分离自酸菜汁的乳酸乳球菌体外去除胆固醇特性

将从自然发酵的酸菜汁中分离鉴定的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)接种于高胆固醇培养液MRSO-CHOL中,分别改变茵的培养时间和接种量以及培养基中胆盐质量浓度和胆盐种类,发现乳酸乳球菌对培养液中胆固醇的体外去除率在72 h前随时间的增加而提高,72～96 h基本维持稳定,96 h后下降;随着接种量的增加,胆固醇的去除率增加;培养液不舍胆盐时,乳酸乳球菌的胆固醇去除率很低,仅为4.51%.胆盐质量浓度为0～0.3 mg/mL时,随着胆盐质量浓度的升高,胆固醇的去除率也逐渐升高.胆盐质量浓度高于0.3 mg/mL时,胆固醇去除率下降;牛磺胆酸钠对胆固醇的去除效果最佳.     

乳酸乳球菌乳酸亚种高产胆盐水解酶发酵条件的优化研究

本文利用从藏灵菇中筛选的产胆盐水解酶的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactissubsp.lactis)研究提高酶活力的环境因素。针对主要影响胆盐水解酶合成的四个因素,采用四因素三水平L9(34)正交试验确定了高产胆盐水解酶优化发酵条件:葡萄糖添加量为3%、大豆蛋白胨添加量为2%、发酵温度为37℃、接种量为2%。在优化条件下,胆盐水解酶活力是优化前的11.84倍。     

分离自Kefir的植物乳杆菌体外降胆固醇作用的研究

对分离Kefir中的植物乳杆菌体外降胆固醇作用进行了研究。结果表明，植物乳杆菌在含胆盐的培养基中具有良好的降胆固醇能力，24h后培养基中的胆固醇可降低60％(0．18g／L)；该菌体外降胆固醇作用的机理主要是其产生的胆盐水解酶水解胆盐变为游离态的胆酸，与胆固醇形成复合物，在酸性pH值条件下发生共沉淀。同时，也发现该菌产生的胆盐水解酶对反应底物(各种胆盐)的特异性不同，以脱氧牛磺胆酸最佳。     

植物乳杆菌耐酸耐胆盐的体外试验及其降胆固醇作用

目的:研究产胆盐水解酶植物乳杆菌H13的耐酸、耐胆盐特性,在此基础上对其可能的降胆固醇作用机理进行体外试验研究.方法:采用MRS培养基,模拟人体胃酸环境(pH=3)和胆盐环境(0.3%),测定H13菌株在酸性及高胆盐环境作用后的存活菌数,并在此胆盐浓度下测定植物乳杆菌H13的胆盐水解酶活力、降解胆盐能力和胆固醇沉淀量.结果:菌体能够耐受pH 3的环境和0.3%的胆盐环境;该菌产生的胆盐水解酶在降低胆固醇方面具有重要作用,酶活性与游离胆酸量、胆固醇沉淀量呈正相关,而且胆盐水解酶对反应底物的特异性不同,以甘氨胆酸钠为佳.结论:植物乳杆菌H13体外降胆固醇作用的机理主要是其产生的胆盐水解酶使胆盐失去共轭作用,在酸性(pH<6.0)条件下,解共轭胆盐与胆固醇形成复合物共同沉淀下来.     

一株降胆固醇乳杆菌的筛选及其益生作用的研究

本实验采用邻苯二甲醛法筛选出一株体外降胆固醇能力强的植物乳杆菌KLDS1.0386,该菌分离自中国内蒙古地区传统发酵乳制品,测定了其对酸和胆盐的耐受性以及对Caco-2细胞的黏附能力。结果表明,筛选出的植物乳杆菌KLDS1.0386的降胆固醇能力达到55.71%;在p H3.0的酸性环境中培养3 h的存活率为84.62%;在0.3%的胆盐环境中培养3 h的存活率为83.65%,并且该菌的黏附能力也很强,黏附率达到16.65%,说明植物乳杆菌KLDS1.0386能通过胃进入肠道并保持活性,而且能在肠道很好的定植,所以,该菌可以用做降胆固醇的潜在益生菌。      

一株乳酸乳球菌所产细菌素的生物学特性

对乳酸乳球菌KLDS4.0326所产类细菌素进行分离纯化,并对细菌素的部分生物学特性进行研究。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,菌株的无细胞发酵上清液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性细菌以及大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性细菌具有显著的抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性降低,表明抑菌成分为蛋白类物质;该细菌素具有良好的热稳定性,在酸性条件下抑菌活性稳定,并且具有较广的抑菌谱,能够抑制多种革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。     

干酪乳杆菌GL-B体外降胆固醇的作用机理

研究了干酪乳杆菌GL-B所产胆盐水解酶的分离纯化及其体外降解胆固醇的作用机理,通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose FastFlow层析、Sephadex G-100层析分离胆盐水解酶。结果表明,胆盐水解酶纯度为原来的27倍,纯化后电泳谱图显示一条带,分子量约为50 ku;干酪乳杆菌GL-B对胆固醇的降解是吸收和共沉淀共同作用的结果,且共沉淀作用大于吸收作用。     

降胆固醇优良菌株的筛选及其胆盐水解酶特性研究

对已证实具有降胆固醇能力并能产生胆盐水解酶（BSH）的3株乳酸菌进一步筛选,综合模拟人工胃肠液的耐受性、疏水性能力和去结合胆盐能力三个指标,筛选出一株具有优良的降胆固醇综合性能的潜力菌株,并对其产生的BSH的部分特性进行研究。结果表明,屎肠球菌90-1作为降胆固醇潜力菌株其综合性能较好,其所产的BSH最适反应pH为6.0,最适反应温度为37℃,最适底物浓度为7mmol/L,最适三磷酸腺苷二钠（ATP）浓度为2.5mg/mL。      

胆盐水解酶降胆固醇的研究进展

体内胆固醇水平失衡会引起多种疾病,威胁人体健康。因此,控制体内胆固醇水平是目前普遍关注的问题。除常见的他汀和依齐麦布药物外,植物乳杆菌、干酪乳杆菌、发酵乳杆菌等乳酸菌也已被证实可有效降低体内的胆固醇水平。大量研究发现,促使乳酸菌起到降胆固醇作用的主要物质与其在生长过程中产生的一类代谢产物胆盐水解酶（Bile salt hydrolase,BSH）相关。该研究通过对胆盐水解酶特性、功能介绍,总结分析了胆盐水解酶降胆固醇机制,以期为降胆固醇的深入研究提供理论基础,并为益生菌开发应用提供理论依据与指导。     

可降胆固醇的优势乳杆菌筛选

为丰富降胆固醇、降血糖的益生菌资源,以实验室10株潜力益生菌株为实验对象,进行体外降胆固醇能力、胆盐水解酶(BSH)活性及α-葡萄糖苷酶抑制率试验,测定菌株对人工胃液和胆盐的耐受性,评价优势菌株的细胞黏附性能及对抗生素的耐药安全性能。结果表明,植物乳杆菌LH-511、植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌10-4对胆固醇的降解率在50%以上,显著高于商业菌株植物乳杆菌299V(p<0.05)。植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌SD-H9对α-葡萄糖苷酶的抑制率高达41.7%、40.1%。植物乳杆菌LH-511、植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌10-4、植物乳杆菌10-14、卷曲乳杆菌OF48-2pH5这5株菌具有较好的BSH活力、α-葡萄糖苷酶抑制性、抗逆性以及对HT-29细胞的黏附能力。但仅植物乳杆菌LH-511和卷曲乳杆菌OF48-2pH5通过了10种抗生素的安全性试验。综上所述,植物乳杆菌LH-511和卷曲乳杆菌OF48-2pH5具有较好的降胆固醇、降血糖潜力,且通过了抗逆性、黏附性、安全性试验,可用于进一步的开发和应用。     

Comparison of antimicrobial resistance between the type strain of Lactococcus lactis and isolates from coastal environments

To ensure the safety of dairy products, a comparison was made between coastal-derived Lactococcus lactis strains and the type strain regarding antimicrobial resistance (AMR) and their genes. The test discs revealed that the AMR of 31 strains against streptomycin, gentamicin and kanamycin was higher than that of the type strain. The clear zone ratio of the type strain to that of Himuka-SU2 was 3.0–3.5. However, both strains exhibited identical AMR genes. Pre-incubation in broth containing 3.4% (w/v) NaCl increased the AMR of the type strain compared to the Himuka-SU2 strain. These results are significant for the development of starters for fermented milk.     

Subspecies-Specific Nested PCR Assay for Detection of Lactococcus lactis spp. lactis and spp. cremoris

A nested PCR-based assay composed of Lactococcus lactis species-specific primers for the nest 1 amplification and subspecies-specific primers for the nest 2 amplification was validated with the identified strains of L. lactis isolated from dairy and nondairy sources and positive and negative control strains. Forward and reverse primer set was designed for nest 1 amplification targeting the conserved housekeeping gene yueF encoding nonproteolytic protein from peptidase family M16 of L. lactis. Amplicons of 447 bp of yueF were subjected for nest 2 amplification producing amplicons of 372 bp. The designed outer primer set for nest 1 amplification was observed to be specific to L. lactis because the DNA from other bacteria could not be amplified and the inner primer set for nest 2 amplification was found to be specific for the detection of ssp. lactis and cremoris of L. lactis.     

乳酸乳球菌胞外多糖磷酸化的工艺优化

采用单因素和正交试验,对乳酸乳球菌胞外多糖的磷酸化工艺进行研究,探讨磷酸盐用量、反应温度、反应时间、反应pH值对乳酸乳球菌胞外多糖最终PO43-接枝量的影响。所得的乳酸乳菌球菌胞外多糖磷酸化的工艺优化条件为：胞外多糖与磷酸盐质量比为6:1、温度90℃、时间4h、pH6.0,此条件下所得PO43-的接枝量为1.639mg/g。     

具有溶栓活性的重组乳酸乳球菌的构建

利用PCR方法从纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.natto)基因组DNA中扩增纳豆激酶原基因,构建了纳豆激酶原基因的表达载体pFY002,转化Lactococcus lactis NZ9000,得到活性表达纳豆激酶的重组菌Lactococcus lactis NZ9000/pFY002。利用纤维蛋白平板法检测其溶栓活性,并对诱导剂乳链菌肽(NisinA)的浓度、温度、诱导时间对重组菌产酶的影响进行探究。     

L.LactisKLDS4.0325细菌素理化性质的研究

该研究以分离自新疆牧民家庭自制酸马奶中的乳酸乳球菌KLDS4.0325为研究对象,以双层平板法为检测方法,以抑菌圈直径为检测指标,以大肠杆菌为指示菌,对该菌株所产细菌素进行提取、纯化及理化特性分析,首先无细胞发酵上清液通过60%饱和度硫酸铵溶液盐析得到细菌素粗提液,然后细菌素粗提液通过SP Sepharose Fast Flow阳离子交换层析法得到纯化的细菌素样品,其比活力可达51.02 IU/mg,较优化前提高了约18倍,并通过tricine-SDS-PAGE蛋白电泳测定分子量约为3.4 ku;最后,对细菌素样品的生物学特性进行研究,通过温度、pH和各种酶的敏感性试验得出,细菌素样品热稳定性强,在pH 2~10的范围抑菌圈直径变化不大,有较高的稳定性,经蛋白酶处理后,抑菌活性消失,但经淀粉酶处理后仍能保持较高的稳定性,这也说明该细菌素是蛋白类物质。     

乳酸乳球菌高效电转化的方法

以质粒pMG36e和pNZ8148为材料,对乳酸乳球ATCC19435的电转化条件进行了优化研究.实验结果表明,乳酸乳球菌的最佳电转化条件为对数生长中后期的细胞,电场强度12 kV/cm,质粒浓度0.1～1 mg/L,复苏时间2 h,此时质粒pMG36e和pNZ8148时供试菌株的电转化效率分别为1.95x105μg-1和2.18x105μg-1,比优化前电转化效率均提高10倍以上.本研究为外源基因电转化乳酸乳球菌提供了可靠的试验参数依据.     

构建食品级表达纳豆激酶的乳酸乳球菌重组菌株

构建整合型表达载体pFY008,以HisH基因作为同源重组的靶位点,通过同源重组将含有纳豆激酶原基因的表达盒PnisA-aprN整合到乳酸菌的基因组上,实现纳豆激酶在乳酸乳球菌中食品级的表达。构建的食品级基因工程菌安全性高、稳定性好,并赋予了其溶栓的功能。     

镉胁迫下泡菜乳酸乳球菌的形态变化

通过扫描电镜和透射电镜分别观察不同质量浓度水平的Cd2+对泡菜乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp.lactis）细胞的影响,扫描电镜结果显示：Cd2+质量浓度在0、10 mg/L时,泡菜乳酸乳球菌呈椭圆形、表面光滑、菌体生长繁殖旺盛,随着Cd2+质量浓度的增加菌体细胞表面产生白色颗粒状物质、菌体细胞存活数量大幅下降（OD600 nm值由1.336下降到0.515）。当添加200 mg/L Cd2+时,几乎没有见到明显的菌体、显示有少量棱形晶状物。透射电镜结果显示：当Cd2+质量浓度为0～50 mg/L时泡菜乳酸乳球菌结构完整、细胞内容物分布均、菌体生长较为正常,当菌体暴露于100、200 mg/L Cd2+时菌体细胞出现异常现象,如细胞破裂、内容物从薄膜穿孔中释放、质壁分离等。两类电镜结果均表明：在低质量浓度Cd2+（≤50 mg/L）胁迫下,对泡菜乳酸乳球菌的生长几乎不产生影响,添加Cd2+质量浓度上升到100、200 mg/L时泡菜乳酸乳球菌正常生长受到抑制。