奶牛乳腺炎病原菌的中草药体外抑制试验

选用10味中草药和2种中药复方制剂对奶牛乳腺炎6种主要病原菌进行体外抑菌实验,并对不同提取方法的抑菌效果进行了比较.结果显示受试中草药及复方对6种病原菌有较强的体外抑菌作用.研究确认了病原菌对各中草药及复方的敏感度;测定了最小抑菌浓度（MIC）和最小抑菌浓度（MBC）;结果表明,黄芩、金银花、瓜蒌以及复方1和复方2的醇提物抑菌效果显著优于相应的水提物.     

小白杏软腐病病原菌的分离鉴定

小白杏软腐病腐烂组织中分离纯化出1株病原菌,并应用rDNA-ITS分子标记分析和传统真菌形态学鉴定相结合的方法,对病原菌进行了鉴定。结果表明:引起小白杏软腐病的病原菌为半知菌亚门(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Hyphomycetales)、丛梗孢科(Moniliaceae)、曲霉属(Aspergillus)、白曲霉(Aspergillus niger)。     

火龙果病原菌的分离鉴定及百里酚的抑菌研究

目的 分离鉴定望谟县火龙果病原菌, 并探究百里酚对其的抑菌效果。方法 通过组织分离法、科赫法则、形态学结合ITS序列分析, 确定火龙果软腐病病原菌的种类。通过碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色探究百里酚对病原菌细胞膜的破坏作用。结果 引起火龙果软腐病病原菌为水稻恶苗病菌(Fusarium fujikuroi, F. fujikuroi)和弓形镰刀菌(Fusarium arcuatisporum, F. arcuatisporum)。体外实验表明, 两株病原菌对百里酚均有较高的敏感性, 其抑菌率呈剂量浓度依赖效应。百里酚对致病菌F. fujikuroi和F. arcuatisporum的抑制率分别达92.15%和92.42%, 半最大效应浓度(concentration for 50% of maximal effect, EC50)分别为0.2005 mg/mL和0.1560 mg/mL。PI染色发现, 百里酚通过破坏菌丝细胞膜结构完整性发挥其抑菌作用, 使得百里酚处理后菌丝荧光强度明显高于对照。结论 百里酚能较好地抑制火龙果2株病原菌的菌丝生长, 抑制火龙果软腐病发生, 可为火龙果病害防控提供一定理论参考。     

采后蓝莓果实表面病原菌的分离鉴定及PCR检测

以采后贮藏过程中自然腐败变质的蓝莓果实为材料,采用传统纯培养法和平板划线法对蓝莓果实表面致腐优势菌进行了分离与形态学鉴定,最终确定葡萄孢霉（Botrytis cinema）为主要病原菌。采用基因组DNA提取试剂盒法提取葡萄孢霉的DNA,并筛选具有特异性的引物,通过聚合酶链式反应（PCR）对葡萄孢霉特定的DNA片段进行扩增,得到具有特异性的目的基因,对其进行分子生物学的特异性鉴定,并对其检测条件进行优化。最终得到具有特异性的引物序列为Bc F-TGTAATTTCAATGTGCAGAATCC;BcR-TTGAAATGCGATTAATTGTTGC,最适的扩增引物浓度为0.25μmol/L,PCR扩增的最适退火温度为60℃。该方法可有效提高蓝莓病原菌的检测效率,可将其应用于实践中,为蓝莓的贮藏保鲜提供理论依据和技术指导。      

芋艿采后主要病原菌分离鉴定及桧木醇抑菌效果

为明确芋艿采后腐烂的主要病原菌种类,研究桧木醇对病原菌的抑制效果,为采后病害防治提供依据。本实验通过组织分离法,从采后自然发病的奉化芋艿上分离纯化主要病原真菌,基于科赫氏法则,进行病原菌致病性检测,并通过形态观察和真菌rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定;在此基础上进一步探讨桧木醇对病原菌的抑制效果,研究桧木醇对病原菌菌丝生长、孢子萌发、丙二醛浓度、亚细胞结构形态的影响。结果表明,贮藏过程中引起芋艿腐烂变质的主要病原菌经鉴定为镰刀菌属(Fusarium sp.)和可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae);桧木醇处理可抑制此两种病原菌菌丝生长和孢子萌发,加剧菌丝膜脂过氧化,并破坏菌丝体亚细胞结构,抑菌效果明显,在控制芋艿采后病害方面具有较好的应用前景。     

玉露香梨采后病原菌分离鉴定及其生物学特性研究

真菌侵染造成的腐烂是影响玉露香梨采后贮藏的主要因素。为明确导致玉露香梨采后腐烂的病原菌种类及其生物学特性,对其采后病原菌进行分离纯化,结合形态学和分子生物学特征确定其种类,并明确在不同温度、pH、碳源和氮源条件下病原菌的生长情况。结果表明:Alternaria alternata、Aspergillus、Penicillium polonicum和Fusarium是导致玉露香梨采后腐烂的主要病原菌。Alternaria alternata和Fusarium的最适生长温度为25~30 ℃,而Aspergillus和Penicillium polonicum最适生长温度分别为25~35 ℃和20~25 ℃;Alternaria alternata和Aspergillus的最适生长pH分别为6~10和7,而Penicillium polonicum和Fusarium最适生长pH则均为5~7;Alternaria alternata和Penicillium polonicum的最适生长碳源分别为葡萄糖和甘露醇,Aspergillus和Fusarium最适生长碳源为麦芽糖;Alternaria alternata、Aspergillus和Fusarium最适生长氮源为牛肉膏,而Penicillium polonicum最适生长氮源为蛋白胨。     

冬季甜瓜腐烂病原菌的分离与鉴定

从冬季贮存甜瓜的腐烂组织中分离病原菌,并对其类型进行检测分析。利用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基和溶菌肉汤(LB)培养基培养,依据微生物形态特性,真菌的26S rRNA 序列和细菌的16S rRNA 序列比对以及系统发育进化分析等分子生物学方法,共分离到22 株菌种,其中真菌13 株：包括青霉2 株、链格孢4 株、白地霉4 株、酵母3 株(梅奇氏酵母2 株、毕赤酵母1 株);细菌9 株：包括沙雷氏菌5 株,丁香菌1 株,克雷伯菌、肠杆菌和芽孢杆菌各1 株。根据26S rRNA D1/D2 区序列比对和系统进化树结果显示,两株酵母菌121 和122 可能是梅奇氏酵母属潜在的新种。青霉和链铬孢是甜瓜腐烂致病菌,白地霉和沙雷氏菌是人体致病菌,表明目前甜瓜贮存方法需要进一步改进和完善。     

蓝莓采后主要病原菌的分离鉴定及肉桂精油抑菌效果

为明确山东泰安地区蓝莓采后主要致腐病原菌及肉桂精油对其抑菌效果,从自然腐烂的“晚丰”蓝莓上分离纯化优势菌株,采用传统真菌形态学鉴定方法结合rDNA-ITS序列分析方法进行鉴定,并采用体外熏蒸抑菌实验研究肉桂精油对几种主要致病菌的抑制效果。结果表明,泰安本地蓝莓分离到3 株病原真菌,分别为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、链格孢菌（Alternaria alternata）和灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）。体外抑菌实验表明,肉桂精油对尖孢镰刀菌、链格孢菌和灰葡萄孢菌均有较好的抑制效果,其最小抑菌浓度分别为60、30 μL/L和30 μL/L;通过扫描电镜可以看出,与对照组相比,经肉桂精油处理的3 种病原菌菌丝形态均受到严重破坏,发生凹陷、皱缩、粗糙等一系列变形现象。     

复方中草药治疗奶牛隐性乳腺炎试验

对CMT法检验为隐性乳腺炎阳性的奶牛进行中草药添加剂饲喂试验,并对乳腺炎发病率、产奶量、乳汁成分、抗生素及体细胞数含量进行跟踪考察分析。结果表明,所研制的3种复方中草药添加剂对奶牛乳腺炎均有明显的疗效,同时对提高产奶量、改善牛乳的品质和风味、降低牛乳中的体细胞数也有显著的效果。     

采后番木瓜果实炭疽病病原菌分离鉴定及其拮抗菌的筛选

从采后发病番木瓜果实上分离炭疽病的病原菌,同时采用平板对峙法和滤纸片法从番木瓜果园土壤中筛选得到炭疽菌的拮抗菌W-2。通过形态学和分子生物学分别鉴定了病原菌和拮抗菌相关种属,并测试了拮抗菌W-2的拮抗活性。结果表明:番木瓜炭疽病病原菌鉴定为番木瓜炭疽菌Glomerella magna,拮抗菌W-2为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)。拮抗菌W-2能够引起Glomerella magna菌丝体膨大和孢子畸形,且W-2浓度为1×10⁸ CFU/mL时,对菌丝生长抑制作用最强,浓度为1×10⁸和1×10⁹ CFU/mL时,对孢子萌发的抑制作用最为显著(P<0.05)。活体生防实验表明,浓度为1×10⁸ CFU/mL的W-2菌悬液处理能够有效控制番木瓜果实炭疽病病斑的扩展,并显著降低果实的发病率(P<0.05)。     

豫南烟区烟草青枯病危害调查及病原鉴定

2014年从豫南烟区信阳市罗山县、驻马店市确山县和遂平县共采集25个疑似青枯病烟草病样和10份病土,分离纯化出菌株26个,测序所得的序列与NCBI数据库中的Ralstonia solanacearum基因组序列进行Blast比对,相似度达到98%以上,对分离鉴定得到的烟草青枯病菌进行回接试验,表现出典型的青枯病症状,发病组织在TTC培养基上也同样分离得到典型的青枯菌菌落,证实病原为烟草青枯病病原。由此表明,豫南烟区确有烟草青枯病的发生。     

基于体细胞数的奶牛乳腺炎检测方法研究进展

介绍了检测奶牛乳腺炎的常用方法,然后就基于体细胞数的检测方法和技术进行了综述,并分析了这些方法存在的问题和不足,最后展望了基于体细胞数的检测方法和技术的发展趋势及应用前景。     

贵长猕猴桃腐烂菌的侵染途径及分离鉴定

为了明确贵长猕猴桃腐烂的病原菌种类及其可能的侵染途径,选取其花、鲜果及腐烂果为研究对象,进行菌种分离、形态学和分子生物学鉴定、致病性试验。 结果显示,从猕猴桃花中分离到6种真菌,分别为漏斗多孔菌（Polyporusarcularius）、平革菌属（Phanerochaetesp.）、曲霉属（Aspergillussp.）、橘青霉（Penicilliumcitrinum）、枝孢菌属（Cladosporiumsp.）、镰刀菌属（Fusariumsp.）;从猕猴桃鲜果果肉中分离到裂褶菌（Schizophyllumcommune）,鲜果果皮中分离到3种真菌,分别是蔡氏轮层炭壳菌（Daldiniachildiae）、链格孢菌（Alternariasp.）、烟曲霉（Aspergillusfumigates）;从腐烂果中分离到6种真菌,分别是小新壳梭孢菌（Neofusicoccumparvum）、拟茎点霉（Phomopsissp.）、尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum）和3株青霉菌（Penicilliumsp.）。 其中小新壳梭孢菌和拟茎点霉是贵长猕猴桃腐烂的主要病原菌,贵长猕猴桃病原菌的侵染途径可能主要是在采收、运输和包装过程中进入猕猴桃内,引起猕猴桃的腐烂。     

烟草种子携带病原真菌的分离与鉴定

采用无菌滤纸培养烟苗的方法对贵州主栽的4个烤烟品种裸种进行了带菌检测,并对种子携带真菌进行了分离与鉴定。结果表明,K326、贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号的种子带菌率分别为15%、77.78%、21.67%和61.39%。分离和鉴定发现种子携带的真菌有链格孢菌属（Alternaria sp.）、拟茎点霉属（Phomopsis sp.）、支顶孢属（Acremonium sp.）、柄孢壳属（Zopfiella sp.）、曲霉属（Aspergillus sp.）、镰孢菌属（Fusarium sp.）、青霉菌属（Penicillium sp.）、赤霉菌属（Gibberella sp.）、芽枝孢菌属（Cladosporium sp.）、离蠕孢属（Bipolaris sp.）和Stagonosporopsis cucurbitacearum等。获得40株真菌中共有22种真菌,优势菌群主要为链格孢属、芽枝孢菌属、镰孢菌属和赤霉菌属。链格孢菌属在4个烤烟品种上均有发现。镰孢菌属主要来自于贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号,其中南江3号种子上最多。芽枝孢菌属仅来自贵烟4号。贵烟4号和南江3号种子上的真菌种类和数量较多。这些种子携带真菌的发现对烤烟种子的生产与加工具有重要的意义。     

健康奶牛和乳腺炎奶牛乳汁中微生物组成的特征及差异研究

奶牛乳腺炎的发生与多种病原微生物密切相关,乳汁中菌群特征的分析对建立乳房炎防控体系和提高乳制品质量和安全具有重要意义。本研究通过16S r RNA基因的V3-V4区测序,分析河南省某奶牛场17头健康奶牛和10头乳房炎奶牛乳汁中微生物菌群结构的多样性和丰富度。结果发现,微生物菌群在11个门、24个纲、37个目、82个科和184个属水平上的相对丰度存在显著差异。乳腺炎奶牛乳汁中微生物菌群结构的多样性和丰富度显著低于健康奶牛乳汁,在乳腺炎奶牛乳汁中厚壁菌门、变形菌门、放线菌门的相对丰度较高。乳腺感染后,变形菌门、软壁菌门的丰度显著降低;互养菌门的丰度显著升高。乳腺炎奶牛乳汁中的链球菌科、链球菌属的相对丰度增加,棒状杆菌科、罗尔斯通氏菌属、假单胞菌属的相对丰度下降。优势菌属中有4个嗜冷菌,健康奶牛和乳腺炎奶牛乳汁中的嗜冷菌总丰度分别为19.5%和42.0%。提示乳汁中微生物组成变化可能与奶牛乳腺炎的发生发展有密切联系,该研究为奶牛场乳房炎的防控及原料奶的质量控制提供了理论依据。     

3株哈密瓜致腐病原菌的分离鉴定及碳源代谢分析

哈密瓜在贮藏和运输过程中极易出现腐败,本研究采用组织分离法从贮藏过程中自然腐烂的哈密瓜分离纯化出致腐病原菌3株,通过形态学观察、ITS测序分析、表型分析的方法鉴定出菌株CYS为赭曲霉（Aspergillus ochraceus,JN942915.1）,菌株CJS为粉红单端孢（Trichothecium roseum,KM877467.1）,菌株CWS为娃儿藤内生真菌（Diaporthe sp.,LT965977.1）;采用Biolog-FF技术对3株致腐病原菌的生长和代谢能力进行分析,发现菌株CYS代谢的主要碳源有44种,对羧酸的代谢能力最强,其次为氨基酸和糖;菌株CJS代谢的主要碳源有22种,对氨基酸的代谢能力最强,其次为羧酸和糖;菌株CWS代谢的主要碳源有41种,对糖的代谢能力最强,其次为羧酸和氨基酸。由此可以分析,果蔬表面及环境中存在的病原菌会因为有利于其生长的物质（如糖类、氨基酸、羧酸类物质）存在而加快代谢速度,从而会加速果蔬腐烂变质。通过本研究结论可以进一步揭示致腐病原菌侵染机制,并为果蔬贮藏技术研究提供理论依据。     

一株引起番石榴黑斑病病原菌的分离与鉴定

目的:旨在为明确番石榴黑斑病优势病原菌的种类及其特性提供科学依据.方法:从受黑斑病病害侵染的番石榴果实上分离纯化出一株优势病原菌,命名为S1,并对其进行形态学观察、致病性测定、生长特性研究及聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)测序比对分析,较为全面的对分离出的优势病原菌S1进行鉴...     

甜樱桃采后腐烂病原菌的分离与鉴定

为了研究山西省甜樱桃果实采后贮藏过程中的病原菌,本文对低温贮藏过程中发生腐烂的甜樱桃果实的病原菌进行分离纯化。在形态学基础上,结合基因序列分析,对分离获得的2株病原真菌YTA、YTB进行鉴定。YTA和YTB利用真菌通用引物ITS序列进行PCR扩增,将测序所得的基因序列与NCBI的GenBank进行同源序列比对,确定甜樱桃病原菌的生物学分类。结果表明:病原菌YTA为草酸青霉(Penicillium oxalicum),YTB为葡萄孢属(Botrytis sp.),将其重新回接到甜樱桃上,均能引起甜樱桃腐烂。草酸青霉(Penicillium oxalicum),葡萄孢属(Botrytis sp.)均是造成山西省甜樱桃采后腐烂的病原菌。     

哈密瓜采后冷藏中主要病原菌的分离鉴定

通过对新疆哈密瓜采后冷藏过程中自然发病的果实进行病原菌的分离筛选,明确引起采后哈密瓜腐烂的主要病原菌的种类。试验采用传统纯培养法、稀释平板涂布法和真菌基因组DNA提取试剂盒法对主要病原菌进行分离筛选及DNA的提取。通过生理生化实验对主要病原菌的生理学特性进行初步研究,并对病原菌的26S rRNA基因的序列进行同源性分析。以NL1和NL4为通用引物进行致病菌的分离鉴定,分离筛选出5株主要病原菌,最终筛选出主要病原菌为镰孢属(Fusarium)、葡萄穗霉属(Stachybotrys)、青霉属(Penicillium)、赤霉属(Gibberella)。其中BJ-M菌株和BJ-M1菌株均属于镰孢属;BJ-M2菌株属于赤霉属;BJ-M3菌株属于葡萄穗霉属;BJ-Q菌株属于青霉属。本研究通过对主要病原菌的分离鉴定为延长哈密瓜的贮藏保鲜期提供理论依据和技术指导。     

甜樱桃果实采后病原菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为研究危害采后甜樱桃果实的病原菌,以‘拉宾斯’甜樱桃果实为试材,对低温贮藏过程中的病原菌进行分离鉴定,并对其生物学特性进行初步研究。根据病原菌形态学特征和18S r DNA序列分析结果将2个病原菌鉴定为子囊菌亚门锤舌菌纲柔膜菌目核盘菌科核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和子囊菌亚门粪壳菌纲肉座菌亚纲肉座菌目生赤壳科螺旋聚孢霉属(Clonostachys sp.)。核盘菌菌丝在以牛肉膏为氮源的SDA培养基、20℃、p H=5.0及黑暗条件下生长最好,产孢量最佳条件为以乳糖为碳源,牛肉膏为氮源的SDA培养基,30℃、p H=7.0,黑暗环境;螺旋聚孢霉菌丝在以硝酸钾为氮源的SDA培养基、30℃、p H=6.0及光照条件下生长最好,产孢量最佳条件为20℃、p H=6.0,光照培养。