骨髓活检组织超薄切片及细胞化学技术的研究

本文对骨髓异常增生综合症患者的骨髓活检组织,作了环氧树酯包埋前染色的电镜观察,现将此技术方法的初步体会报导如下:取材用骨髓活检针钻取髂后上嵴骨髓组织(5mm×1mm)一块,迅速投入1％戊二醛内(用0.1M二甲胂酸缓冲液pH7.2～7.4配制)。固定将活检组织切成1mm×1mm小块,再放入1.0％戊二醛内固定15分钟,同上的缓冲液清洗3次,每次10分钟。标本分作2份,1份用2.5％的戊二醛继续固定2小时,同上的缓冲液清洗3次后,再用1％O_sO_4(0.2M二甲胂酸缓冲液配制)固定1小时,留作常规超微结构标本制备用。另一份放入0.1M二甲胂酸缓冲液内留作     

适合光镜和电镜诊断肾小球疾病的固定剂选择

目的：为了使已经石蜡包埋的肾穿组织脱蜡后进行电镜观察,关键是选择适当的固定剂。方法：在石蜡包埋前,肾穿组织分别用甲醛、戊二醛及戊二醛、锇酸双固定。根据光镜和电镜观察结果,选择能兼顾光镜和电镜的固定剂。结果：甲醛固定不能有效保存肾穿组织的超微结构,锇酸的固定能有效地保存超微结构,但严重影响了光镜切片的染色;而戊二醛与甲醛相比,较好地保存了肾穿组织的超微结构,同时又不影响光镜切片的染色。结论：在石蜡包     

温锇酸的固定

在生物标本制备中,一般都强调固定的温度必须在4°—0℃之间。由于温度低,可以减少细胞物质的抽提。因此,目前不论何种生物标本大多数都是低温下固定。由于温度降低,固定剂渗透的速度和深度以及固定剂与细胞物质的相互作用也相应的降低了,为了克服这个缺点,必须延长固定的时间。固定的温度能否升高呢?事实上,只要时间控制在一定的范围内,在常温下细胞物质的抽提并不严重影响细胞的超微结构。相反可以改善细胞的固定质量,提高细胞结构的清晰度和对比度。我们用小白鼠肝、肾和肠等组织分成两组:甲组用磷酸缓冲的5 ％戊二醛和1％O、O_4在0—4℃下双固定,     

小脑浦肯野细胞酶细胞化学的超高压电镜观察

本研究采用电镜酶细胞化学方法显示小脑浦肯野细胞酸性磷酸酶活性分布,在超高压电镜下进行了观察,探讨了线状溶酶体的存在。实验动物采用 wistar 成年健康大鼠,体重150克左右,乙醚麻醉,用30mM pipes 缓冲液(PH7.4,8％蔗糖)缓冲配制的2％PFA(多聚甲醛)和GLA(戊二醛)混合固定液进行心脏灌流10分钟,立即取小脑切1mm×2mm小块,于4℃继续浸泡固定1小时后,同种缓冲液洗净。用 microslicer(微组织切片机)作成40μm非冻结切片,置入 Gomori’s 改良法配制的孵育液中,37℃恒温振荡孵育40分钟。对照组去除底物,在孵育液中加入氟     

心肌纤维的ODO高分辨扫描电镜观察

本文采用ODO高分辨扫描样品制备技术,观察了小白鼠、大白鼠和犬心肌纤维表面及断面的微细结构,并讨论了高分辨扫描电镜观察法的技术特点,分析了心肌纤维的超微结构及其与功能之间的关系。技术方法按常规取材、将样品修成梭形,放入1％锇酸中固定1～2小时;继以1/15M磷酸缓冲液清洗,用25％、50％的二甲基亚砜分别浸泡20分钟,并在TF-2型冷冻割断台上将样品割断;尔后,用1％锇酸对样品作后固定,0.1％锇酸软化细胞基质,再以1～2％单宁酸对样品作导电处理,用1％锇酸对样品进行终末固定;最后,对其进行脱水、干燥、镀膜处理后,用扫描电镜观察。     

电镜酶细胞化学技术及其应用

电镜酶细胞化学是在超微结构水平上研究酶的活性定位和变化的新技术。用此技术,有利于综合分析细胞的超微结构特征与酶活性分布之间的相互联系,对研究各种生理病理情况下酶的定位和代谢特征有很重要的意义。近年来,我们摸索、引用或改进了十八种酶(5′—核苷酸酶、核苷二磷酸酶、钠—钾—ATP酶、Mg~(++)-ATP酶、Ca~(++)-ATP酶、细胞色素氧化酶、腺苷酸环化酶、糖原合成酶、LDH、MAO、ALP、ACP、AChE、SDH、CMP酶、TPP酶、G-6-P酶、NADP酶)的电镜细胞化学方法,并应用于高压氧医学和脑肿瘤酶活性定位研究。在应用中我们体会到:(1)用2％多聚甲醛—0.5％戊二醛(0.1M二甲砷酸缓冲液或PBS配成,加6.5％蔗糖)混合固定液固定对大多数酶是合适的。少数酶如SDH不耐固定,须用     

用常规透射电镜观察半薄切片——铀—铅—铜浸染技术的应用

在常规透射电镜中,超薄切片的厚度一般不超过0.1微米,否则就看不清样品的细节。但是,使用特殊的标本本浸染方法,选择性地对某些细胞结构染色,就可以在一般透射电镜下观察半薄切片。本实验采用铀—铅—铜浸染技术,选择性地染色一部分细胞器,在75—100KV透射电镜下观察0.25—0.5微米的半薄切片。结果表明,这一技术在超微结构研究中有一定实用意义。实验方法:用2％戊二醛灌注大鼠,取肝、肾、十二指肠和睾丸等组织,切成1立方毫米小块。组织块经缓冲液漂洗后,在42℃下先放入5％醋酸铀水溶液(PH3.5)浸染1小时,再在硝酸铅—硫酸铜—枸椽酸钠溶液中浸染1小时,然后在4℃下用1％饿酸后固定12小时、常规环氧树脂包埋,最后将组织块切成0.25—0.5微米半薄切片,在透射电镜下观察。     

在中性领域,P-NPP酶活性检出方法中几种铅盐的效果比较

为了探索在中性环境中P—NPP酶活性的检出方法,对作为捕捉剂的铅盐种类进行了对比和选择。实验动物为体重35—40g的ddy系小白鼠。方法:用含20％多聚甲醛和0.5％戊二醛的固定液灌流固定10分钟,取出肾脏,做20—40μm厚的未冻切片,分别投入下面五组反应液中,37℃,浸渍30分钟。反应液的组成为:Tricine-NaOH缓冲液2.5mM,pH7.4;p-NPP10mμ;KC150mμ;levamisole2.5mμ;DMSD25％;再各个加入柠檬酸铅、硝酸铅、硫酸铅、氯化铅、醋酸铅4mμ。反应后,光镜用1％硫化铵液浸1—2分钟,电镜则用1％OsO_4后固定。再进行常规处理、分别用光镜和透视电镜观察、照像。     

纤毛虫施氏腹柱虫细胞纤毛器微管的激光共聚焦显微观察

应用荧光紫杉醇荧光标记结合激光共聚焦显微术显示,土壤纤毛虫施氏腹柱虫(Gastrostyla steinii)细胞纤毛器微管胞器中,口围带和波动膜后端汇合处含口底托架及口后微管束;额腹横棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束和横微管束;左、右缘棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束、横微管束和基部微管芽。与目前了解的纤毛虫同类微管结构相比较,施氏腹柱虫显示出其适应于土壤环境而与水生纤毛虫有所区别的一些基本特征,其棘毛基部微管的组成及定位具有该种土壤纤毛虫细胞的特异性。形态发生中,老口围带全部保留,老的或先存的微管结构对新结构的发生和形成具有定位和物质贡献的作用,且老结构在新结构分化和成熟期间也经历着行使相应的生理功能及逐渐退化的过程。     

烟草单个花粉原生质体透射镜样品制备及其超微结构观察

本文介绍了烟草花粉原生质体作试验材料，用自制微吸管手工预先挑选单个花粉原生质体，戊二醛微滴固定，然后用低熔点琼脂糖或明胶预包埋，小塑料管顶和包埋单个花粉原生质体，进行透射电镜样品制备，初步建立了单个原生质体电镜制样的技术流程，通过电镜观察，与群体制样法比较，结果是令人满意的。此项技术的建立，为今后植物性细胞超微结构的研究，提供了一项精细的操作方法。     

培养的肺动脉内皮细胞的免疫和细胞化学鉴定

本实验用间接免疫荧光法和电镜免疫胶金法显示培养细胞的胞内凝血Ⅷ因子相关抗原(ⅧR:Ag)反应阳性以及电镜下Weible-Palade(WP)小体存在,证明所分离并经多次传代的细胞为内皮细胞。材料和方法:1.从新生小牛肺动脉中以胶原酶消化法分离出内皮细胞,于199培养液中培养并传代,取第3-5代细胞。实验前细胞培养于涂有鼠尾胶原的载玻片上。2.WP小体检测:细胞以PBS(0.1M,pH=7.4)原位漂洗并分别以3％戊二醛45分钟、1％锇酸30分钟固定;将预聚好的Epon812块扣于经脱水和Epon812浸透的细胞单层上,聚合后用热烤法将细胞层剥离于载玻片,常规超薄切片和铅铀染色,透射电镜下观察。3.ⅧR:Ag检测:(1)间接免疫荧光法:以95％4℃乙醇原位固定细胞10分钟,     

松胞素B对黑麦花粉母细胞超微结构的影响

用扰乱微丝和抑制细胞质川流运动的松胞素B(Cytochalasin B)处理黑麦花序,经24、48、56h后,分别将花药用戊二醛—锇酸双固定,Epon—812包埋切片经铀铅双染后在EM—400T电子显微镜下进行观察初步结果如下: 1.正常黑麦花粉母细胞细胞络构完正,细胞内原生质稠密、大小液泡数量较多,细胞核大核膜清晰。 2.经CB24h处理的材料,花粉母细胞超微结构发生较明显变化,细胞质稀疏出现不规则空白区,有的液泡变为多角形,细胞壁内生或有絮状物沉淀。     

烟草单个花粉原生质体透射电镜样品制备及其超微结构观察

本文介绍了烟草花粉原生质体作试验材料，用自制微吸管手工预先挑选单个花粉原生质体，戊二醛微滴固定，然后用低熔点琼脂糖或明胶预包埋，小塑料管顶扣包埋单个花粉原生质体，进行透射电镜样品制备，初步建立了单个原生质体电镜制样的技术流程，通过电镜观察，与群体制样法比较，结果是今人满意的。此项技术的建立，为今后植物性细胞超微结构的研究，提供了一项精细的操作方法。     

甲状腺胶性腺瘤及乳头状癌的超微结构

采用电镜观察肿瘤细胞,提高细胞结构的分辨能力是肿瘤形态学研究的重要手段。本研究对比观察了甲状腺胶性腺瘤及乳头状癌的超微结构,并探讨了不同超微结构特征对癌的诊断意义。材料来自北医第一附属医院外科手术室的手术切除标本,共12例胶性腺瘤及5例乳头状癌。组织切成1mm小块固定在3％戊二醛及1％锇酸后固定,环氧树脂618包埋超薄切片经醋酸铀及枸椽酸铅双染色。JEM100CXⅡ电子显微镜观察,剩余标本固定在10％福尔马林液中作常规病理组织切片及检查。讨论:甲状腺胶性腺瘤和乳头状癌的超微结构有明显不同,尤其显著的是核的变化。胶性腺瘤有较大,而且     

植物材料干燥法比较及其在分类中的意义

应用扫描电镜观察植物材料的微形态特征是植物分类学研究中的主要手段。 植物叶片微形态特征保存的好坏,与其所用的干燥方法有密切关系;同时,微形态特征在植物分类运用中也是至关重要的。本实验采用六甲基二硅胺烷干燥法,单固定（戊二醛）微波辐射临界点干燥法,单固定（戊二醛）临界点干燥法及双固定（戊二醛、我酸）临界点干燥法,对数十种植物叶片进行了干燥处理并用扫描电镜对其观察比较。经多次试验结果表明：单固定（戊二     

脾气虚证骨骼肌线粒体超微结构图像分析研究

脾气虚证大白鼠骨骼肌的超微结构变化已作了观察研究,发现线粒体数显著减少,其结构改变表现为肿胀、嵴断裂、空泡化等。本文对线粒体的超微结构作进一步图像分析。实验动物Wistar大白鼠,取正常组、脾气虚证组、四君子汤复健组和自然恢复组的骨骼肌用4％戊二醛固定液作前固定,1％四氧化锇固定液后固定,Epon 812包埋。LKB V型超薄切片机切半薄和超薄切片,半薄切片作光学显微镜观察和修块定位,超薄切片用醋酸铀、柠檬酸铅双重染色,日立H-500透射电镜观察照相,Joyce-Loebl μMAGISCAN图像分析仪对四个组线粒体的面积、周长、长度、宽度(见图1)以及长度与宽度之比进行测定、统计分析,对四个组的上述参数分别作t测验。     

应用酪氨酸羟化酶抗体的免疫电镜技术

免疫电子显微镜技术是近二十年发展起来的一种新技术。应用免疫电镜可以进一步揭示亚细胞水平神经组织的超微结构和化学递质之间的形态学关系。免疫电子显微术与常规的电镜制样技术不同,尤其在胚胎样品制备过程中,不仅要考虑到样品应具有较好的超微结构,同时也要考虑到组织切片中抗原活性的保存,要获得比较理想的标本,需根据自己实验要求,摸索出自己最理想的步骤和参数。我们采用了4％多聚甲醛和1％戊二醛磷酸缓冲液,再用单体多聚甲醛固定液的顺序灌流方法,以及在免疫反应中未加清洁剂的措施,有效地兼顾了免疫反应产物和组织保存两方面。     

鲤鱼皮肤的超微结构

鲤鱼Cyprinus Carpio的皮肤是由不同类型的细胞和组织构成。有关鲤鱼皮肤亚微结构的资料国内还未见报道。本文探讨了鲤鱼皮肤的超微结构,可望能为鲤鱼生理、病理的研究及病害防治提供一定依据。一.材料和方法:材料鱼取白天津西青区养鱼池。割取活鲤鱼躯干部的皮肤,切成1×1mm~2小块,于2.5％戊二醛溶液和1％锇酸溶液中双重固定。常规方法超切,醋酸铀和柠檬酸铅双染色。在PHILIPS透射电镜下观察拍照。     

马尾松种子劣变中超微结构的电镜观察

马尾松是我国主要造林树种之一,其种子在室内挂藏时会发生老化劣变。劣变种子生理生化的变化与胚根尖细胞的超微结构变化相关。我们对种子胚根尖细胞的超微结构进行电子显微研究,以掌握劣变原因,选择科学的贮藏方法。供测种子产自浙江天台,一组为低温密闭贮藏(5—3℃冰箱中),一组室温密闭贮藏,另一组为室内挂藏。贮藏二年后测定发芽率等。选用高活力和劣变的种子作电镜观察,经吸胀萌发后切下胚根尖,2.5％戊二醛前固定4小时,1％锇酸后固定3小时,包埋,切片后镜检。据测定低温密闭贮藏种子活力最高,室内挂藏种子活力最低,严重劣变。电镜下可见高活力种子胚根尖细胞     

下颌髁突软骨的扫描电镜观察

本研究应用扫描电镜观察下颌髁突软骨的超微结构,并对比研究了髁突软骨与骺板软骨的组织结构特点。 8周龄Spragne-Dawley雄性大鼠,麻醉下取双侧下颌骨和胫骨,剔除软组织,剥离关节盘,投入2.5％戊二醛溶液中固定,沿髁突中份矢状面和冠状面冰冻断裂,盐酸——胰蛋白酶消化,乙醇脱水,CO_2临界点于燥,真空镀金,AMRAY-1000B扫描电镜观察。