浓香型成品大曲中三类水解酶的分离纯化研究

采用盐析、离子交换、分子筛筛选等方法分离、纯化浓香型大曲中糖化淀粉酶、液化淀粉酶和酸性蛋白酶,研究了3种酶的相关酶学特性。结果表明,成品浓香型大曲中,糖化淀粉酶活力均值为441.0 U/g干曲,液化淀粉酶活力为5.68 U/g干曲,酸性蛋白酶活力均值达51.2 U/g干曲。糖化淀粉酶纯化倍数平均达2.44倍,酶活回收率为2.51%,表观分子量2.5×104,液化淀粉酶的纯化倍数平均达3.24倍,酶活回收率28.28%。酸性蛋白酶纯化倍数平均达4.05倍,酶活回收率可达35.62%。     

浓香型大曲水解酶系及测定方法的研究

对浓香型大曲的分解酶体系中的液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶和木聚糖酶测定方法作了全面的研究。研究发现，（1）大曲不同部位的液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶含量不同，它们主要存在于曲外层。（2）pH值对大曲水解酶活力有影响。发现液化型淀粉酶、糖化型淀粉酶受pH影响较大，而对酸性蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶活力影响较小。（3）测定了不同等级曲的水解酶活力。     

大曲中放线菌和青霉产酶初探

以从大曲和糟醅中分离出的放线菌和青霉为研究对象,用淀粉培养基和纤维素刚果红培养基对两种菌分别进行初筛,根据透明圈和菌落直径之比大小筛选出产淀粉和纤维素酶的菌株,进一步通过固体发酵培养并测定淀粉酶和纤维素酶活,筛选出三株分解淀粉和纤维素的菌株命名为放线菌F1,青霉Q4,青霉Q5,其中青霉Q4的两种酶活力都较高,α-淀粉酶活达到1160u/g干曲,内切纤维素酶活达到301.83u/g干曲,滤纸酶活达到48.26u/g干曲。     

白云边高温大曲中嗜热功能菌的分离筛选

采用稀释平板法从高温大曲中分离筛选得到10株耐高温细菌,经平板初筛和摇瓶复筛,获得1株淀粉酶活力较高的菌株BGG4,其酶活为99.0U/g,以及1株酸性蛋白酶活力较高的菌株BGG1,其酶活为:1270.1U/g。     

大豆乳清中β-淀粉酶的超滤提取技术研究

大豆乳清废水中含有丰富的β-淀粉酶。通过超滤技术对乳清废水中的β-淀粉酶进行浓缩回收,研究了膜截留分子量（MWCO）、操作温度、料液pH对超滤效果的影响。结果表明,选用MWCO3ku的膜,在跨膜压差2bar、温度（25±3）℃、pH7的操作条件下,膜通量由初始的44L/（m2·h）衰减至23L/（m2·h）,平均通量达到35L/（m2·h）;β-淀粉酶的酶活力可达到101U/mL,料液的浓缩倍数为10倍,酶活浓缩倍数约为9倍,总酶活的回收率为92%,浓缩液较高的β-淀粉酶酶活力为下一阶段的分离纯化奠定了基础,为大豆深加工废水综合利用提供了依据。      

多菌种制曲在原池浇淋酱油制曲工艺中的应用研究

采用原池浇淋工艺,添加糖化增香曲(HQ)、曲精(QJ)与米曲霉沪酿3.042进行混合制曲,以沪酿3.042米曲霉、曲精分别单独制曲进行对照实验,对制曲过程中中性蛋白酶、酸性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶及理化指标的变化进行了研究。结果表明,曲精和糖化增香曲混合制曲,成曲的酸性蛋白酶活力比曲精单独制曲提高42.6%,但是多菌株组合混合制曲较单菌株制曲,成曲的中性蛋白酶酶活力没有增加,淀粉酶酶活力均不高,未检测到纤维素酶活。     

白曲霉Asp-amy1固体发酵生产酸性淀粉酶的初步研究

利用白曲霉菌株Asp-amy1进行固体发酵生产酸性淀粉酶,对白曲霉固体发酵条件进行了优化,初步确定菌株产酶的优化培养基为:7.5%的玉米粉,1.5%的蛋白胨,发酵曲含水量为50%,发酵起始pH5.5.菌株的最佳接种量为40%(干基计),发酵时间由72 h缩短到48 h,菌体生长迅速,产酶能力强,酶活达1000 U/g干曲.薄层层析生成的液化产物,主要以G2-G7为主,淀粉液化后都生成了小分子的糊精和寡糖类;产物薄层分析可初步确定所产酶为液化型酶.     

米曲制备过程中酶活性的变化及制备工艺研究初报

以东北大米为原料、以清酒用种曲为菌株，研究了东北大米米曲制备过程中酶活性的变化及制备工艺。分别使用丸福种曲和沙加办吟酿用种曲进行制曲，分析了东北大米米曲的制备过程中的酶活力变化，确定了出曲时间，完善了生产工艺。使用3种商品种曲进行制曲，其中曲的品质测定结果为：接种丸福种曲，制成的米曲的糖化酶活力为404u／g，α-淀粉酶的活力为324u／g，酸性蛋白酶活力为385u／g；接种山田锦驯养种曲，制成米曲的糖化酶活力为414u／g，α-淀粉酶的活力325u／g，酸性蛋白酶活力为748u／g；接种ぴかみ吟酿用种曲，制成的米曲的糖化酶活力为409u／g，α-淀粉酶的活力为328u／g，酸性蛋白酶活力为376u／g。     

麦曲中淀粉酶活力测定方法探讨

麦曲中淀粉酶活力一般指糖化力和液化力,它是白酒出酒率高低的重要指标。目前,各大曲酒厂多用测定麦曲中糖化力和液化力数值,为考核衡量麦曲质量和制曲车间奖金制度的依据。在测定麦曲不同淀粉酶活力时根据现有测定方法是,用脱脂棉或纱布进行过滤,但成熟的麦曲中含淀粉约50％左右,在制作曲浸泡液中同时淀粉也随着浸出,通过滤层,混合在过滤液中,使测定糖化力和液化力时,底物淀粉浓度失去标准,造成测定值与定义不符。     

豆酱种曲培养过程中米曲霉Y29与3.042产酶特性比较

将米曲霉Y29菌株和沪酿3.042菌株在豆酱制种曲过程中产生的蛋白酶和淀粉酶的活性进行了比较,结果表明:米曲霉Y29菌株的酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力的峰值分别比米曲霉沪酿3.042菌株高了45.55%,15.13%,9.86%,而α-淀粉酶和糖化酶活力二者无显著差异;并且两菌株蛋白酶和淀粉酶酶活高峰出现的时间也一致。     

扳倒井酒用微生物的分离鉴定及功能性、抗逆性研究

利用梯度稀释法和划线纯化法,对扳倒井大曲、酒醅及窖泥中的微生物进行分离纯化,共得到112株菌种,包括61株细菌、32株霉菌和19株酵母菌。经过形态特征观察和分子生物学鉴定后,对其进行冻干管制作,并保藏至扳倒井微生物菌种资源库。分别对112株菌种的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活力进行测定,筛选出高酶活菌株;同时对112株菌种进行耐高温和耐酸性能筛选,筛选出具有抗逆性能的菌株。     

制曲莫片面追求高温

高温大曲能使酒气浓郁,形成酱香,后味悠长,但其有利有弊,不能片面追求。制曲温度直接支配着曲坯上菌的生长与菌群的变化及酶的生成。高温大曲在品温上升的同时,酸度及酸性蛋白酶亦随品温上升而增长,淀粉酶随品温升高而下降。高温曲的不足之处是随制曲温度升高,导致成品曲淀粉酶低,酸度及酸性蛋白酶升高,而酵母菌严重不足,影响出酒率及质量,故制曲不宜一味追求高温。     

酱香大曲中高产蛋白酶功能细菌的筛选及鉴定

通过对酱香型大曲中的细菌进行分离纯化培养,获得一株高产蛋白酶的菌株FBKL1.0199,然后采用菌株形态学观察、生理生化实验和分子生物学方法,鉴定其为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。实验条件下该菌株所产中性蛋白酶高达3 925.80 U/g,酸性蛋白酶活力达139.27 U/g,为提高酱香型白酒品质研究奠定了基础。     

含水量对黑曲霉ZM-8大曲酶活影响的研究

黑曲霉ZM-8大曲的质量对相关生产影响很大,黑曲霉ZM-8大曲的含水量直接影响大曲的生产结果。通过44%～51%含水量的培养试验,测定主要酶活,结果说明,考虑到各种酶系的特点,含水条件和酶活高峰的出现,大曲含水量控制在49%～50%,室温25℃,培养40h较适宜。其中:FPU酶可达105U/g、C1酶可达720U/g、CMC酶可达512U/g、β-葡萄糖苷酶可达1250U/g和淀粉酶可达30U/g的酶活,取得了较好的大曲制曲结果。     

一株芝麻香型白酒高温大曲细菌Q2B1的鉴定及其产酶活性研究

大曲细菌关系到白酒酿造的品质,其中酶的含量与活性与白酒的风味紧密关联。以芝麻香型白酒高温大曲优势细菌代表菌株Q2B1为研究对象,利用分子生物学技术对其分类学地位进行研究,并通过全基因组研究技术对产酶相关功能基因与代谢通路进行研究。结果表明,菌株Q2B1被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。利用传统的培养技术定性定量地检测其酶活力,发现菌株Q2B1可产淀粉酶和蛋白酶,活力分别为5.852 U/mL和26.770 U/mL;其产酶相关功能基因组长度为3 475 602 bp,包括蛋白酶编码基因以及淀粉酶编码基因,在基因水平上初步揭示了Q2B1菌株合成蛋白酶和淀粉酶的分子机理,为进一步合理开发白酒大曲微生物奠定理论基础,为提高白酒品质提供科学依据。     

酱香型白酒核心产区大曲的酶系分析

本研究以茅台镇酱香型白酒核心产区大曲及从中分离的霉菌为研究材料,分析茅台镇酱香白酒5个酒厂酿造大曲的理化指标、水解酶活及其霉菌水解酶组成及酶活,以进一步解析酱香大曲霉菌与大曲功能的关系。结果显示,酱香型大曲间糖化力86.91~535.06 mg/(g·h)差异较大,其它理化指标无显著差异,且5种大曲中都能检测到多种水解酶酶活,但液化酶、糖化酶、纤维素酶、脂肪酶、植酸酶差异较大,可能与大曲中的霉菌种类有关。此外,分析从大曲中分离霉菌产酶活性,发现分离霉菌能产多种酶,且霉菌产糖化酶酶活(0~1724.56 U/g)和中性蛋白酶酶活(0~2671.00 U/g)差异较大。曲霉主要产糖化酶、蛋白酶、果胶酶等,毛霉主要产糖化酶和蛋白酶,根霉主要产糖化酶,青霉主要产脂肪酶和果胶酶,说明霉菌对大曲中酶系的形成有重要作用。     

酱香型白酒发酵过程中异戊醇的控制研究

在单因素试验研究基础,对影响酱香型白酒发酵主要杂油醇成分异戊醇的酵母添加量、糖化酶添加量、蛋白酶添加量、曲粮比例进行了优化研究,结果组合A2B1C2D2条件下(即酵母添用量加量2%,糖化酶用量2×103U/g,蛋白酶添加量20 U/g,曲粮比例1:1。),异戊醇的产量为0.36×10-1g/L,相对于未添加酵母降低89.80%,表明此优化条件对降低酱香型白酒发酵异戊醇含量效果明显,几个影响因素中,酵母添加量影响显著。     

高温大曲中产耐热性蛋白酶芽孢杆菌的筛选和鉴定

从高温大曲样品中通过分离纯化,在牛奶琼脂平板上初筛得到产耐热性蛋白酶的菌株,然后液体发酵培养测定蛋白酶酶活挑选出产酶较强的菌株A1。在经过菌株形态特征、生化鉴定、16SrDNA分子生物学鉴定为芽孢杆菌属苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。选择三个主要影响因子葡萄糖、酵母浸出粉和pH,运用响应面法优化发酵培养基,最佳产酶培养基为pH为8.4,葡萄糖添加量为1.092%,酵母浸出粉添加量为0.902%,最佳酶活力为142.81u/mL。测定蛋白酶酶作用的最适温度是61℃,且在55～70℃之间有较高的酶活力,60℃相对酶活为97.63%。