壳寡糖对自由基的清除及对N9小胶质细胞的保护作用

目的：研究壳寡糖(COS)的抗氧化作用及其对脂多糖(LPS)损伤N9 小胶质细胞的保护作用。方法：首先在细胞外检测COS 对DPPH 自由基、H2O2 和羟自由基的清除作用,然后采用LPS 诱导建立体外培养N9 小胶质细胞活化模型,将细胞分为正常对照组、LPS 模型组、LPS+COS 给药组(COS 质量浓度分别为50、100、200、300、400μg/mL)。观察各组细胞的形态;检测各组细胞培养液中一氧化氮(NO)含量;用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平并观察其荧光图像;用DNA 损伤实验观察各组细胞凋亡情况。结果：COS 能有效清除DPPH 自由基和羟自由基,对H2O2 无清除能力;COS 能减少活化的N9 细胞数量并明显降低LPS 活化的N9 细胞培养液中NO 水平,降低细胞内ROS 水平,减少LPS 诱导的细胞凋亡,保护N9 小胶质细胞。结论：COS 在N9 小胶质细胞内外均具有较强的抗氧化能力,能保护N9 小胶质细胞,减轻N9 小胶质细胞的氧化损伤。     

虫草素对脂多糖诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用研究

目的:研究虫草素对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用。方法:培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用LPS(1μg/m L)激活巨噬细胞,同时给予0.1~10μmol/L的虫草素处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,Griess法检测细胞一氧化氮(NO)释放量,酶联免疫吸附分析实验(ELISA)分别检测三种细胞炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的释放水平,采用Fluo-3/AM染色法以流式细胞仪测定胞浆游离钙离子浓度([Ca~(2+)]i)的变化,采用水杨酸法考察虫草素对羟自由基(·OH)清除作用,L-酪氨酸法检测其对过氧亚硝酸根离子自由基(ONOO-)清除作用,邻苯三酚自氧化法检测其对超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除作用。结果:虫草素在0.1~10μmol/L浓度范围内可显著抑制LPS激活的RAW264.7巨噬细胞释放NO及3种炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),同时对细胞存活率无显著影响;虫草素(10μmol/L)可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞内[Ca~(2+)]i水平异常升高;此外,虫草素对·OH、ONOO-和O_2~-·自由基具有显著清除作用。结论:虫草素可抑制LPS激活的RAW264.7巨噬细胞释放NO及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6,这可能与其抑制了细胞内[Ca~(2+)]i的增高及清除·OH、ONOO-和O_2~-·自由基有关。虫草素可能对巨噬细胞过度激活引起的炎症相关疾病具有一定的防治作用。     

石榴籽油自由基清除能力及对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

以吩嗪硫酸甲酯-还原型辅酶I-氮蓝四唑(PMS-NADH-NBT)系统产生超氧阴离子自由基和羟基自由基诱导DNA及蛋白质氧化损伤为模型,考察石榴籽油对超氧阴离子自由基的清除能力以及对DNA和蛋白质氧化损伤的保护作用。通过建立H2O2诱导PC12细胞损伤氧化应激损伤模型,采用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率和细胞损伤程度,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)试剂盒测定细胞的氧化应激变化,研究不同浓度石榴籽油对H2O2刺激的PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:石榴籽油清除自由基的能力以及对DNA和蛋白质损伤的保护作用随着石榴籽油浓度的升高而增强。石榴籽油在0.5~4 mg/m L质量浓度范围能显著提高H2O2损伤的PC12细胞存活率,显著减少H2O2刺激的PC12细胞中MDA的生成,提高SOD活力及CAT活性。石榴籽油在体外具有清除自由基,减轻羟基自由基诱导DNA及蛋白质氧化损伤以及保护PC12细胞对抗氧化损伤的作用。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H2O2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H2O2进行大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）水平,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明：经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50 μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为（62.71±3.86）%、（73.56±4.51）%和（82.62±5.25）%;小米抗氧化肽能显著提升H2O2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H2O2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡（P＜0.05）,其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论：小米抗氧化肽对H2O2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

野阳合花色苷提取物的抗氧化活性

目的：研究野阳合花色苷提取物的体外抗氧化活性,建立过氧化氢（H2O2）诱导的中国仓鼠肺细胞 （V79-4细胞）氧化损伤模型,初步评价其抗氧化应激作用。方法：采用高效液相色谱-质谱联用分析野阳合花色 苷组成;测定花色苷提取物对2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力;建 立H2O2诱导V79-4细胞氧化损伤模型,分别采用噻唑蓝、硫代巴比妥酸反应产物和荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光黄 双乙酸钠测定花色苷提取物对V79-4细胞氧化损伤的保护作用。结果：野阳合提取物含有4 种花色苷,结合保留时 间和质谱数据等信息,推测分别为矢车菊素-3-半乳糖苷、矢车菊素-3-（6”-香豆酰）葡萄糖苷、芍药色素-3-葡萄 糖苷和芍药色素-3-（6”-香豆酰）葡萄糖苷;花色苷提取物对ABTS＋·和DPPH自由基有良好的清除效果,半抑制 浓度分别是（1.72±0.26） μg/mL和（0.74±0.24） μg/mL,清除能力优于阳性对照水溶性VE;细胞氧化损伤模型 中,50～200 μg/mL的花色苷提取物预处理H2O2诱导V79-4细胞氧化损伤,能明显抑制细胞存活率的下降和脂质过 氧化,并降低损伤后胞内活性氧簇水平。结论：野阳合花色苷提取物具有良好的体外自由基清除能力,并对H2O2 诱导的V79-4细胞氧化损伤具有保护作用。     

不同纯度茶多酚和茶黄素的抗氧化活性

采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除实验和氧化损伤酵母细胞实验模型,对不同纯度的茶多酚和茶黄素的抗氧化活性进行比较研究。结果表明,茶多酚和茶黄素均对DPPH自由基具有一定的清除能力。氧化损伤酵母细胞实验结果表明,茶多酚和茶黄素对酵母细胞氧化损伤具有一定的保护作用,且在一定浓度范围内其保护能力呈剂量依赖关系。98%茶多酚对DPPH自由基清除率最高;60%茶黄素和90%茶多酚对H2O2氧化损伤酵母细胞保护作用相当;60%茶黄素对紫外氧化损伤酵母细胞保护作用最强。茶多酚和茶黄素具有一定的体外和细胞抗氧化活性,且不同方法测得的抗氧化活性存在一定的差异。     

川芎有效成分的体外抗氧化研究

探讨研究了天然药用植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)根茎内有效成分—川芎嗪的体外自由基清除活性,以及对过氧化氢诱导的内皮细胞氧化损伤的抑制作用。流式细胞仪检测川芎嗪对H2O2诱导内皮细胞内活性氧(ROS)产生的抑制作用;Griess法测定川芎嗪对一氧化氮(NO)的清除能力;比色法测定川芎嗪对羟自由基(.OH)、过氧化氢(H2O2)、DPPH自由基(.DPPH)及脂质过氧化的清除能力。川芎嗪可抑制H2O2诱导的内皮细胞内ROS的产生(P0.05),具有显著的OH.清除能力,并且对DPPH.、NO、H2O2及脂质过氧化反应均具有一定的清除能力。具有一定的自由基清除活性并可抑制内皮细胞的氧化损伤。     

茶多酚协同荷叶碱的抗氧化活性及其对结肠癌细胞的抑制作用

目的：探讨茶多酚协同荷叶碱的体外抗氧化活性及茶多酚单独对结肠癌细胞Caco-2的毒性作用。方法：采用二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）法检测茶多酚、荷叶碱及二者协同对DPPH自由基、ABTS＋•的清除作用;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测茶多酚、荷叶碱及二者混合物对Cu2＋/H2O2体系诱导的牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）氧化损伤的保护作用;采用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法,AO/EB、DAPI荧光染色法检测茶多酚对Caco-2细胞的毒性。结果：茶多酚、荷叶碱具有清除DPPH自由基、ABTS＋•及保护BSA蛋白氧化损伤的作用且呈剂量依赖性,两者之间存在显著的协同效应;1 mg/mL茶多酚作用24 h能显著降低Caco-2细胞活力,诱导Caco-2细胞发生凋亡。结论：茶多酚能有效地清除DPPH自由基、ABTS＋•,抑制蛋白氧化,且与其他活性成分具有协同效应;茶多酚能抑制Caco-2细胞的活力。     

蛹、米虫草多糖含量及抗氧化活性比较研究

旨在研究不同来源北虫草子实体多糖的含量差异以及分级醇沉各组分的抗氧化活性差异。通过热水浸提、分级醇沉法分别获得蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)、米虫草多糖(Cordyceps oryzae polysaccharide,COP);以DPPH自由基清除率、羟基自由基(·OH)清除率和铁离子还原能力法(ferric reducing antioxidant power,FRAP)评价两种多糖的体外抗氧化活性;构建H_2O_2致PC12细胞氧化损伤模型,比较两种虫草多糖对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。不同乙醇浓度沉淀获得的虫草多糖中,米虫草多糖提取率及含量高于蛹虫草多糖;米虫草多糖对DPPH自由基、·OH清除率分别可达66.43%、69.22%,蛹虫草多糖可达73.69%、73.50%;FRAP法测得蛹虫草多糖抗氧化能力较强。细胞试验结果表明,氧化损伤的PC12细胞经两种多糖处理后细胞存活率皆有不同程度的提升,呈浓度依赖性,蛹虫草多糖组细胞存活率最高可达90.45%,米虫草多糖组细胞存活率最高可达82.62%。以蚕蛹为培养基的蛹虫草在多糖提取率及含量方面低于以大米为培养基的米虫草,但其多糖对自由基清除能力及PC12细胞保护作用优于米虫草多糖,具有较好的抗氧化能力。     

不同形态硒与VE联用对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究不同形态硒化合物(有机硒:L-硒甲基硒代半胱氨酸;无机硒:亚硒酸钠)单独使用及其与VE联合使用后对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生氧化应激损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,将HUVECs随机分为7组:对照组、H_2O_2组、L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se MSC)组、亚硒酸钠(sodium selenite,SS)组、VE组、L-Se MSC+VE联用组、SS+VE联用组。经不同样品干预处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HUVECs存活率;检测各组细胞内脂质氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性的变化。结果:各处理组HUVECs存活率之间没有显著差异;与H_2O_2组比较,0.1 mg/L亚硒酸钠、10 mg/L VE处理能使HUVECs内MDA生成量显著减少,SOD和GSH-Px活性显著升高,并且亚硒酸钠和VE联合使用在细胞水平上具有显著的协同作用,而L-Se MSC组与对照组无显著差异。结论:亚硒酸钠和VE均可保护由H_2O_2诱导引起的HUVECs氧化损伤,提高HUVECs抗氧化能力,并且亚硒酸钠和VE联用具有明显的协同抗氧化作用。     

Attenuation of iNOS and COX2 by blueberry polyphenols is mediated through the suppression of NF-κB activation

Treatment of BV2 microglial cells with blueberry extracts has been shown to be effective in reducing lipopolysaccharide (LPS)-induced proinflammatory mediators such as nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1β), inducible NO synthase (iNOS), and cyclooxygenase 2 (COX2). The current study explored the possibility that the down-regulation of iNOS and COX2 by blueberry extracts was mediated through NF-κB signaling pathway. A column-purified fraction of polyphenol-enriched blueberry extract (PC18) was used to treat LPS-activated BV2 cells. The results thus far showed that blueberry polyphenols significantly suppressed iNOS and COX2 promoter activities. In addition, blueberry polyphenols inhibited NF-κB nuclear translocation in LPS-activated BV2 cells. These findings suggested that the beneficial effects of blueberries may involve direct modulation of oxidative stress and/or inflammatory signaling cascades.     

水杨酸和H2O2处理对鲜切青花菜抗氧化特性的影响

为研究外源水杨酸（salicylic acid,SA）和过氧化氢（H2O2）对鲜切青花菜的保鲜作用,用0.5 mmol/L SA和0.15 mmol/L H2O2分别浸泡处理10 min和5 min后,于20 ℃贮藏4 d期间测定抗氧化酶活性、活性氧水平、抗氧化物质含量和衰老生理指标等变化。结果发现,SA和H2O2处理可以有效保持鲜切青花菜感官品质;与贮藏期间的对照蒸馏水处理相比,SA处理的超氧化物歧化酶（SOD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化物酶（POD）活性较大,过氧化氢酶（CAT）活性较小,超氧阴离子自由基（O2¯·）生成速率较小,H2O2含量较高,抗坏血酸（AsA）和类胡萝卜素（Car）含量较高,丙二醛（MDA）含量较低,叶绿素（Chl）和蛋白质（Pro）含量较高;H2O2处理的SOD、APX、POD和CTA活性较大,O2¯·生成速率和H2O2含量较低,AsA和Car含量较高,MDA含量较低,Chl和Pro含量较高;SA处理对这些抗氧化特性各指标的影响大于H2O2处理。结果表明,外源SA和H2O2处理可以有效延缓鲜切青花菜衰老和保持感官品质,作用机制与诱导改善抗氧化酶活性,减轻活性氧生物氧化有关;SA处理可抑制贮藏前期CAT活性,提高内源H2O2水平,0.5 mmol/L SA的保鲜效果好于0.15 mmol/L H2O2。     

血根碱清除自由基及抑制生物大分子氧化的作用

目的：评价血根碱的体外抗氧化活性,为血根碱作为天然抗氧化剂的应用提供理论依据。方法：采用DPPH自由基清除法测定血根碱的体外抗氧化能力;采用Cu2+/H2O2和AAPH体系诱导牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）氧化损伤和羰基化损伤模型,研究血根碱对上述损伤的保护作用;采用TBA法分别测定血根碱对FeSO4诱导的大豆卵磷脂氧化损伤的抑制作用,及AAPH诱导的鲱鱼精DNA氧化损伤的抑制作用。结果：血根碱可有效清除DPPH自由基,且呈浓度依赖性,在100 μmol/L时清除率为85.94%;1～100 μmol/L的血根碱可显著保护Cu2+/H2O2及AAPH体系诱导的BSA损伤;10～100 μmol/L的血根碱可显著保护由Cu2+/H2O2体系诱导的BSA蛋白羰基化,当浓度为0.1～100 μmol/L时可显著保护由AAPH诱导的BSA蛋白羰基化;血根碱浓度在6.25～100 μmol/L范围内均可显著抑制由FeSO4及AAPH诱导的大豆卵磷脂及鲱鱼精DNA的氧化损伤。结论：血根碱可有效清除自由基及保护蛋白氧化损伤和羰基化损伤,亦可显著抑制脂质及DNA氧化损伤。     

川皮苷体外抗氧化活性及对肿瘤细胞生长抑制作用

目的：研究川皮苷的抗氧化活性及对肿瘤细胞生长抑制作用。方法：在体外测定川皮苷对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）和超氧阴离子自由基（O2－•）的清除能力;通过四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法筛选对川皮苷作用敏感的肿瘤细胞株,并用倒置显微镜和透射电镜观察敏感细胞株在川皮苷作用之后细胞结构的变化。结果：川皮苷在体外对DPPH自由基、•OH和O2－•都具有清除能力,其中对•OH的清除能力突出。同时,人胰腺癌细胞株PANC-1对川皮苷作用敏感,即川皮苷可抑制PANC-1细胞的生长;透射电镜观察发现川皮苷可使PANC-1细胞的细胞核膜破裂,胞质溶出,形成凋亡小体。结论：川皮苷具有显著的体外抗氧化活性,并且可以抑制PANC-1细胞的增殖,在功能食品等领域具有良好的应用前景。     

枫香叶正丁醇提取物抗氧化活性及其对金橘的保鲜效果

为追踪枫香叶正丁醇提取物的体外抗氧化活性及其对果品的采后贮藏保鲜效果,以枫香叶正丁醇提取物（枫香叶依次经醇提、正丁醇萃取、大孔树脂层析、50%乙醇溶液洗脱后所得产物）为材料,分别研究其对1,1-二苯基-2-苦基肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2 － ·）的体外清除能力和还原力;并用不同质量浓度（10、30、50 mg/100 mL）的枫香叶正丁醇提取物对金橘果实进行浸泡处理,室温（14～16 ℃）贮藏,每3 d测定金橘果实的质量损失率、腐烂率、硬度、可溶性固形物（total solublesolids,TSS）含量、可滴定酸（titratable acid,TA）含量、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、VC含量等果实的品质和生理指标。结果表明,枫香叶正丁醇提取物的体外清除DPPH自由基、·OH、O2－·能力和还原力较强;可以减少金橘果实腐烂、质量损失和MDA含量,减缓果实硬度下降和TSS、TA、VC含量的降低,增强SOD的活性,在金橘果实的贮藏应用上有较好的前景。     

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。     

超声波处理对北五味子多糖抗氧化活性的影响

利用超声波对北五味子多糖进行改性,从而提高其抗氧化活性。以羟自由基（·OH）及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,考察了超声波处理功率、超声波处理时间对北五味子多糖抗氧化活性的影响。结果表明：超声波处理功率、处理时间对北五味子多糖抗氧化活性有显著影响。最佳超声波处理功率为330 W、处理时间为20 min。经此条件处理后,·OH清除率由74.34%提高到87.05%,半抑制浓度（IC50）为10.7 mg/mL;DPPH自由基清除率由84.43%提高到95.05%,IC50＜2 mg/mL。适当的超声波处理可以提高北五味子多糖的抗氧化活性。