L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌株的构建 及其培养条件研究

L-天冬氨酸α-脱羧酶以L-天冬氨酸为底物, 脱去α-羧基后生成β-丙氨酸.利用PCR 扩增技 术, 将Escherichia coli DH5α中的PanD 基因克隆后连接到pET28c(+)载体上, 先转化E .coli DH5α中, 经过50 μg/mL 卡那霉素抗性筛选和酶切、测序验证后, 转化表达菌株E .coli BL21 (DE3), 得到具有L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的工程菌株E .col i BL21(DE3)/ pE T28c(+)-panD . 经乳糖诱导该基因能有效表达C-末端具有组氨酸标签的L-天冬氨酸α-脱羧酶.通过对乳糖诱导时 间、乳糖诱导质量浓度、诱导温度、诱导菌龄和培养基诱导初始pH 值等发酵条件的优化, 得到最佳 培养条件为:乳糖诱导时间20 h , 乳糖质量浓度12 g/L , 诱导温度为35 ℃, 诱导菌龄为3 .5 h , 诱导 培养基初始pH 5 .5 , 通过对转化产物β-丙氨酸的检测结果分析显示, 工程菌株E .col i BL21 (DE3)/pE T28c(+)-panD 在优化条件下, 酶活力达186 U .     

抗潮霉素B的水稻原生质体的再生

本实验室构建的具有潮霉素Ｂ（ＨＰＴ）抗性基因、卡那霉素抗性基因（ＫａｎＲ）和虫萤光素酶基因（ＬＣＣ）的质粒ｐＴＨＬ２７ＤＮＡ，用聚乙二醇（ＰＥＧ）法导入到水稻广亲和品种０２４２８的原生质体细胞内．研究原生质体抗性筛选和原生质体再生的条件．结果，在含有２５μｇ／ｍｌ潮霉素Ｂ和１００ｎμｇ／ｍｌ卡那霉素的培养基ＫＰＲ和Ｎ６内连续处理４星期，可以很好地除去非转化的敏感的原生质体再生细胞，然后在无抗菌素选择压力的培养基中，转化细胞可再生成小植株．     

珍珠花胚性愈伤组织的诱导

对珍珠花体细胞胚的诱导条件进行了研究 ,在含 0 .5 m g· L- 1 2 ,4- D的 MS培养基中诱导出黄色胚性愈伤组织 ,这种愈伤组织继代在无激素 MS培养基中可分化出胚状体 ,此胚状体进一步发育成试管苗     

一株菲降解细菌的分离、鉴定及其降解特性研究

从胜利油田附近石油污染土壤采集土样,以菲为唯一碳源的选择性培养基分离筛选到一株菲高效降解菌SLY-3,根据形态、生理生化特性及16S rDNA比对初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属,并对其降解菲的特性进行了研究。结果表明,菌株SLY-3在菲浓度为80 mg·L-1条件下,28℃振荡培养96 h,对菲的降解率达到93.73%;在菲浓度为200 mg·L-1时,培养96 h后的菲降解率为98.36%。同时发现菲的降解程度与细菌数量的增长呈正相关关系。     

两种不同选择标记的转化效率比较

为了弄清两个选择标记在相同条件下的转化效率,为转基因选择遗传标记时提供参考,以优良恢复系明恢63为受体材料,采用农杆菌介导的遗传转化法,分别以hpt和bar基因为选择标记进行了转化.结果显示:1 500块胚性愈伤共培养后获得214块抗性愈伤,转化效率为14.3%;5 400块胚性愈伤共培养后获得156块抗性愈伤,转化效率为2.9%;两者的分化率分别为79.0%和80.7%.此外,以hpt和bar为选择标记,从胚性愈伤诱导到获得转基因植株分别需要75天和125天.因此,以hpt为选择标记的遗传转化,比较适合基因功能验证和共培养培育无选择标记水稻植株;如果是培育商品化的转基因水稻植株,则最好以bar为选择标记基因.     

油菜胚性愈伤组织的诱导及植株再生

以油菜下胚轴为外植体,研究其离体培养及试管苗再生途径,为建立油菜的遗传转化及其体细胞杂交体系奠定基础.结果表明,油菜下胚轴在不同诱导培养基中的出愈率不同,MS+2,4-D 2.0 mg/L培养基的出愈率最高,达90.0%.愈伤组织在MS+2,4-D 2.0 mg/L继代培养基易于形成胚性愈伤组织.胚性愈伤组织在MS+IAA0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L上高频率再生植株.组织学观察发现,油菜愈伤组织主要通过体细胞胚胎发生而再生植株.     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以周麦18成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.结果表明,在Ms+2,4-D(3.0mg/L)+6-BA(0.5mg/L)+VB1(2.0mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为70.8%,但愈伤组织质量较差.将其在降低2,4-D浓度和添加ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤组织.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0mg/L)+N从(0.3mg/L)中,分化率为72.33%.通过研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体小麦组织培养的再生体系.     

八氢番茄红素合成酶基因植物表达载体的构建及对人参的遗传转化

将八氢番茄红素合成酶基因重组于植物双元表达载体pBin438,得到重组质粒pBin438PSY.用冻融法将其导入农杆菌EHA101中,采用叶盘法转化人参愈伤组织,经诱导与筛选,获得了潮霉素抗性植株。提取抗性植株总DNA,通过PCR扩增和PCR-Southern杂交检测,筛选出了整合有外源基因的抗性细胞系。为进一步研究八氢番茄红素合成酶基因在人参中的表达及生物学功能的研究奠定了基础。     

烟草潮霉素抗性浓度的筛选与研究

潮霉素是植物基因工程研究中使用较为广泛的转化体筛选抗生素,本文对烟草种子萌发及叶片外植体组织再生进行潮霉素抗性浓度筛选与研究.实验结果表明,培养基是否添加潮霉素及潮霉素浓度的大小对烟草的种子萌发率没有影响,但对种苗发育和烟草叶片组织的分化具有明显的抑制作用.烟草K326种苗的筛选浓度极限为20mg/L,而其叶片直接诱导分化再生苗的潮霉素筛选浓度最高也可达20mg/L.     

两种不同选择标记的转化效率比较

为了弄清两个选择标记在相同条件下的转化效率,为转基因选择遗传标记时提供参考,以优良恢复系明恢63为受体材料,采用农杆菌介导的遗传转化法,分别以hpt和bar基因为选择标记进行了转化．结果显示：1500块胚性愈伤共培养后获得214块抗性愈伤,转化效率为14．3％;5400块胚性愈伤共培养后获得156块抗性愈伤,转化效率为2．9％;两者的分化率分别为79．0％和80．7％．此外,以hpt和bar为选择标记,从胚性愈伤诱导到获得转基因植株分别需要75天和125天．因此,以hpt为选择标记的遗传转化,比较适合基因功能验证和共培养培育无选择标记水稻植株;如果是培育商品化的转基因水稻植株,则最好以bar为选择标记基因．     

湿式过氧化物氧化法处理乙酰乙酸乙酯废水

采用湿式过氧化物氧化法(CWPO)处理乙酰乙酸乙酯废水,研究了反应温度、反应时间、催化剂和双氧水的用量对化学需氧量CODCr去除率的影响,并建立了相应的动力学模型。实验结果表明:在反应时间为150min,反应温度为90℃,铁用量为10mg·L-1,H2O2浓度31.5mg·L-1的条件下,1200mg·L-1左右的乙酰乙酸乙酯废水CODCr的去除率可达到98.5%以上。过氧化物湿式催化氧化乙酰乙酸乙酯的表观动力学方程为:-dCdt=6.205×exp(-17720/RT)C。     

基于组合试验设计的两种植物愈伤组织的培养基

采用二次回归正交组合设计,进行西洋参愈伤组织、胡萝卜愈伤组织生长率的研究。试验因子为3种植物激素:2,4-D、IAA和ZT。每个因子设5水平,共17个处理。首先利用SPSS统计分析软件对生长率试验结果进行参数回归分析和统计检验。然后用Matlab软件分别绘制2种植物愈伤组织生长率趋势图。最后分别选择出有利于西洋参愈伤组织生长、不利于胡萝卜愈伤组织生长的培养基(MS+2,4-D 1.14 mg/L+IAA 1.37 mg/L+ZT 0.47 mg/L),有利于胡萝卜愈伤组织生长、不利于西洋参愈伤组织生长的培养基(MS+2,4-D 3.30 mg/L+IAA 0.55 mg/L+ZT 0.29 mg/L)和同时满足两种植物愈伤组织生长的培养基(MS+2,4-D1.67 mg/L+IAA 0.98 mg/L+ZT 0.47 mg/L)。     

银杏叶片愈伤组织培养及光暗条件对黄酮含量的影响

以银杏嫩叶为外植体,在添加不同种类和浓度激素的MS培养基上进行愈伤组织诱导研究,同时分析光暗条件对愈伤组织生长和黄酮含量的影响。愈伤组织生长后,用分光光度比色法分析测定银杏愈伤组织黄酮含量。实验结果：在光照条件下,添加激素6-BA1.0mg/L和NAA2.0 mg/L的MS培养基中,诱导形成的愈伤组织生长最好,黄酮含量较高。     

大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性

将大豆Em（LEA1）基因构建到原核表达载体pET28-Em中．转化大肠杆菌，经SDS—PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定．结果显示，经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白．这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性．在含800m mol／L NaCl培养基中，含空载体的对照菌生长迟滞期约为50h，含Em基因的重组菌生长迟滞期为32h，表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性．在此基础上，构建了含Em基因的真核表达载体pBI—Em．再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草．PCR及RT-PCR结果显示，大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中，并能正常转录．转化率为53％．转Em基因烟草植株在含有质量分数1．5％NaCl的培养基中生长状况好于对照植株，叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片．结果表明，大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性．     

林茜草愈伤组织诱导与组培苗的快速繁殖研究

研究林茜草的茎段培养分化技术,探索林茜草快速繁殖适合培养条件;摸索出诱导林茜草愈伤组织的最佳培养方法,为林茜草人工栽培用以提取其所含代谢药用成分的工业化生产提供原材料.根据植物组织培养方法,将林茜草茎段用不同浓度的生长调节剂培养基配方培养,使其诱导林茜草的茎、叶、进行愈伤组织诱导.结果表明,MS＋2.4-D 2mg.L-1＋KT 0.1mg.L-1培养基适于诱导愈伤组织发生;MS＋6-BA 1.5mg.L-1培养基可诱导林茜草茎段能迅速分化为幼苗;MS＋2.4-D 2mg.L-1＋KT 0.1mg.L-1培养基与MS＋6-BA 1.5mg.L-1培养基先后使用,可诱导林茜草生根形成完整植株.     

中国南海软珊瑚Sinularia sp.化学成分研究

通过柱层析分离,从中国南海软珊瑚Sinulariasp.中分离得到两个西松烷二萜成分。利用IDNMR、2DNMR(1H1HCOSY,HMQC,HMBC)技术结合IR、EI(ESI)MS谱分析,确定了化合物的结构。经鉴定两个化合物分别为带有一个异丙烯基的西松烷二萜sinulariolD(化合物1)和开环西松烷二萜mayolideA(化合物2)。体外抗肿瘤活性筛选试验中,化合物1对所选肿瘤细胞株显示中等的抑制活性。     

大豆愈伤组织的诱导与离体培养

本研究选用6个大豆品种，以大豆下胚轴和子叶为供试外植体，探讨了激素、基因型及外植体的差异对形成愈伤组织的影响，结果表明，诱导愈伤组织合适的培养条件是：MS＋2，4-D2．0mg／L＋6-BA0．5mg／L＋蔗糖3%＋琼脂0．8％，所有的基因型均能形成愈伤组织，但不同基因型诱导愈伤组织能力有差异，以中黄十三最高；不同外植体诱导愈伤组织能力也不一样，下胚轴的诱导能力比子叶强。     

硝基苯生产废水的处理研究

采用Hz-816吸附树脂对硝基苯生产废水中的硝基苯（浓度为1800mg·L^-1）进行了吸附行为研究．静态和动态实验结果表明,吸附平衡等温线与Freundlieh模型拟合良好．测得热力学参数分别为吸附过程热效应△H=-11．66kJ／mol;熵变△S=27J／mol·K,以及温度288K、298K和308K时的自由能变为：△G298=-3．197kJ／mol,△G308=-3．366kJ／mol,△G318=-3．418J／mol．该树脂对硝基苯浓度达1800mg·L^-1的废水具有良好的吸附能力,废水经吸附以后硝基苯浓度可降低至2．5mg·L^-1．