蒙古国传统发酵乳中部分乳杆菌16S rRNA-RFLP的分类

采用16S rRNA-RFLP技术对分离自蒙古国乌兰巴图周边地区酸马奶中部分乳杆菌进行分类和鉴定。结合HaeIII,AluⅠ和HinfⅠ三种限制性内切酶RFLP的分析,将26株乳杆菌鉴定为Lactobacillus helveticus(18),actobacillus plantarum(7)和Lactobacillus casei(1)。在此基础上采用了16S rRNA基因序列分析的方法对本研究的26株乳杆菌进行验证,实验结果与16S rRNA-RFLP鉴定结果相吻合,表明此方法是一种快速、准确用于大量乳杆菌分类和鉴定的方法。     

四川泡菜中植物乳杆菌的筛选与鉴定

该研究旨在从四川泡菜中筛选植物乳杆菌,为益生菌筛选提供来源。经MRS琼脂培养基筛选,采用革兰氏染色法,生化鉴定法,结合分子生物学方法,对筛选的菌株进行鉴定。VITEK 2棒状杆菌鉴定卡（CBC）共涉及到41个生化反应,能够鉴定到种属水平,该方法能够很好的筛选植物乳杆菌。经CBC卡鉴定,20个菌株中筛选到12个菌株,可鉴定为植物乳杆菌。这些菌株经16S rRNA PCR扩增测序后,在NCBI网站上进行同源性比对,确定为植物乳杆菌。由邻接法构建的系统进化树可知,该12个菌株与已知植物乳杆菌序列聚为一簇,6号菌株与Lactobacillus plantarum 3356聚为一支,亲缘关系更近;4号、5号、14号、15号、23号和38号菌株与Lactobacillus plantarum NCU116,Lactobacillus plantarum MBEL2169,Lactobacillus plantarum AN7等序列相似性极高,无遗传距离。综合所有的鉴定结果,这12个菌株都被鉴定为植物乳杆菌。CBC鉴定卡是初筛植物乳杆菌较好的方法。     

肠膜明串珠菌及其近缘种dnaA和rpoB基因的系统发育分析北大核心CSCD

比较16S r RNA基因、dna A、rpoB部分基因序列对Leuconostoc mesenteroides（Leu.mesenteroides）及其近缘种的分辨力,为肠膜明串珠菌提供快速准确的鉴定方法。以分离自自然发酵乳制品中的8株Leu.mesenteroides为研究对象,以其看家基因dnaA、rpoB部分基因序列作为分子标记,结合Gene Bank数据库中的近缘种及亚种的相应序列构建系统发育树,并与16S r RNA基因的系统发育树进行比较。研究发现,基于Leu.mesenteroides及其近缘种的dna A和rpo B部分基因序列构建的系统发育树的拓扑结构与16S r RNA基因基本一致,但分辨率高于16S r RNA基因;种间的dna A和rpo B部分基因序列相似性分别为81.7~84.8%和85.5、87.4%,而种间16S r RNA基因相似性为98.1%~99.5%。相较于16S r RNA基因,dna A和rpo B基因更容易鉴定肠膜明串珠菌及其近缘种,其中rpo B可明晰区分试验菌株与肠膜明串珠菌亚种间的系统发育关系,因此rpo B基因可作为16S r RNA基因的辅助工具用于Leu.mesenteroides及其近缘种的快速鉴定。     

植物乳杆菌P9对小鼠功能性便秘的作用及机制

目的：研究植物乳杆菌P9对小鼠功能性便秘的润肠通便作用及其对肠道菌群的影响。方法：将100只BALB/c雄性小鼠随机分成空白组、模型组、植物乳杆菌P9低剂量组(给予0.42 mg/(kg m_b·d)菌粉(活菌数2.0×1011 CFU/g,下同))、中剂量组(给予0.84 mg/(kg m_b·d)菌粉)、高剂量组(给予2.5 mg/(kg m_b·d)菌粉),每组20只小鼠。将相应剂量的菌粉用无菌去离子水配制成菌悬液,按照10 mL/(kg m_b·d)剂量灌胃15 d,空白组、模型组灌胃等量无菌去离子水。实验第16天,模型组、植物乳杆菌P9干预组以洛哌丁胺4 mg/(kg m_b·d)灌胃诱导小鼠功能性便秘,随机选取10只进行排便实验,检测小鼠首次排黑便时间、6 h排黑便量;剩余10只进行小肠运动实验,测定墨汁推进率,并采用16S rRNA高通量测序技术测定小鼠盲肠内容物菌群组成。排便实验结束后模型组、植物乳杆菌P9干预组剩余小鼠持续灌胃洛哌丁胺4 mg/(kg m_b     

川西高原牧区牦牛酸乳中的几株乳杆菌发酵特性及系统发育研究

通过感官评定和酸度测定,从川西高原自然发酵牦牛奶酸乳中分离的109 株乳酸菌中筛选出6 株发酵酸乳感官品质良好的乳杆菌,进一步研究这6 株乳杆菌的生长曲线、产酸特性、产黏特性、产乙醛特性,并采用16SrDNA 基因序列分析,初步研究其系统发育关系。结果表明：在42℃条件下,6 株乳杆菌在MRS 培养基中培养14h、在10% 的脱脂乳中培养8h 时,达到最高生长量;6 株乳杆菌发酵10% 脱脂乳凝乳时酸度都达到GB2746 -1999 的要求,凝乳黏度为1050～4900mPa·s,乙醛产量为15.11～26.64μg/mL。冷藏中菌株E1、E-5 产酸量小,后酸化能力弱。6 株乳杆菌单株凝乳冷藏中黏度在第5 天达最高,其中菌株E-1、E-5 的凝乳黏度变化小;菌株J-2、E-5 发酵乳冷藏乙醛含量在第3 天达到最高,其余菌株在第2 天达到最高。16S rDNA 基因序列的相似性分析表明,菌株4-7、E-1、E-5 之间的相似度达到99% 以上,这些菌株在系统发育树上与植物乳杆菌(L. plantarum)处于发育树的同一分支;菌株J-2 与副干酪乳杆菌(L.paracasei)处于发育树的同一分支,与代表菌株L.paracasei SM63 的相似度为97.6%;菌株4-1 和B-2 的相似度达到99%,与发酵乳杆菌(L.fermentum)处于发育树的同一分支。综合研究结果表明菌株E-1 和E-5 可用于开发酸乳发酵剂菌种。     

传统豆腐干中主要腐败菌的分离及其系统发育

以腐败的豆腐干为材料,应用纯培养手段和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析,对豆腐干的腐败菌进行了分离及其系统发育鉴定研究。实验结果表明,获得的腐败菌DFG01为假单胞菌属,与恶臭假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的同源性为99.7%;另外,腐败菌DFG02为芽孢杆菌属,与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)高达99.5%。因此,传统豆腐干中腐败菌主要为恶臭假单胞菌和枯草芽孢杆菌,在豆腐干生产制作过程中要加强这两种菌的污染控制。     

植物乳杆菌素研究进展

植物乳杆菌素是植物乳杆菌产生的一类具有抑菌活性的肽类，可以抑制许多革兰氏阳性菌。作者简述了细菌素的分类、植物乳杆菌素的抑菌范围和抑菌机制，并简要介绍了几种植物乳杆菌素的性质。尽管目前植物乳杆菌素还未被批准作为防腐剂在食品中使用，但植物乳杆菌已被广泛地应用到食品工业中，相信不久的将来植物乳杆菌素作为一类理想的天然食品防腐剂，应用前景将十分广阔。     

酸马奶中乳杆菌Lb.casei.Zhang和ZL12-1的16S rDNA基因序列及聚类分析

利用遗传学方法对分离自内蒙古锡林郭勒盟牧区采集的酸马奶样品中的乳杆菌Lb．casei．Zhang和ZL12-1的16S rDNA扩增与测序．并将结果与同属的乳杆菌作同源性分析，建立系统发育树，以求更准确地确定其归属，为益生菌的筛选奠定基础。结果表明，菌株Lb.casei.Zhang标准菌株Lb．casei ATCC334^T同源性为100％，菌株zLl2—1与标准Lb.gallinanum ATCC 33199^T的同源性为98％。结合系统发育树及16S rDNA的部分序列分析结果，将Lb.casei.Zhang判定为Lb．caseissubsp.casei.ZL12-1鉴定为Lb.gallinanum，这与传统分类方法所得鉴定结果一致。     

植物乳杆菌功能及其应用进展

植物乳杆菌（Lactobacillus plantaceus）分布广泛,属于乳杆菌属,革兰氏阳性菌,最适于在30～37℃生长,最适酸碱度为pH 6.5左右,该种全基因组长度介于2.91～3.70 Mb之间,GC碱基占44.2%～45.1%。尽管作为同一个种,但它不同菌株的活性以及功能均不同程度存在某种差异。植物乳杆菌具有消炎抑菌、降低人体胆固醇、改善免疫性能、降解亚硝酸盐、排除重金属和抗氧化等多个方面优点,不仅能产生对人体直接有益的作用,还可以消除诸多对人体不利的因素,可以广泛推广到食品加工以及农业生产中,为人类健康事业做出更加突出的贡献。     

葡萄酒中植物乳杆菌的鉴定及其耐受性分析

本论文对4株分离自甘肃、宁夏产区葡萄酒中的乳杆菌进行鉴定并通过调整改良MRS培养基分析植物乳杆菌对酒精浓度、pH和SO2浓度的耐受性.结果表明:16S rDNA鉴定得到3株植物乳杆菌,在单一因素影响下,3株菌在pH 3.0条件下有良好生长,在16％vol酒精浓度可生长,110mg/L SO2浓度下可生长.在综合因素影响...     

pheS基因序列分析在干酪乳杆菌群种水平鉴定中的应用

对干酪乳杆菌群(Lactobacillus casei group)内5个种和4个亚种的23个代表菌株的苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基基因(pheS)序列和18个16S rRNA基因序列进行系统发育学分析,探索pheS基因序列分析在干酪乳杆菌群种水平鉴定中应用的可行性。分析结果表明,pheS基因序列群内种间的差异率在6.8%～34%之间,种内最大差异率可达3%,其变异率远高于16S rRNA基因,可作为该群内种水平鉴定的重要手段。     

Molecular characterization of antimicrobial Lactobacillus isolates and evaluation of their probiotic characteristics in vitro for use in poultry

A total of 113 lactic acid bacteria (LAB) were isolated from crop, gizzard, intestine and ceca regions of broiler chicken. Thirteen Lactobacillus isolates were selected based on their ability to grow on acidic pH and inhibition of enteric bacterial pathogens. They were identified using 16S rRNA and recA gene sequencing and evaluated for probiotic properties in vitro. These isolates showed effective inhibition against enteric bacterial pathogens like Escherichia coli and fungal pathogens, such as Aspergillus niger, A. flavus, Penicillium expansum, P. roqueforti, Candida albicans and Eurotium species. Analysis of 16S rRNA and recA gene sequences revealed that isolates belonged to Lactobacillus plantarum. They exhibited tolerance to bile salts (0.4%), gastric and intestinal conditions with bile salt hydrolase activity, suggesting their ability to survive during gastrointestinal transit and exert their probiotic action on host organism. They showed cell surface hydrophobicity (39–58%), auto-aggregation (60–80%) and co-aggregation with enteric pathogens like E. coli (49–62%) and Listeria monocytogenes (26–38%). Thus, they could potentially be bactericidal to pathogens and prevent their colonization on intestinal epithelium. They are non-pathogenic (γ-hemolytic) and negative for mucin degradation. Among these isolates, L. plantarum VJI21 and VJC1 showed more adherence to HT-29 cells than the enteric pathogen E. coli and prevented pathogen adherence to intestinal cells. L. plantarum VJI21 and VJC1, having potent probiotic properties, are considered good candidates for further studies in vivo towards the development of probiotic feed supplement in the poultry industry.     

植物乳杆菌LY-78乳酸脱氢酶基因的生物信息学分析

目的:探究植物乳杆菌LY-78菌株全部5个乳酸脱氢酶基因及其编码蛋白质的结构和功能。方法:应用多种生物信息学软件对植物乳杆菌LY-78菌株的5个乳酸脱氢酶基因及氨基酸序列进行结构分析和功能预测。结果:植物乳杆菌LY-78中5个乳酸脱氢酶的核苷酸及氨基酸序列均具有较高的保守性,均为位于细胞质的热稳定性、非分泌、非跨膜蛋白,除了ldh L3基因,其余4个基因均具有各自高度保守的功能位点和结构域,均存在典型的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD~+)结合位点序列GXGXXG。结论:乳酸脱氢酶D1(D1-lactate dehydrogenase,D1-LDH)、D2-LDH、L1-LDH及L2-LDH均具有完整的功能位点和结构域,很可能具有真正的乳酸脱氢酶活性,L3-LDH由于缺失NAD~+结合结构域和功能位点,因而可能不具有乳酸脱氢酶活性,这些分析结果为今后植物乳杆菌乳酸脱氢酶基因改造和苯乳酸合成代谢机制研究提供了必要的理论基础。     

植物乳杆菌活的非可培养状态的初步研究

利用16S rDNA序列分析法测得实验室保藏的乳酸菌的16S rDNA序列,并与基因库中基因序列进行同源性比较,经鉴定此菌为植物乳杆菌。并研究了植物乳杆菌进入活的非可培养状态（Viable but Non-culturable,VBNC）的诱导条件和复苏条件。结果显示,在诱导条件为MRS液体培养基、pH5.5～6.2、温度-20℃和有氧环境时,植物乳杆菌在12d之后进入了VBNC状态;复苏条件为添加有6%吐温-80的MRS液体培养基和普通MRS液体培养基分别在48h和96h之内可以使VBNC的植物乳杆菌复苏。      

1 株水开菲尔粒中植物乳杆菌的鉴定及产细菌素基因分析

目的：对从水开菲尔粒中分离得到1 株能产生抑菌物质的菌株QF01进行菌种鉴定,并对其产细菌素进行实验、鉴定和基因序列分析。方法：通过牛津杯法测定抑菌能力,采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增16S rDNA和细菌素相关基因并测序,利用ProParam tool、TMHMM 2.0、InterProScan、SOPM和SWISS-MODEL在线软件对基因编码产物进行分析。结果：该菌株产的细菌素对大肠杆菌（Escherichia coli JM109）有明显的抑制作用,通过16S rDNA序列分析初步确定该菌株属于植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。该菌株含有plnD、plnEF、plnV、plnR四种基因,其中plnV基因编码产物有跨膜螺旋结构,其结构存在信号肽特征。此外,从三级结构的模型预测得到4?种基因的编码产物均存在α-螺旋、β-转角、伸展链和无规则卷曲。结论：从水开菲尔粒分离得到的L. plantarum QF01菌株,含有plnD、plnEF、plnV、plnR细菌素基因,对大肠杆菌有很好的抑制作用。     

香蕉植株上乳酸菌的分离鉴定、系统发育及抑菌特性分析

为分析香蕉（Musa nana Lour.）植株上乳酸菌的多样性,扩大植物源乳酸菌菌种库,并为今后的青贮饲料发酵业和食品发酵工业等提供植物源乳酸菌,本研究运用经典乳酸菌筛选法与分子生物学相结合方法从香蕉植株上分离纯化乳酸菌,并对其进行生理生化实验、生长速率测定实验和产酸速率测定实验;根据以上实验结果选出代表性菌株,对其进行测序、同源性分析和系统发育树的构建;利用其发酵产物对大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门菌（Salmonella）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）等食品中常见的致病菌进行抑菌实验。结果表明：从香蕉植株上6?个部位共筛出44?株乳酸菌疑似菌株,5?株代表性菌株中有3?株（WFr6-4、WSt6-4、WL7-3）为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,1?株（WFl5-3）为戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）,1 株（WR7-1）为酪黄肠球菌（Enterococcus casseliflavus）。代表菌株都能够明显抑制致病菌,其中WL7-3抑菌效果最好。由此可见,在香蕉植株上乳杆菌属为优势菌种,乳酸菌种类较为多样,而且抑菌效果较好。     

植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因在大肠杆菌中表达

构建乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因的重组质粒并表达。以植物乳杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,连接到表达载体pET-32a(+)上,构建的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,菌体总蛋白经SDS-PAGE鉴定显示重组质粒诱导表达产物有特异性蛋白条带。该表达产物经细菌亚硝酸盐还原酶试剂盒测定显示有明显的酶活性。实验结果为深入研究植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶提供有益的参考。