里氏木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的条件优化

为提高纤维素酶酶解秸秆产糖效果,以碱性双氧水处理过的玉米秸秆为发酵基质,进行里氏木霉与黑曲霉混合发酵的研究。通过单因素试验确定黑曲霉延迟接种时间、里氏木霉与黑曲霉接种比例 、发酵时间和固液比4个因素的最优水平。在此基础上,采用Box-Behnken响应面设计对混合发酵产酶条件进行优化,获得最佳产酶条件：黑曲霉延迟接种时间 36h,里氏木霉与黑曲霉接种比例 5:1、发酵时间7d、固液比2:50(m/V)、吐温-80体积分数0.4%、pH 5.0和装液量50mL/250mL。此时,滤纸酶力(FPA)可达1.224 IU/mL,β-葡萄糖苷酶活力(β-GA)可达0.315 IU/mL。采用高效液相色谱法,对最佳条件下的纤维素酶酶解秸秆的水解液进行检测。结果表明,两菌株混合发酵较单菌株发酵的纤维素酶系更加完整,且降解木质纤维素类原料产可发酵性糖的能力增强。     

粗壮脉纹胞菌复合多菌种发酵茶粕产纤维素酶的研究

用粗壮脉纹胞菌分别复合东方伊莎酵母、里氏木霉、绿色木霉、乳酸杆菌固态发酵已去除茶皂素的茶粕,通过测定发酵产物中3种纤维素酶：外切葡聚糖酶（C1）、内切葡聚糖酶（Cx）、β-葡萄糖苷酶（β-G）及总酶滤纸酶（filter paper activity,FPA）的酶活力来探讨其分解粗纤维素的协同作用。粗壮脉纹胞菌和绿色木霉混合发酵产生的C1酶酶活力较粗壮脉纹胞菌单菌发酵提高了51.09%,粗壮脉纹胞菌和绿色木霉复合发酵较单菌发酵延长了其纤维素酶分泌的周期,96 h时FPA酶活力达到2.782 U/g;粗壮脉纹胞菌复合里氏木霉、绿色木霉混合发酵组在发酵10 d后对茶粕粗纤维的最终降解率分别达到了64.19%和61.59%;接种量对单菌和混合菌发酵产纤维素酶影响总体趋势是随着接种量增加酶活力提高,但粗壮脉纹胞菌单菌发酵纤维素酶酶活力在接种量超过9 mL/100 g后开始下降。表明粗壮脉纹胞菌复合里氏木霉、绿色木霉混合发酵降解纤维素具有协同作用。     

混合菌固态发酵产纤维素酶条件的研究

以稻草秸秆粉为碳源,利用绿色木霉和黑曲霉进行固体发酵产纤雏素酶的研究。以混合菌接种比例、麦麸与稻草粉质量比、发酵时间和三角瓶装量4因素为考察对象,通过单因素实验和正交实验优化混合菌固体发酵条件。确定该混合菌株的最优产酶条件,结果表明,混合菌最佳固体发酵条件为：绿色木霉和黑曲霉接种比例为1：1、麦麸与稻草粉质量比为1：3．0、发酵时间为4d、装量为50mL／1000mL三角瓶。在此最佳发酵条件下,FPA酶活、CMC酶活、β-G酶活分别为5．291U／mL、9．33IU／mL和49．91IU／mL,分别是单菌发酵的2．28～2．47倍、2．39～2．45倍、1．38～2．09倍。混合菌发酵产生的各酶活性均高于各种菌单独发酵产生的各酶活性。     

多菌混合发酵产纤维素酶及生物法预处理秸秆的研究

对实验室分离筛选的3株绿色木霉和6株枯草芽孢杆菌的生长及产酶情况进行了研究,综合确定绿色木霉绿2与芽孢杆菌S3为混合菌中产纤维素酶酶活最高的组合。在此基础上,采用解脂假丝酵母处理高粱秸秆。先将解脂假丝酵母的种子培养液按照3%的接种量接种到发酵产酶培养基中,隔24 h将绿色木霉绿2的孢子悬浮液按照2.67%的接种量接种到发酵产酶培养基中,再隔12 h将芽孢杆菌S3的种子培养液按照5.33%的接种量接种到发酵产酶培养基中,测定出的滤纸酶活（FPA）最高,为389.89 U/mL,比优化前提高了14.30%。     

一株绿色木霉液体深层发酵产纤维素酶工艺研究

研究了pH值、温度和溶解氧对一株绿色木霉进行液体深层发酵产纤维素酶的影响及其控制 :在 10L的通气机械搅拌发酵罐中 ,接种量为 10 % ,发酵过程采取分段控制pH值、温度和溶解氧的工艺 ,发酵 72h左右酶活力最高 ,FPA和CMC酶活力分别达到 6 7U/ml和 375U/ml。     

黑曲霉和芽孢杆菌混合菌产纤维素酶的研究

研究了黑曲霉与芽孢杆菌共4株菌的生长及产酶情况,从而确定了4种组合方式,通过比较4组混合菌的酶活大小,最终确定了组合D2-1+S3-7为产纤维素酶酶活最高的混合菌。优化混合菌的最佳发酵条件为:接种量8%(黑曲霉∶芽孢杆菌为1∶1),250mL三角瓶装液量125mL,秸秆和麸皮为碳源(2∶3),蛋白胨和硫酸铵(1∶1)为氮源,碳氮比7∶1,起始pH值为5.0,发酵温度28℃,发酵时间4d,FPA酶活达到535.08U/mL,分别是出发菌黑曲霉D2-1的4.45倍和芽孢杆菌S3-7的4.61倍。     

高效降解纤维素混合菌的筛选及其产酶条件的研究

研究了8株菌的生长及产酶情况,从而确了4种组合方式;通过比较4组混合菌的酶活大小,最终确定组合2为降解纤维素效果最好的混合菌.优化混合菌的最佳发酵条件为:接种18%,250mL三角瓶装量100mL,玉米芯和麸皮为碳源(4:1),酵母膏为氮源,碳氮比4:1,起始pH值为5.0,30°C、150r/min恒温振荡培养7d,FPA酶活达到281.6U/mL,分别是出发菌黑曲霉的2.67倍和绿色木霉的2.74倍.     

黑曲霉产纤维素酶混合发酵条件的研究

为选出高产纤维素酶菌株,对不同菌株进行筛选,通过4种纤维素酶活力大小比较单一菌株与混合菌株的产酶能力。利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定各单一菌株及混合菌株的内切葡聚糖酶活、滤纸酶活、外切葡聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活,筛选最优组合,在单因素试验的基础上通过响应面试验确定最佳产酶条件。结果表明,混合菌最佳产酶条件：混合菌株D2∶D2-1=2∶1,发酵时间6 d,接种量6%,发酵温度28 ℃。优化后滤纸酶活力达到156.26 U/mL,较优化前的滤纸酶活（113.96 U/mL）提高了37.1%。     

高效降解纤维素混合菌的筛选及其产酶条件的研究

研究了8株菌的生长及产酶情况,从而确定了4种组合方式;通过比较4组混合菌的酶活大小,最终确定组合2为降解纤维素效果最好的混合菌。优化混合菌的最佳发酵条件为:接种量8%,250mL三角瓶装量100mL,玉米芯和麸皮为碳源(4:1),酵母膏为氮源,碳氮比4:1,起始pH值为5.0,30℃、150r/min恒温振荡培养7d,FPA酶活达到281.6U/mL,分别是出发菌黑曲霉的2.67倍和绿色木霉的2.74倍。     

稻草粉基混合菌发酵产纤维素酶研究

以稻草粉为主要原料,对白腐菌(White-rot fungi)NS75和黑曲霉(Aspergillus niger)NS83进行固态混合发酵产纤维素酶进行研究。混合菌固态发酵与单菌固态发酵实验结果比较表明,混合菌发酵产生的纤维素酶总体酶活明显高于单菌种发酵,其β-葡萄糖苷酶(β-G)酶活较白腐菌NS75单菌发酵提高了120.9%;葡聚糖内切酶(CMC)酶活比黑曲霉NS83单菌发酵提高了140.8%。单因素实验和正交实验结果表明,当稻草粉麸皮质量比为9∶1,料水比为1∶2,白腐菌NS75与黑曲霉NS83的接种比例为1∶1(v∶v)时,培养第3d开始搅拌,每天搅拌一次,于30℃,培养5d,稻草粉基混合菌发酵产纤维素酶中CMC酶活达到16650U/g,β-G酶活为16108U/g、滤纸酶活(FPA)酶活为3164U/g。     

固态发酵生产高活力纤维二糖酶

在固态发酵条件下,对７个纤维二糖酶生产菌株进行了筛选,发现ＡｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒＬＯＲＲＥ０１２为纤维二糖酶高产菌株。研究了培养时间、温度、培养基含水量及初始ｐＨ等因子对该菌形成纤维二糖酶的影响。当培养基采用自然ｐＨ（约６．０）、含水量７０％,接种后在３０℃下先培养２ｄ,再在２５℃下培养２ｄ,每克干酶曲所含的纤维二糖酶活力可达到４３０．５６ＩＵ。由此获得的纤维二糖酶曲与Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｓｅｉ产生的纤维素酶曲在糖化纸浆过程中有明显的协同作用,当两者以１∶１０混合使用时（纤维二糖酶与滤纸酶活力之比约为０．４４）,可有效地消除水解产物中纤维二糖的累积,使纤维纸浆的酶水解得率高达９０．７％。     

裂褶菌产纤维素酶条件的研究

对一株裂褶菌(Schizorhyllum commune ATCC38548)进行液态发酵生产纤维素酶。通过单因素试验考察发酵时间、碳源、碳源质量浓度和接种量等因素对菌株产酶的影响,用二硝基水杨酸法(DNS法)对羧甲基纤维素酶(CMC)、滤纸酶(FPA)和微晶纤维素酶(AVI)进行酶活测定。结果表明:3种酶的分泌高峰不一致,但在第6天时纤维素酶总酶活达到最高。滤纸是诱导裂褶菌产纤维素酶的良好碳源,且质量浓度为20g/L时产酶效果最佳;接种量为5mL时,总酶活相对最高。不同的培养条件对裂褶菌产CMC、FPA和AVI的影响各异。     

New isolate of Trichoderma viride strain for enhanced cellulolytic enzyme complex production

A new Trichoderma viride stain was isolated from Singapore soil samples. Its mutants were developed by using ethyl methyl sulfonate (EMS) treatment and UV-irradiation followed by a semi-quantitative plate clearing assay on phosphoric-acid-swollen cellulose plates. Mutant EU2-77 proved to be the most promising extracellular cellulase producer among 20 mutants in a screening program performed in shake flask fermentation after plate screening. Soluble protein content, filter paper cellulase (FPase) activity, β-glucosidase activity and endoglucanase (CMCase) activity of the fermentation broths of the mutant strain were increased to 1.67, 2.49, 2.16, and 2.61 folds, respectively, compared with the wild strain. This enzyme complex produced by mutant EU2-77 contained FPase (2.19 IU/ml), CMCase (16.46 IU/ml), β-glucosidase (4.04 IU/ml), xylanase (42.37 IU/ml), and β-xylosidase (0.12 IU/ml). The soluble protein concentration in the enzyme complex was 1.69 mg/ml. The hydrolytic capacities of fermentation supernatants of T. reesei Rut-C30, the wild strain T. viride NP13a and mutant T. viride EU2-77 were compared with the commercial enzymes on the hydrolysis of waste newspaper. The crude enzymes prepared by T. viride EU2-77 showed much higher hydrolysis performance than that from the commercial strain Rut-C30 and demonstrated much comparable hydrolytic performances with the commercial enzyme mixtures. T. viride mutant EU2-77 produced high levels of extracellular cellulases as well as β-glucosidase, rendering the supplementation of β-glucosidase unnecessary in waste newspaper hydrolysis.     

里氏木霉液体发酵法生产纤维素酶

通过比较几株霉菌产纤维素酶活力，发现里氏木霉ＲｕｔＣ－３０活力最高；采用Ａｖｉｃｅｌ与麸皮复合碳源，以及使用ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４缓冲系统控制发酵液ｐＨ，２８℃摇瓶发酵６ｄ，最高酶活达到ＣＭＣａｓｅ１００－１２５Ｕ／ｍｌ，ＦＰＡ９－１２Ｕ／ｍｌ。采用２．５升发酵罐培养，通过控制ｐＨ和溶氧，纤维素酶活力为ＣＭＣａｓｅ１３３．４Ｕ／ｍｌ，ＦＰＡ１１．６７Ｕ／ｍｌ。用硫铵盐析法提取制得纤维素酶干粉，其活力为ＣＭＣａｓｅ３０７４．９Ｕ／ｇ，ＦＰＡ１６６．７Ｕ／ｇ。     

一株绿色木霉产纤维素酶摇瓶发酵条件优化研究

本文研究了利用纤维素刚果红分离培养基从废纸液里筛选出一株纤维素酶高产菌株,经鉴定为绿色木霉。同时对绿色木霉摇瓶发酵产酶进行了条件优化,实验结果表明其最佳发酵条件为:碳源纤维素粉:麸皮为12g∶8g;氮源(NH4)2SO4:玉米浆:豆饼粉为2g∶2g∶1g;起始pH2.5;接种量8%;转速200r/min;乳糖诱导添加量0.2%;发酵时间4d。在最佳产酶条件下CMCA酶活达到735.06U/mL,比未优化条件下酶活234.21U/mL提高了213.8%。     

一株锡林郭勒盟木霉的鉴定及其产纤维素酶研究

该研究以分离自锡林郭勒地区白桦林的一株木霉菌株XLGL201709100为研究对象,采用分子生物学技术对其进行鉴定,以 菌丝生长能力和生物量为评价指标,对其最适生长固体培养基进行筛选,采用滤纸酶活（FPA）法对其产纤维素酶能力进行研究。 结 果表明,木霉菌株XLGL201709100被鉴定为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）,其最适生长的固体培养基为木生菌葡萄糖蛋白胨酵 母膏（GPY）培养基,且在马玲薯葡萄糖肉汤（PDB）培养基中发酵3 d时,FPA为0.025 U/mL;以白桦木木屑为固体产酶基质发酵7 d时, FPA为1.043 U/g。     

响应面法优化黑曲霉SH312-26-19产果胶酶发酵条件

在单因素试验的基础上,运用响应面法优化黑曲霉SH312-26-19产果胶酶的发酵条件,并与市售果胶酶进行产甲醇含量的对比试验。结果表明,黑曲霉最适发酵条件为培养基中麸皮添加量11 g,发酵时间4 d,发酵温度30 ℃。在此优化条件下,该黑曲霉产果胶酶活力达到（2 518.69±19.34） U/mL。该果胶酶在酶促反应体系中甲醇的生成量分别比市售果胶酶1和市售果胶酶2低17.9%和12.8%,显著低于市售果胶酶（P＜0.05）。     

N~+离子注入-紫外复合诱变选育纤维素酶高产菌株

对产纤维素酶菌株Rhizopus sp.TY1原生质体进行N+离子注入-紫外复合诱变,以期获得高产菌株。以原生质体形成率和再生率为指标,确定最佳酶解时间3h;以致死率和正突变率为指标,确定最佳N+离子注入剂量为2.0×1015ions/cm2、最佳紫外照射时间为90s。实验筛选得到一株高产菌株Rhizopus sp.TY1.2,液态发酵终点时滤纸酶活力(FPA)和羧甲基纤维素酶活力(CMC)分别达到5.1、20.9U/mL,与出发菌株相比,FPA和CMC分别提高了75.9%和175.0%。传代实验结果显示Rhizopus sp.TY1.2产纤维素酶性能稳定,该结果表明N+离子注入-紫外复合诱变所产生的变异是可遗传的变异。