响应面优化鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性

目的：研究秘鲁鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性。方法：以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,利用单因素试验和响应面法对其酶解工艺进行优化,并采用2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS）自由基与•OH清除率及亚铁还原能力评价其酶解产物抗氧化活性以及通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和凝胶排阻色谱分析其分子质量分布。结果：最适酶解工艺为酶解温度50 ℃、初始pH 7.4、底物蛋白质质量分数3.2%、酶解时间3.7 h、酶添加量3 000 U/g。在此条件下,水解度和酶解产物DPPH自由基清除率分别为（37.23±0.08）%和（43.61±0.09）%,对ABTS＋•和•OH清除率的IC50分别为0.37 mg/mL和0.41 mg/mL,且表现出较强的亚铁还原能力;SDS-PAGE显示最适酶解工艺下,蛋白质基本被水解为小分子多肽;凝胶排阻色谱分析可知,酶解产物分子质量在1～5 kD之间。结论：酶解产物具备较强的抗氧化活性,可作为抗氧化活性物质基料,充分开发利用。     

胰蛋白酶对猪血红蛋白酶解脱色条件优化

以酶解液水解度（hydrolysis degree,DH）、三氯乙酸（trichloroacetic acid,TCA）可溶性氮含量及血红素残留量为评定指标,采用单因素试验比较胰蛋白酶和碱性蛋白酶对猪血红蛋白的酶解脱色效果。在单因素试验基础上,进行4因素3水平正交试验。结果表明：胰蛋白酶水解脱色的效果更好,最佳酶解工艺参数为酶底比7500 U/g、酶解温度45 ℃、pH 7.5、底物质量浓度8 g/100 mL,在此条件下,酶解液DH为25.67%,TCA可溶性氮含量为80.05%,血红素残留量为18.34%,猪血红蛋白多肽粉蛋白含量83.17%;对此条件下制备的猪血红蛋白多肽粉进行分子质量分布分析,分子质量在1 000 Da以下的小肽占比94.20%;最佳酶解脱色条件下,猪血红蛋白多肽粉中TCA可溶性氮含量为80.05%的蛋白占猪血红蛋白多肽粉蛋白含量的96.25%,这与分子质量分布结果比较符合。     

菜籽分离蛋白分子质量分布及酶解条件的研究

以脱脂"双低"油菜籽为原料,利用碱溶解酸沉淀法提取菜籽分离蛋白;用SDS-PAGE凝胶电泳研究菜籽蛋白的分子质量的组成;以水解度和氮回收率为考察指标,用响应面分析法拟合了Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白成菜籽肽的二次多项数学模型,优化了酶解菜籽分离蛋白的工艺参数。SDS-PAGE凝胶电泳研究表明利用碱溶解酸沉淀提取的菜籽分离蛋白主要是2S清蛋白。响应面分析法研究的试验结果表明,酶的使用量、pH、酶解温度、酶的使用量与pH的交互作用对Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白的水解度和氮回收率的影响均显著(P0.05)。通过求解菜籽肽的二次多项数学模型的逆矩阵方程,可得Alcalase 2.4L水解菜籽分离蛋白的最佳条件为:酶的使用量0.05 Au/g,pH 9.0,酶解温度54℃;在此酶解条件下,菜籽分离蛋白浓度为5%时,水解5 h,所得的水解度和氮回收率分别为35.12%及52.96%。     

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

啤酒酵母-花生粕酶解制备鲜味肽的研究

该研究以啤酒酵母和花生粕混合物为原料,综合分析蛋白回收率、水解度和感官评价等指标,通过单因素结合正交优化试验确定酶解制备鲜味多肽的最佳条件。正交试验选取温度、时间和加酶量3个因素进行优化,以蛋白回收率为指标。优化结果如下：风味蛋白酶∶胰蛋白酶=1∶3（质量比）,加酶量（E/S）为 1.2%,料液比 1∶12（g/mL）,pH 7.0,时间12 h,温度55℃,蛋白回收率为（67.78±1.06）%,水解度为（20.05±0.49）%。在上述条件下制备的样品肽分子量主要分布在5000Da以下,占比为99.72%。游离氨基酸总含量达169.98 mg/g,其中谷氨酸含量最高,占比15.45%。     

固定化瑞士乳杆菌蛋白酶酶解乳清蛋白生产ACE抑制肽的条件优化

以乳清浓缩蛋白WPC-80为原料,研究固定化瑞士乳杆菌蛋白酶酶解WPC-80生产血管紧张素转化酶（angiotensinⅠ-converting enzyme,ACE）抑制肽的工艺条件。通过单因素试验和响应面方法研究了酶解温度、酶解pH值、底物与酶质量比（[S]/[E]）、酶解时间对固定化瑞士乳杆菌蛋白酶制备ACE抑制肽的影响,确定了酶解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为：温度37 ℃、pH 7.5、[S]/[E]＝15%、酶解时间8 h。在此条件下,酶解产物的水解度为（6.05±0.36）%,ACE抑制率为（59.54±0.61）%。     

不同酶解条件下酪蛋白酶解产物特性的阶段性研究

以底物浓度（[E]）、酶用量（[E]/[S]）、水解温度（T）、水解时间（t)和pH值5个因素作为因变量，采用五元二次正交旋转组合设计确定酪蛋白的水解条件，分析了不同酶解条件对酪蛋白水解度、蛋白回收率、三氯乙酸氮溶解指数、氨基氮含量的影响。结果表明，在不同酶解条件下获得的酶解产物的水解度、蛋白质回收率、三氯乙酸氮溶解指数、氨基氮含量差异较大，且酶解产物的水解度与蛋白质回收率、三氯乙酸氮溶解指数、氨基氮含量间均呈显著相关关系。     

长鳍金枪鱼鱼皮胶原蛋白肽制备工艺的研究

以长鳍金枪鱼鱼皮为原料,采用碱热复合酶三步水解法制备胶原蛋白多肽。以水解度、氮回收率和水解产物分子量为指标,通过单因素和多因素正交设计试验,确定最佳酶解条件。结果表明:碱处理为第一步,鱼皮经过0.1 mol/L Ca(OH)_2反复清洗数次,最后清水冲洗干净;热处理为第二步,鱼皮于水浴锅中90℃处理30 min;酶解为第三步,梯度加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味酶,酶解的最佳工艺条件为:复合酶料比1∶200(g/g),料水比1∶2.5(g/m L),酶解温度55℃,p H为9.0~6.5,酶解总时间为4 h,水解度平均能达到30%,酶解液脱色的最佳条件为,活性炭添加量2%,自然pH,温度70℃,时间30 min,经过浓缩喷雾干燥后的胶原蛋白粉末经过HPLC分析,得到分子量在3 kD以下的多肽占到85%以上。     

章鱼-鲍鱼下脚料风味前体物的优化制备及组分分析

目的:对章鱼-鲍鱼下脚料进行综合利用和深度加工,以获得氨基酸含量丰富,风味良好的调味基液。方法:以水解度为指标,筛选最适酶解章鱼-鲍鱼下脚料的蛋白酶。利用单因素及响应面分析法优化单酶酶解条件。在此基础上,确定双酶分步水解条件,得到最优的酶解工艺。结果:最适酶解原料的蛋白酶为碱性蛋白酶,最优的酶解条件是料液比1∶6(m/V),酶/底物为800 U/g,酶解时间5.5 h,酶解p H 8.0,酶解温度51℃,此时水解度为19.94%;再添加0.5%(质量分数)的风味蛋白酶酶解3 h,水解度可达28.59%。结论:通过酶解原料可获得氨基酸含量较高并具有海鲜风味的酶解液,为进一步制备章鲍鱼下脚料调味品研究提供理论依据。     

响应面法优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺

为研究河蚌肉酶解制备复合调味料工艺,采用高压脉冲电场辅助酶解,提高氨基态氮得率。以水解度为检测指标,通过单因素试验研究复合酶种类、温度、反应时间、pH值、酶类配比、酶添加量、液料比、脉冲数和电场强度对水解度的影响;在单因素试验基础上,采用响应曲面法优化高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉工艺。结果表明：酶解河蚌肉的最佳条件为木瓜蛋白酶、风味蛋白酶质量比1.71∶1、酶添加量1.6%、温度50 ℃、反应时间4.5 h、pH值6.74、电场强度18.85 kV/cm、液料比50（V/m）、脉冲数8,最终水解度为42.75%,水解度较对照组（36.23%）提高18.0%。     

Alcalase酶解狼山鸡肉蛋白规律

以狼山鸡为实验材料,分析Alcalase酶解鸡肉蛋白规律。结果表明：酶解鸡肉蛋白的最适酶解温度为45 ℃、酶添加量为2.0 U/g、酶解时间为4 h;酶解过程中肌浆蛋白和肌原纤维蛋白有较多的氨基酸释放,并且可溶性氮也有大量的累积,酶解产物的分子质量主要集中在30～50 kD之间;在酶解产物中含量最高的氨基酸分别为天冬氨酸和谷氨酸,并且在酶解产物中亲水性氨基酸（hydrophilic amino acid,HLAA）与疏水性氨基酸（hydrophobicamino acid,HBAA）比值在1.41～1.52之间;通过对酶解产物游离氨基酸营养价值的分析,在不同酶解时间的酶解产物中含有丰富的必需氨基酸,该必需氨基酸指数与联合国粮食及农业组织/世界卫生组织（Food AgricultureOrganization/World Health Organization,FAO/WHO）推荐的成人理想氨基酸模式相类似。     

梭子蟹下脚料酶法制取蛋白水解物最佳工艺的研究

采用酶法从梭子蟹下脚料中制取蛋白水解物,并利用单因素试验和正交试验对最佳酶解条件进行研究。结果表明,梭子蟹下脚料最适的水解蛋白酶为碱性蛋白酶;在液料比3:1 时,最适酶解条件为温度55℃、时间3.0h、pH8.5、加酶量(E/S)1000U/g,此时水解度为26.68%,其中温度对水解度的影响最大,其次为加酶量;蛋白水解物的分子量小于10kD,蛋白水解呈味氨基酸含量为412.6mg/L,占氨基酸总量的39.42%,具有很高的营养价值和应用前景。     

菜籽多肽体外和细胞内抗氧化性评价及氨基酸分析

本研究以Alcalase 2.4L酶解“双低”油菜籽宁杂19号得到的菜籽蛋白酶解物（rapeseed protein hydrolysate,RPH）为原料。通过超滤和凝胶色谱分离其活性肽组分,对酶解液及各分离组分进行抗氧化活性研究,并对抗氧化能力最高的组分进行氨基酸分析。结果表明：通过超滤将RPH分离成4 组不同分子质量范围的多肽组分,其中RPH-P4（分子质量＜3 kD）具有最高的抗氧化活性;RPH-P4经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到3 个洗脱峰,收集并测定其活性,研究发现RPH-P4-S3抗氧化能力远高于其他2 个组分（P＜0.05）,氧自由基吸收能力（oxygenradical absorbance capacity,ORAC）、细胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity,CAA）、细胞内CAA实验的EC50值分别为（1 951.90±20.35） μmol TE/g、（143.38±4.11） μmol QE/g、（45.63±3.67） μg/mL;对RPH-P4-S3进行了氨基酸分析,发现其抗氧化性氨基酸含量达到72.90%,必需氨基酸含量为53.52%。研究认为,菜籽蛋白Alcalase 2.4L酶解物分离组分RPH-P4-S3具有较高的抗氧化活性及营养价值,可以作为功能性成分用于抗氧化相关的功能食品和保健品的开发。     

Alcalase酶解对淘汰蛋鸡风干成熟过程中蛋白质分解变化规律的影响

以淘汰蛋鸡为原料,腌制后采用碱性蛋白酶（Alcalase）酶解并风干成熟,分别分析酶解组与对照组加工过程中蛋白质的分解及游离氨基酸的变化,确定蛋白质分解变化的规律。结果表明：Alcalase能显著促进淘汰蛋鸡蛋白质的水解,Alcalase酶解鸡肉蛋白后能显著增加鸡肉肌纤维小片化指数以及蛋白质水解指数（P＜0.05）,与对照组相比,鸡肉中肌浆蛋白和肌原纤维蛋白在腌制结束后有显著的分解（P＜0.05）,分子质量大于72 kD的蛋白质逐渐分解,小于28 kD的小分子蛋白逐渐累积;对产品游离氨基酸的分析结果表明,通过Alcalase酶解能显著增加成品中的游离氨基酸总量,与对照组相比,在风干后期有更多的氨基酸参与后续的分解反应,说明Alcalase对风干成熟后期游离氨基酸进一步转化为风味物质也有促进作用。     

网箱海养卵形鲳鲹饲料与肌肉品质评价

本实验结合喂养饲料,对海水网箱养殖卵形鲳鲹肌肉进行常规生化分析,并对其营养品质进行评价。结果表明：饲料蛋白质、粗脂肪含量能满足其生长需求;养殖卵形鲳鲹肌肉中蛋白质、脂肪、灰分和水分含量分别为（19.48±0.15）%、（8.40±0.30）%、（1.34±0.06）%、（70.84±0.06）%,其脂肪含量高于其他鲳鱼;肌肉中氨基酸总量为（66.21±1.17）%（以干基计）,其中必需氨基酸总量为（26.65±0.54）%,鲜味氨基酸含量为（25.50±0.54）%,其必需氨基酸的构成比例完全符合联合国粮食及农业组织/世界卫生组织评价标准,饲料和肌肉第一限制氨基酸均为蛋氨酸;肌肉中共检测出27 种脂肪酸,多不饱和脂肪酸总量（polyunsaturated fatty acid,PUFA）、二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）含量分别为（32.72±0.05）%、（0.64±0.04）%和（5.05±0.23）%,其n-6与n-3 PUFA比值、PUFA/饱和脂肪酸总量（saturated fatty acid,SFA）均符合英国卫生部推荐要求。研究表明：养殖卵形鲳鲹肉味鲜美,必需氨基酸含量高、组成均衡,多不饱和脂肪酸、DHA含量较高,具有较高的食用和营养价值;饲料营养成分基本满足卵形鲳鲹生长需求,但若能调整该配合饲料的蛋氨酸含量、n-3系列脂肪酸含量,可进一步提高养殖卵形鲳鲹的肌肉品质。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

蒙顶甘露名茶主要滋味成分及香气组分检测分析

采用常规分析法与高效液相色谱、气相色谱-质谱分析法相结合对蒙顶甘露茶的主要滋味成分、游离氨基酸组分和香气组分进行检测,并就内含成分与品质风味的关系进行探究。结果表明,主要滋味成分茶多酚、儿茶素、咖啡碱、可溶性糖和氨基酸的全含量为（23.98±0.26）%、（17.52±0.05）%、（4.26±0.21）%、（4.85±0.12）%和（4.66±0.16）%,酚氨比值为3.95～7.43;日常饮茶冲泡时,第2次泡滋味感官评分（28.9±0.2）最高,品质风味好,其主要成分包括茶多酚、咖啡碱、可溶性糖和游离氨基酸,浸出质量浓度分别为262.2、63.9、66.5 mg/250 mL和89.3 mg/250 mL,酚氨比值较小,为2.93;蒙顶甘露茶中含有18 种游离氨基酸组分,其中茶氨酸高达20.46 mg/g,占51.5%;蒙顶甘露茶中酯型儿茶素组分表儿茶素没食子酸酯和表没食子儿茶素没食子酸酯的含量分别为3.39%、6.97%;检测到51 种香气组分,主要是醇类（12 种）和酯类（9 种）,其中芳樟醇、β-紫罗兰酮、橙花叔醇和反-橙花叔醇含量较高,这些组分共同成为嫩香持久馥郁的香气物质基础。     

淡丰后梅梅仁成分分析、油脂组成和蛋白质的物理性质

以淡丰后梅（Prunus mume cv. Danfenghou）梅仁为材料,分析其常量化学成分,研究梅仁油脂及蛋白的功能特性。结果表明,梅仁的粗油脂含量为（31.49±3.39）%,粗蛋白含量为（32.44±0.14）%。油脂中脂肪酸组成以油酸（62.599 74%）和亚油酸（28.959 75%）为主,二者总量高达91.3%,不饱和脂肪酸的相对含量为92.599 51%。VE中β-生育酚含量为0.32 mg/g,γ-生育酚含量为0.10 mg/g。氨基酸分析及评分表明,梅仁蛋白的氨基酸种类多且含量丰富,限制性氨基酸为赖氨酸,含量最高的氨基酸为谷氨酸。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,梅仁蛋白由6 条亚基组成,分子质量范围为15～47 kD。梅仁蛋白的等电点为pI 5.0,梅仁蛋白的乳化性为0.039,乳化稳定性为42.63 min,起泡性为37.04%,泡沫稳定性为41.67%。加热组样品的疏水性数值为408.29±1.09,高于未加热组样品（295.21±12.38）。     

云南盘鮈肌肉营养成分分析与营养评价

采用常规生化分析方法对云南盘鮈含肉率和肌肉营养成分进行测定分析。结果表明：云南盘鮈含肉率为（66.62±4.46）%,肌肉中水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分的含量分别为（76.10±0.91）%、（20.24±0.05）%、（1.32±0.17）%和（1.30±0.02）%（以鲜质量计）。肌肉中含18 种氨基酸,总量为（79.78±4.22）%,8 种人体必需氨基酸总量为（33.05±1.62）%（以干质量计）,占氨基酸总量的41.43%,必需氨基酸的构成比例符合联合国粮农组织/世界卫生组织的标准;云南盘鮈的第一限制性氨基酸为色氨酸,必需氨基酸指数为68.09,4 种鲜味氨基酸总量为30.47%（以干质量计）,肌肉中单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、二十碳五烯酸＋二十二碳六烯酸在总脂肪酸中含量分别为（27.93±2.67）%、（40.28±2.54）%和（29.23±2.77）%;肌肉矿物元素含量丰富,微量元素中锌含量较高。云南盘鮈营养价值较高、味道鲜美,具有较高的开发利用价值。