五种不同益生元对七种肠道有益菌及有害菌的体外作用

研究了不同种类低聚糖益生元及其对应单糖对肠道代表性菌群的影响规律。以五种不同益生元、3类益生元组合及其对应单糖作为碳源配制成益生元培养基,益生元的添加量为2%。将益生元培养基和不添加碳源的空白培养基作为试验组和对照组,对肠道代表性六种有益菌鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)和一种有害菌(阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae))进行体外培养。通过对比试验组和对照组菌株生长稳定期的吸光度(A),进而评价不同益生元对肠道菌群的影响规律。(1)低聚半乳糖、低聚甘露糖、水苏糖对多数肠道有益菌的增殖效果优于低聚木糖和菊粉,同时对有害菌阴沟肠杆菌的促生长效果不明显。(2)进一步试验六种单糖对肠道菌的影响规律,发现D-半乳糖、D-甘露糖和D-果糖...     

传统发酵牦牛酸乳中益生性乳酸菌的体外筛选

为获得具有潜在益生特性的乳酸菌,实验以抗人工胃液、胆盐中生长效率和细胞表面疏水性为筛选指标,对羊八井地区传统发酵牦牛酸乳中分离出的38株乳酸菌进行体外筛选。最终通过测定结果综合比较得出菌株编号为YBJ-3、YBJ-11、YBJ-15、YBJ-17、YBJ-30和YBJ-33乳酸菌的益生特性较好,其中4株乳酸菌抗人工胃液能力大于90%,在胆盐中良好生长。通过16S r DNA序列分析鉴定,菌株编号YBJ-3为屎肠球菌(Enterococcus faecium)、YBJ-11为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、YBJ-15为耐久肠球菌(Enterococcus durans)、YBJ-17为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、YBJ-30为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、YBJ-33为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。     

不同益生元对植物乳杆菌生长的影响

研究不同益生元对植物乳杆菌在不同培养条件下的促增殖作用。选用5株生理特性不同的植物乳杆菌为研究对象,利用Bioscreen检测它们的生长情况,进一步通过Baranyi模型拟合曲线,从而得到最大比生长速率和迟滞期。结果表明:在MRS培养基下,添加5种不同的益生元对植物乳杆菌无明显促增殖作用;在以益生元替代葡萄糖作为碳源的MRS培养基中,植物乳杆菌对不同的益生元具有选择偏好性,且具有菌株特异性;在模拟肠道体系下,与对照相比,益生元能明显促进所有植物乳杆菌的增长,其中低聚果糖与低聚半乳糖最优。实验结论显示,模拟肠道体系可以作为最精确和快速的益生元筛选体系。     

抗幽门螺旋杆菌乳酸菌的筛选与益生特性评价

目的:从发酵食品、乳制品和婴儿粪便中筛选具有拮抗幽门螺旋杆菌活性且益生特性良好的乳酸菌。方法:从175份样品中筛选获得39株具有良好遗传稳定性的疑似乳酸菌株,采用体外抑菌圈法和尿素酶活性试验筛选出能抑制幽门螺旋杆菌生长的9株菌,并对其中活性最强的菌株GQ1702和D1进行16S rDNA鉴定。然后,进一步评价其耐酸、耐胆盐、抗生素耐药性、抑菌性能、表面疏水性及自凝集性等益生特性。结果:筛选得到两株拮抗幽门螺旋杆菌的乳酸菌:瑞士乳杆菌GQ1702（Lactobacillus helveticus GQ1702）和植物乳杆菌D1（Lactobacillus plantarum D1）,其发酵产物的抗幽门螺旋杆菌活性分别相当于浓度为0.038 mg/mL和0.034 mg/mL甲硝唑的抑制率。在pH为3的环境中培养3 h后的存活率均大于70%,在含0.3%胆盐环境中培养3 h后存活率分别为0.47%和1.08%,疏水作用力分别为25.10%和11.79%,自凝集率在24 h后分别达到75.53%和68.61%,与幽门螺旋杆菌的交互凝集率在24 h分别达到61.18%和57.25%。对常见抗生素（氯霉素、青霉素、红霉素、氨苄青霉素和头孢唑林）不耐药,对4种肠道致病菌（金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门氏菌）均具有抑制作用。结论:本试验筛选到具有拮抗幽门螺旋杆菌能力的植物乳杆菌D1和瑞士乳杆菌GQ1702,可为功能性乳制品的开发及研究提供菌株。     

黏豆包发酵液中乳酸菌分离鉴定及其益生性能

从农家自然发酵黏豆包谷物发酵液中分离乳酸菌,对菌株进行鉴定,并对益生性能进行研究。利用梯度稀释法从黏豆包中筛选获得6 株乳酸菌,经形态学分析并结合16S rRNA 序列分析分别为棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、短杆菌（Levilactobacillus brevis）、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentans）、清酒乳杆菌（Latilactobacillus sakei）和曲氏乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。对菌株的益生性能评价结果表明：菌株HSDF3（曲氏乳杆菌）的抗逆性和耐酸性能较好,pH3.0 的环境中存活率为100%;耐盐测试中,菌株HSDF9（清酒乳杆菌）的耐盐效果最好,在盐含量10%的MRS 肉汤中仍可存活,活菌数可达8.93×106 CFU/mL;耐胆盐测试中,菌株HSDF12（棒状乳杆菌）存活率最高,在0.3%胆盐浓度的MRS 肉汤培养基中培养3 h 之后的存活率为7.171%;耐人工胃液测试中,经过3 h 的模拟胃液培养之后,菌株HSDF3（曲氏乳杆菌）的存活率最高,达到82.91%;耐人工肠液测试中,经过6 h 的模拟肠液培养之后,HSDF12（棒状乳杆菌）存活率最高,达到93.42%;抗生素敏感性试验中,菌株HSDF15（短杆菌）对四环素、羧苄西林、头孢氨苄、米诺环素、头孢唑啉、氨苄西林、头孢拉定等抗生素均敏感。     

新疆喀什长寿老人肠道益生菌的分离鉴定及生物学特性研究

从新疆喀什长寿老人肠道中分离筛选出具有益生功能的乳酸菌,并对其进行体外降甘油三酯能力试验。结果表明,分离获得的41株乳酸菌中有14株菌的甘油三酯降解率均高于15%,其中株菌A2-1、A1-2、A3-1、A4-6、A4-1在pH为3.0的人工胃液中培养3 h的存活率较高,分别为63.22%,60.01%,58.94%,56.14%,50.29%;同时这5菌株在胆盐浓度为1,3,5g/L的MRS培养基中存活率较高,其中存活率最高的菌株为A1-2,存活率分别为46.61%,42.65%,16.32%;经16SrDNA鉴定,A1-2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),A2-1、A3-1、A4-6为屎肠球菌(Enterococcus faecium),A4-1为干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。     

果蔬发酵乳酸菌的筛选、鉴定及发酵性能分析

采用MRS初筛培养基(pH 2.0)和复筛培养基(10%氯化钠、30%葡萄糖)从沂源山地苹果产区自然发酵苹果原浆样品中分离筛选出2株耐酸、耐盐、耐高糖乳酸菌,经生理生化及分子生物学鉴定分别为植物乳杆菌S3-10和干酪乳杆菌R10。通过测定菌体干质量、活菌数、pH值和酸度等指标对2株乳酸菌在MRS培养基和果蔬原浆中的发酵性能进行分析,发现2株菌具有生长繁殖旺盛、产酸速率快的特性,其中植物乳杆菌S3-10生长量和产酸量显著高于干酪乳杆菌R10。菌株S3-10和R10的果蔬发酵性能优异,在发酵果蔬汁、开发功能益生产品方面有广阔应用前景。     

发酵香肠中益生性乳杆菌的分离及筛选

利用PH2.5和1%胆盐的MRS液体培养基,对自然发酵香肠中耐低酸耐胆盐的乳杆菌进行富集,从中分离纯化得到184株乳杆菌。通过一级筛选:24h产酸、耐盐耐硝性、产粘液、产过氧化氢等实验,筛选出20株符合发酵香肠乳酸菌发酵剂基本要求的菌株。通过二级筛选:耐低酸能力、耐胆汁酸盐能力和抑菌能力,最终筛选出了性能优良乳杆菌3株,可作为益生型发酵剂用于发酵香肠生产。文中还对所获得菌株的相关发酵性能进行了测定。     

抗幽门螺杆菌乳酸菌的筛选

通过测定干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）的自凝聚、疏水性及抑菌实验来筛选粘附性高、对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）有强抑制作用的益生菌株,并通过干酪乳杆菌与幽门螺杆菌的交互凝集和对幽门螺杆菌尿素酶活性的抑制进一步探讨其抑菌机制。结果表明,在4株干酪乳杆菌中,菌株JY300-8的自凝聚百分比在24 h达到71.7%,比菌株JY、JY160-15、JY300-10分别高19.7%、28.8%、29.6%（P＜0.05）;疏水性百分比为72.3%,比菌株JY、JY160-15、JY300-10分别高4.1%、8.0%、7.5%（P＜0.05）。同时,菌株JY300-8在24 h时的共凝集百分比为64.4%,较菌株JY提高了5.3%;而且菌株JY300-8对幽门螺杆菌尿素酶活性的抑制率达到62.3%。结果表明,在4株干酪乳杆菌中,菌株JY300-8具有良好的益生性能,对胃癌的生物致病菌具有良好的抑制效果,可用于后续胃癌动物模型的研究和抗胃癌的益生菌制剂的开发。     

酢辣椒中益生乳酸菌的筛选及其功能特性

为从酢辣椒筛选出具有益生特性的菌株,开发辣椒益生菌产品,本实验从地方特色发酵食品酢辣椒中分离得到16 株乳酸菌,以产酸速度、耐人工胃液能力为指标进行初筛,通过生化实验和16S rDNA序列分析方法鉴定;并通过研究菌株对工艺逆境的耐受能力,表面疏水性和自聚合能力以及抑菌活性、抗氧化能力、降解亚硝盐能力和安全特性来评价乳酸菌的益生特性。结果表明：发酵乳杆菌17-1、发酵乳杆菌18-2和短乳杆菌L3-5能耐受0.4%苯酚、溶酶菌和热处理;具有较高的表面疏水性和自聚合能力;能产生具有广谱抑菌效果的细菌素来抑制病原菌的生长;菌株L3-5和17-1具有较高的抗氧化能力;3 株菌都具有胆盐水解酶活性和产γ-氨基丁酸能力,并且都属于安全性菌株。综上所述,传统酢辣椒是分离益生乳酸菌新的天然来源,从中分离得到的发酵乳杆菌17-1、发酵乳杆菌18-2和短乳杆菌L3-5可以作为潜在的益生性菌株。     

发酵酸菜来源乳酸菌的益生特性及其在发酵乳中的应用

通过pH值、胆盐耐受性实验从发酵酸菜中筛选性能优良的益生乳酸菌株,经16S rRNA序列分析鉴定得4 株植物乳杆菌A44、B51、B54、C53和2 株戊糖乳杆菌A16、B72。经疏水、黏附、自凝聚和溶血能力实验评价6 株乳酸菌的益生特性,其中植物乳杆菌A44对氯仿和二甲苯的疏水性均大于80%,对Caco-2细胞的黏附率为13.57%,放置5 h的自凝聚率超过60%,与其他菌株相比具有更好的益生特性且无溶血活性。因此选用植物乳杆菌A44进一步研究其在发酵乳中的功能特性,结果表明：植物乳杆菌A44作为辅助发酵剂添加后对4 ℃贮藏7 d期间发酵乳pH值、滴定酸度和持水性均无显著影响（P＞0.05）,但是可以显著提高发酵乳的活菌数和黏度（P＜0.05）,活菌数达到8.45（lg（CFU/mL））。本研究筛选得到的植物乳杆菌A44是一株性能优良的益生乳酸菌,具有作为发酵乳益生菌辅助发酵剂的潜在应用前景。     

六株人源益生菌的表面性质与黏附性能研究

通过测定六株人源益生菌的自凝集及疏水性能力,并以人结肠腺癌细胞系Caco-2和HT-29作为体外细胞黏附模型评价其黏附能力,最后探究生长阶段、菌体浓度和孵育时间对发酵乳杆菌CECT5716黏附能力的影响。结果表明嗜酸乳杆菌F-1的自凝集率最高,为69.92%;疏水性最强的是鼠李糖乳杆菌MP-108,达到90.10%;乳双歧杆菌AD011对Caco-2和HT-29的黏附性均为最强,分别为(42.80±0.68)、(47.01±0.20) CFU/cell;不同益生菌的自凝集能力、疏水性及黏附能力均存在菌株特异性,其自凝集能力、疏水性及黏附能力间无明显相关性。此外,发酵乳杆菌CECT5716黏附能力随菌体浓度增大而显著(p<0.05)增加,当菌体浓度达10⁸ CFU/mL以上时黏附能力不再显著提高;随着共孵育的时间延长,其黏附能力也增强,在共孵育2 h后不再提升;且菌体生长稳定期时表现出的黏附能力最强,达到(3.61±0.20) CFU/cell。所考察的益生菌大部分都具有较强的潜在黏附能力,其中以乳双歧杆菌AD011最强。这些益生菌具有可在人体肠道定殖生长的潜在益生功能,在食品和药品等行业中具有良好的应用前景。     

基于径向基人工神经网络遗传算法的长寿老人源益生菌微胶囊工艺探索及其特性测评

益生菌产品由于在储存或在胃肠道中活性会产生一定程度的降低,导致它们潜在的益生特性不能很好地发挥,因此,本研究对源自广西巴马百岁老人的发酵乳杆菌LTP1332进行了微胶囊化研究。在海藻酸钠（Sodium alginate,SA）和氯化钙为主要壁材的基础上,引入明胶（Gelatin,GEL）和壳聚糖（Chitosan,CS）进行复合,通过单因素实验寻找影响包埋率的关键因素,利用响应面设计（Box-Behnken Design,BBD）构建径向人工神经网络模型（Radial Basis Function,RBF）,并借助遗传算法（Genetic Algorithms,GA）对其包埋工艺进行寻优。利用SEM扫描电镜等方法对优化后的胶囊进行表征,并进行体外模拟消化试验。结果表明,微胶囊的最佳制备工艺参数为:2.210%海藻酸钠,4.451% CaCl₂,0.1%明胶,13.529 min固化时间,在该条件下所制样品的平均包埋率为95.08%±0.25%。优化工艺条件下的CS-GEL-SA-微胶囊经模拟胃液处理120 min后,菌体存活率仍可达22.48%±0.78%;在模拟肠液消化90 min时,菌体释放率即可达到最大值,具有较好的肠溶性。综上,该工艺条件下制备的长寿老人源益生菌微胶囊具有较好的护菌效果和开发应用前景。     

益生乳杆菌的筛选研究

以分离保存的15株乳杆菌为研究对象,从中筛选益生乳杆菌两株。通过检测乳杆菌的疏水性和自聚性,得到表面疏水性和自聚性均较高的菌株为Ind-3、CH10和M8。其中,乳杆菌CH10和M8在模拟胃肠环境下活菌数均达到106mL-1以上。通过灌胃乳杆菌CH10和M8,表明小鼠体重增加明显高与对照组,且实验组小鼠粪便中的β-半乳糖苷酶活性明显高于对照组。灌胃两株乳杆菌后,小鼠肠道内双歧杆菌与乳杆菌活菌数提高了,且肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌的生长繁殖受到不同程度的抑制,而对照组无明显变化。结果表明筛选出的两株乳杆菌可以促进小鼠对营养物质的吸收,提高肠道内有益菌的数量,抑制有害菌的生长繁殖,或许能够改善寄主肠道的微生态环境。     

Functional characteristics of Lactobacillus spp. from traditional Maasai fermented milk products in Kenya

In this study functional characteristics of 23 representative Lactobacillus strains isolated from the Maasai traditional fermented milk 'Kule naoto' were determined. The Lb. acidophilus group strains showed resistance to gastric juice and bile. In addition, some Lb. acidophilus strains expressed bile salt hydrolase activity, and had ability to assimilate cholesterol in vitro. In-vitro adhesion to HT29 MTX cells of up to 70% was recorded. Lb. fermentum strains showed almost 100% survival under simulated stomach acidic conditions and physiological salt concentrations of bile salts, hydrophobicity values were over 80%. Most strains of the Lb. casei and Lb. acidophilus groups showed aggregation abilities of above 50%. Many strains expressed a protective effect against N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine induced DNA damage according to the 'comet assay' and none was virulent. The antibiotic minimum inhibitory concentration of selected strains was established. According to these results, the Lactobacillus spp associated with 'Kule naoto', contain potentially probiotic (functional) strains.     

Lactobacilli isolated from chicken intestines: potential use as probiotics

Lactobacillus strains were tested for their in vitro probiotic properties. Cell surface hydrophobicity was found to be very high for Lactobacillus fermentum subsp. cellobiosus and Salmonella Gallinarum; high values could indicate a greater ability to adhere to epithelial cells. Studies on Lactobacillus animalis indicated relative cell surface hydrophobicities smaller than those of L. fermentum subsp. cellobiosus and L. fermentum. L. animalis and Enterococcus faecalis were able to coaggregate with L. fermentum subsp. cellobiosus and L. fermentum, respectively, but not with Salmonella Gallinarum. After mixed-culture studies for determining suitable growth behavior, the pair of strains L. animalis plus L. fermentum subsp. cellobiosus was selected for an attempted challenge against Salmonella Gallinarum. Double and triple mixed-culture studies indicated that selected lactobacillus strains were able to retain their beneficial characteristics in the presence of Salmonella Gallinarum such as presence of lectins, production of antimicrobial compounds, and ability to grow and compete. The selected microorganisms can be considered as potential ingredients for a chicken probiotic feed formulation intended to control salmonellosis and also improve poultry sanitation.     

罗伊氏乳杆菌的益生特性及安全性分析

本研究对一位128岁老人源罗伊氏乳杆菌进行了体外益生特性和安全性分析。采用模拟胃肠液对49株罗伊氏乳杆菌进行耐受筛选,得到了3株存活率都大于90.00%的菌株,分别是LT018、LT037、LT046。对上述3株罗伊氏乳杆菌进行表面特性、抑菌活性和安全性分析,结果表明,LT018具有较好的粘附繁殖能力(疏水性为54.65%,凝集性为67.20%),菌株的表面疏水性和凝集性之间存在负相关(R=-0.869);非酸性抑菌活性物质在酸性条件下才发挥作用,它们的上清液对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、伤寒沙门氏菌和福氏志贺氏菌均有较明显的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑制效果最佳,抑菌圈直径均大于15.00 mm;它们都不具有产生物胺有害物质的活性,除氯霉素外,对其他4种临床常用抗生素(红霉素、四环素、庆大霉素、万古霉素)敏感。综合上述结果,认为这些菌株具有良好的开发潜力。     

两株乳杆菌益生特性的体外研究

从健康个体口腔中分离得到了两株乳酸菌，经API细菌鉴定系统鉴定分别为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum HO-69与Lactobacillus plantarum HO-160，并对两株植物乳杆菌的特性进行了研究。抑菌试验表明，两株菌的代谢产物具有较好的抑菌活性；两株菌对于人工消化液具有良好的耐受性，HO-69生长的最高胆汁质量分数为0．4％，HO-160为0.3％；两菌均具有较高的表面疏水性与酸碱电荷。     

具有肠道动力及肠道菌群调节功能乳杆菌的筛选及功能评价

便秘作为常见的胃肠道疾病,常伴有肠道动力及肠道菌群的异常。本研究通过测定45 株乳杆菌的体外生理特性,并筛选出3 株进行体内功能性评价,探讨乳杆菌对肠道动力以及肠道菌群的调节能力。结果表明：干酪乳杆菌LC9、发酵乳杆菌LF37和鼠李糖乳杆菌LR45的耐酸耐胆盐存活率高于10%,均能利用低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖,且短链脂肪酸产量高于1.2 mmol/L。此外,3 株乳杆菌均能促进小鼠的小肠推进率,缩短首粒排黑便时间,增加粪便水分质量分数,加快肠道运动,同时能提高小鼠粪便菌群中有益菌的相对丰度,改善菌群结构。综上,这3 株菌对小鼠肠道功能有一定的调节作用,具有潜在的应用价值。