产胆盐水解酶乳酸菌的分离、鉴定及降解胆固醇机理的初步研究

本文从开菲尔粒中分离出15株能降低胆固醇的菌,通过生理生化反应以及其他指标对这15株菌株进行鉴定,其中7株为球菌,8株为杆菌。对这15株菌进行复筛,最终筛选出一株能产胆盐水解酶的菌株,用全自动生化鉴定仪对这株菌做进一步的鉴定,其鉴定结果为干酪乳杆菌。     

MALDI-TOF MS方法快速鉴定大肠杆菌及ESBLs菌株检测探索研究

目的研以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)方法检测大肠杆菌,并利用MALDI-TOF MS方法鉴别ESBLs菌株及聚类分析法区分不同分型的ESBLs菌株,探索MALDI-TOF MS方法鉴定大肠杆菌及ESBLs菌株的可行性。方法利用MALDI-TOF MS采集47株大肠杆菌分离株的质谱数据,生成肽指纹图谱,并利用biotyper软件进行菌种鉴定,同时研究其耐药性鉴定结果,并利用聚类分析法研究大肠杆菌ESBLs菌株,最终确定MALDI-TOF MS对大肠杆菌菌种鉴定及ESBLs菌株鉴别的可行性。结果 MALDI-TOF MS方法鉴定大肠杆菌的结果与传统方法及PCR方法检测结果均符合,经MALDI-TOF MS鉴定方法提示为ESBLs菌株的10株大肠杆菌中有9株为ESBLs菌株,且聚类分析法对OXA型ESBLs大肠杆菌具有较好的鉴别能力。结论MALDI-TOF MS方法可以快速、准确地鉴定大肠杆菌,对ESBLs菌株具有一定的筛选鉴别能力。     

新疆哈萨克族传统发酵酸马奶中酵母菌的分离鉴定

从新疆南山、水西沟、伊犁昭苏采集的哈萨克族传统发酵酸马奶中共分离得到酵母菌34株。采用传统形态学、生理生化特性方法对酵母菌进行鉴定,鉴定结果为Schizosaccharomyces 1株、Sehizoblastosporion 1株、Torulopsis 1株、Saccharomycodes 1株、Kloechera 9株、Kluveromyces 5株、Dekker 8株、Trichosporon 3株、Hansenula 2株、Brettanomyces 3株。利用5.8S rDNA序列同源性分析和系统发育树对菌株12号进行分子生物学鉴定,鉴定结果为:菌株12与标准菌株HQ396523.1同源性达到96%,为Kluveromyces的Kluveromyces marxianus,与传统鉴定结果一致,表明5.8S rDNA序列分析在酵母菌鉴定上的准确性。     

发酵米浆中高发酵性能酵母菌和乳酸菌的筛选和鉴定

为了实现传统米发糕的规范化工业生产,从传统米发糕的发酵米浆中筛选发酵性能较好的菌株,并进行种属鉴定。首先从发酵米浆中分离出40 株酵母菌的疑似菌和30 株乳酸菌的疑似菌。经杜氏小管产气、发酵液特性和生长曲线分析三级筛选,最终得到1 株高发酵性能的酵母菌。经革兰氏染色等初筛、pH 值和生长曲线分析,最终得到1 株高发酵性能的乳酸菌。最后对两株菌株进行菌落形态观察和生理生化种属鉴定,确定分别为卡斯特酒香酵母和植物乳杆菌。     

产胞外多糖乳酸菌的筛选及鉴定

目的:筛选出产胞外多糖能力强的乳酸菌菌株。方法:从实验室分离保藏的乳酸菌中挑选40株乳酸菌,以商业菌株鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus GG,LGG)为阳性对照菌株,采用菌落拉丝法和苯酚—硫酸法筛选出胞外多糖产量高的菌株,对其进行体外抗逆性、安全性和抗生素敏感性试验,并对最终得到的菌株进行表型特征分析和种属鉴定。结果:对40株乳酸菌进行初筛和复筛,得到了10株胞外多糖产量较多的乳酸菌;最终分离鉴定出4株高产EPS乳酸菌,产量均在600 mg/L以上,分别为2株副干酪乳杆菌(LZ9089、LZ9Y10)、1株干酪乳杆菌(LZ9183)和1株短乳杆菌(LZ9285)。结论:4株高产胞外多糖的菌株具有良好的益生特性,具有潜在的开发利用价值。     

乳糖酸生产菌株的筛选与鉴定

乳糖酸具有良好的功能特性.经富集培养,从土壤样品中分离出了201株菌株,经x-gal平板培养基、伊红美蓝合成培养基和指示平板培养基筛选出29株疑似乳糖酸生产菌株.利用薄层色谱法定性鉴定出5株疑似乳糖酸生产菌株,最终用高效液相色谱法确定出一株优良的乳糖酸生产菌株Y20,其乳糖酸产量为127.65g/L,转化率为85.10％,经生理生化鉴定和16SrDNA分子鉴定,该菌为土生拉乌尔菌.     

泡菜中降解重金属铅的乳酸菌筛选及鉴定

以南充当地泡菜为材料,添加溴甲酚紫的MRS培养基进行平板涂布法初筛获得44株乳酸菌,再以降解重金属铅的能力大小为复筛指标,获得两株较高降解率的乳酸菌,并对这两株菌进行耐受铅的能力、产酸能力、耐酸和耐胆盐能力的测定。综合测定结果,最终选出降解铅的能力最强的PC12菌株作为目标菌株,并对其进行生理生化鉴定以及16SrDNA分子鉴定,确定该菌株为植物乳杆菌。     

肉用乳酸菌发酵剂菌株的分离筛选与鉴定

作者从4种自然发酵肉制品中分离出112株乳酸菌,通过考察菌株的发酵特性和耐受性,最终获得一株性能优良的菌株T1-1。该菌株在添加8 g/dL NaCl和150 mg/kgNaNO2的MRS培养基中生长良好,并且能耐受80℃水浴10 min。通过生理生化鉴定和16S rRNA序列分析,该菌株为植物乳杆菌。     

原料乳中产耐高温蛋白酶菌株的筛选与鉴定

从原料乳中分离筛选产耐高温蛋白酶菌株,经酪蛋白水解圈实验,筛选出10株产蛋白酶的菌株.在此基础上,通过蛋白酶耐热性比较,筛选出一株产耐高温蛋白酶菌株,并通过菌落形态观察、生理生化试验、核酸特征分析;K16S rKNA基因序列测定等对该菌株进行鉴定.BLAST比对构建该菌株系统发育树,最终鉴定该菌株为荧光假单孢杆菌.     

泡菜中兼具耐酸性和亚硝酸盐分解活性的乳酸菌株的筛选和鉴定

从11种市售泡菜中分离出几十株乳酸菌,通过革兰氏染色和过氧化氢酶活性检测,确认其中36株为乳酸菌。对分离菌株的产酸性能和亚硝酸盐的降解能力方面进行了检测,发现其中4株乳酸菌活性较强,随后对它们的耐酸性进行了测定,最终筛选出1株优良菌株(Q12),并通过糖发酵试验和16SrDNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定,确认其是植物乳杆菌(L.plantarum)。     

枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究

为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD。并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan。经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍。结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后BJ3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法。     

拮抗烟草青枯病菌的内生细菌筛选、鉴定及定殖研究

从不同烟草品种的根茎叶组织中大量分离内生细菌,通过平板拮抗试验方法,筛选出拮抗青枯菌的内生细菌菌株16个。从中选择B7、H4-2、C3、DR8、D3、B8、33共7个拮抗菌,进行16S rDNA鉴定,并构建系统发育进化树,结果表明:H4-2、C3、DR8、B8、33与芽孢杆菌属(Bacillus)的菌株亲缘关系最近。利用B8菌株的抗链霉素菌株B8-5,研究其在土壤和烟草植株根、茎、叶中的定殖能力及其对烟草青枯病的防治效果。结果表明,B8-5可定殖于烟草根表土壤和体内,具有良好的宿主体内定殖与传导能力,田间对烟草青枯病的防治效果达66.64%。     

含香兰素冬虫夏草发酵液的制备工艺研究

该研究采用传统培养分离法从大曲、酒醅等原料中分离筛选能以葡萄糖为底物产香兰素的芽孢杆菌,并通过分子生物学技术对其进行鉴定。利用该菌株发酵冬虫夏草,并以香兰素含量为评价指标,采用单因素试验及响应面试验对其发酵工艺进行优化。结果表明,分离筛选得到一株香兰素产量较高的菌株B4-9,经鉴定,为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其发酵冬虫夏草的最佳工艺参数为料液比1∶30、装液量20%、pH 7、接种量10%、培养温度43℃、摇床转速200 r/min,发酵时间9 d,在此条件下,冬虫夏草发酵液中香兰素含量可达到4.6 mg/L。     

New insights into galactose metabolism by Schizosaccharomyces pombe: isolation and characterization of a galactose-assimilating mutant

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe cannot use galactose as a carbon or energy source, and little is known about galactose metabolism in this species. Here we report isolation of a galactose-assimilating mutant that grows on a medium containing galactose as a sole carbon source through use of a proofreading-deficient DNA polymerase δ variant encoded by cdc6-1. Based on comparative analysis of gene expression profiles in the wild-type and the mutant (FG2-8), we found that SPBPB2B2.10c (gal7+), SPBPB2B2.12c (gal10+) and SPBPB2B2.13 (gal1+), homologous to Saccharomyces cerevisiae GAL7, GAL10 and GAL1, respectively, and SPBPB2B2.08, SPBPB2B2.09c, and SPBPB2B2.11 that localize close to the gal genes, were highly expressed and dramatically induced by addition of galactose. The gal7Δ strain, carrying an integrated ura4+ marker at the gal7+ locus, grew on 5-fluoroorotic acid (5-FOA)-containing medium. In contrast, the FG2-8 gal7Δ strain could not grow on 5-FOA medium. In addition, expression of gal7+, SPBPB2B2.13, gal10+ and gal1+ genes increased in the wild-type strain when carried on a vector, and these transformants grew on galactose medium. We suggest that gal7+, gal10+, and gal1+ are localized close to a chromosomal terminal repressed by gene silencing in S. pombe. In contrast, gene silencing was defective in the FG2-8 strain making galactose assimilation possible.     

响应面法优化两歧双歧杆菌益生元类冻干保护剂

以两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）为试验菌株,以冻干存活率为评价指标,采用中心组合试验设计对两歧双歧杆菌益生元类冻干保护剂进行优化。结果显示,益生元类冻干保护剂的优化配方为菊糖13%,水苏糖11%,低聚木糖7%,经重复试验验证后的冻干存活率是（88.7±1.3）%,与预测值无显著性差异（P＞0.05）,这说明采用响应面法优化两歧双歧杆菌冻干保护剂是可行的。     

耐受性枯草芽孢杆菌的脉冲强光诱变筛选及产酶活力分析

采用脉冲强光对枯草芽孢杆菌进行诱变处理,通过耐受性测试,在抗性菌株中筛选出优良耐受菌株,并与原始菌株对比分析产酶活力及遗传稳定性,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳比较分析菌体蛋白质表达的差异。结果表明,在脉冲电压2?450?V,照射距离5?cm,脉冲40?次条件下,筛选出8?株抗性菌株;经初筛和复筛得到兼具高温耐受、强酸耐受和高浓度胆盐耐受性变异菌株B3和B7,产α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶活力分别比原始菌株提高了67%和77%（P＜0.01）、56%和71%（P＜0.01）、34%和42%（P＜0.05）,变异菌株产酶稳定性较高（P＞0.05）,可遗传变异;诱变前后菌体蛋白表达出现差异;结果证明脉冲强光用于枯草芽孢杆菌的诱变具有可行性。     

食（药）用蕈菌中高抑菌活性菌株筛选及培养基优化

对4个不同属24株食(药)用蕈菌对11株指示菌抑菌活性进行研究,通过初筛模型,从中筛选出3株功能菌,6株指示菌。对初筛菌株进一步复筛,确定功能菌株H2与枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌为培养基优化的出发菌株和指示菌。通过响应面分析优化培养基配方,结果表明,当麦芽糖40.9g/L、蛋白胨11.2g/L、KH2PO4 2.1g/L、MgSO4 ·7H2O 1.1g/L时,H2对枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌的抑菌活性均较理想,其抑菌圈半径分别达到3.513、4.610、8.800mm。     

弧菌外膜蛋白OmpK单克隆抗体的制备及其特性

制备弧菌外膜蛋白K(outer membrane protein K,Omp K)单克隆抗体并对其特性进行研究。以原核表达系统表达野生株Vibrio parahaemolyticus B的Omp K免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与肿瘤细胞SP2/0进行细胞融合,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,小鼠体内诱导制备腹水,用饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱纯化抗体。最终获得能稳定分泌抗Omp K的两株单克隆抗体杂交瘤细胞株Omp K-Mab-4B7、Omp K-Mab-3C5,2株杂交瘤细胞系所分泌的Mab亚类均为Ig G1,效价达1∶128 000,抗体3C5、4B7的敏感度IC50分别为2.5、5.0μg/m L。Western blotting结果显示单克隆抗体可以与本实验室12株副溶血性弧菌(V.parahaemolyticus A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、ATCC17802、ATCC33847)的外膜蛋白有不同程度的结合反应,与4株溶藻弧菌中的3株(V.alginolyticus A、B、C)外膜蛋白能够较好的结合,与1株鳗弧菌(V.anguillarumMVM)外膜蛋白也有轻微的结合反应,实验制备的单克隆抗体可用于弧菌Omp K的基础研究和快速检测。     

解淀粉芽孢杆菌psd基因过表达对胞苷发酵的影响

以解淀粉芽孢杆菌BG-09(Bacillus amyloliquefaciens BG-09)为出发菌株,分析代谢途径中与细胞膜渗透性有关的基因psd,研究过表达基因psd对胞苷发酵的影响。以解淀粉芽孢杆菌BG-09基因组为模板克隆psd,构建了含psd的重组质粒pHT43-psd,通过化学转化法转入菌株大肠杆菌DH5α,验证成功后将其转入B.amyloliquefaciens BG-09,获得重组菌株B.amyloliquefaciens BG-09-psd。将B.amyloliquefaciens BG-09-psd菌株通过摇瓶发酵,研究过表达基因psd对菌体的生长、胞苷和尿苷产量积累的影响。结果显示,重组菌株B.amyloliquefaciens BG-09-psd发酵液中胞苷浓度为1.199 g/L,与对照菌株B.amyloliquefaciens BG-09相比,提高了15.51%,尿苷浓度为0.552 g/L,增加了6.56%,表明过表达基因psd可促进胞苷的积累。     

Acid Resistance and Molecular Characterization of Escherichia coli O157:H7 and Different Non‐O157 Shiga Toxin‐Producing E. coli Serogroups

The objective of this study was to compare the acid resistance (AR) of non‐O157 Shiga toxin‐producing Escherichia coli (STEC) strains belonging to serogroups O26, O45, O103, O104, O111, O121, and O145 with O157:H7 STEC isolated from various sources in 400 mM acetic acid solutions (AAS) at pH 3.2 and 30 °C for 25 min with or without glutamic acid. Furthermore, the molecular subgrouping of the STEC strains was analyzed with the repetitive sequence‐based PCR (rep‐PCR) method using a DiversiLab^TM system. Results for a total of 52 strains ranged from 0.31 to 5.45 log reduction CFU/mL in the absence of glutamic acid and 0.02 to 0.33 CFU/mL in the presence of glutamic acid except for B447 (O26:H11), B452 (O45:H2), and B466 (O104:H4) strains. Strains belonging to serogroups O111, O121, and O103 showed higher AR than serotype O157:H7 strains in the absence of glutamic acid. All STEC O157:H7 strains exhibited a comparable DNA pattern with more than 95% similarity in the rep‐PCR results, as did the strains belonging to serogroups O111 and O121. Surprisingly, the DNA pattern of B458 (O103:H2) was similar to that of O157:H7 strains with 82% similarity, and strain B458 strain showed the highest AR to AAS among the O103 strains with 0.44 log reduction CFU/mL without glutamic acid. In conclusion, STEC serotypes isolated from different sources exhibited diverse AR and genetic subtyping patterns. Results indicated that some non‐O157 STEC strains may have higher AR than STEC O157:H7 strains under specific acidic conditions, and the addition of glutamic acid provided enhanced protection against exposure to AAS.