中的修饰基因

市场上的转基因产品以及深加工产品越来越多,其安全性引起全世界的极大争论,很多国家的检验检疫机构相继开展了转基因产品的检测工作。本文以转基因大豆类食品为材料,以聚合酶链式反应(PCR)方法为基础,选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术,针对抗除草剂Round up Ready (RR)大豆的插入基因进行PCR检测,建立适合转基因大豆类食品的检测方法．该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符．     

多重PCR 检测转基因水稻的转基因成分

以水稻内源基因SPS、外源抗虫基因Cry1Ab、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、外源抗虫基因Btc、报告基因GUS、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象,设计7对引物,通过优化PCR扩增体系中不同引物浓度的配比及退火温度,建立水稻转基因成分的七重PCR检测体系。结果表明：建立的七重PCR体系能有效检测出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的转基因成分,检测过程简便、特异性好。