高活性豆豉纤溶酶产生菌出发菌株的筛选

目的:快速筛选高产纤溶酶产生菌出发菌株。方法:在普通培养基中添加血纤维蛋白作为初筛平板,通过液态发酵的方法对纤溶酶产生菌进行复筛。结果:从12个产生地的豆豉中筛选出产纤溶酶活力较高的菌株,酶活达到1230～1256IU/mL。结论:本研究为开发具有高纤溶活性豆豉保健食品奠定可靠的理论依据。     

高产纤溶酶菌株筛选及发酵鹰嘴豆培养基优化

从大豆发酵物中分离出一株高产纤溶酶的菌株,经API实验及16S rDNA序列分析鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。并对该菌株发酵产生的纤溶酶性质进行了初步研究,表明该菌株产生的纤溶酶为碱性丝氨酸金属蛋白酶,并且具有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的作用,为一种新型的纤溶酶。同时,为了提高鹰嘴豆的经济价值,首次采用液态发酵方法利用筛选得到的菌株发酵鹰嘴豆产纤溶酶,通过Plackett-Burman设计和响应面结合的方法,确定其最优培养基组分(质量浓度)为:蔗糖50.0 g/L,鹰嘴豆34.85 g/L,氯化钙0.42 g/L,硫酸镁0.35 g/L,磷酸氢二钾5.00 g/L,磷酸二氢钾6.00 g/L。优化后枯草芽孢杆菌发酵鹰嘴豆产纤溶酶活力为3210U/mL,比基础培养基提高了2.01倍。     

酒醅中产纤溶酶细菌的分离及发酵产酶研究

该研究从酒醅中筛选高产纤溶酶的细菌。经过初筛和复筛得到1株高产纤溶酶的菌株,命名为DL-1。通过菌株形态学和生理生化试验初步鉴定菌株DL-1为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株DL-1产纤溶酶发酵试验结果表明,最适菌龄为4 h,最适碳源为牛肉膏,最适氮源为豆饼粉。在此条件下,所产的纤溶酶在血纤维蛋白平板上形成的溶圈面积可达379.79 mm2。     

产纤溶酶米曲霉的筛选及诱变育种

利用自己设计的筛选方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。SA-6经过紫外线、^60Co和亚硝基胍诱变，筛选得到突变株NA-25，其产酶酶活为63U／mL，是出发菌株SA-6的2．52倍。突变株NA-25的发酵性状改变，其产纤溶酶的高峰比出发菌株迟了约10h。     

红河传统发酵豆豉中高纤溶活性菌株的分离筛选及其纤溶酶基因分析

运用脱脂乳固体培养基及纤维蛋白固体培养基的两步分离筛选法,从云南红河传统发酵豆豉中分离筛选具有高产豆豉纤溶酶活性的菌株,同时对它们的豆豉纤溶酶基因进行克隆分析,以期为新型功能性豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。研究结果表明,两步分离筛选法能有效地从云南红河传统发酵豆豉中筛选到高产豆豉纤溶酶的菌株Bacillus subtilis LC-2-1,对该高产菌株的豆豉纤溶酶成熟肽基因分析及预测结果表明,菌株B subtilis LC-2-1确实能分泌一种由825个碱基编码275个氨基酸残基且分子量约为27.4kDa的豆豉纤溶酶,与纳豆激酶及其他豆豉纤溶酶相比差异显著,同源性仅为85.1%。同时其豆豉纤溶酶活性分析结果则表明,菌株B subtilis LC-2-1所产纤溶酶活性较高,可达79.84 U/mL。因此,本研究结果将为新型且具有溶血栓功能发酵豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。     

产纤溶酶的米曲霉筛选及测定方法的研究

利用平板透明圈法作为初筛方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。通过比较发现，可以用自制纤维蛋白代替纤维蛋白原和尿激酶测定发酵液的纤溶酶酶活，在大通量的菌株筛选过程中可以节省大量费用。     

正交旋转组合设计优化豆豉纤溶酶Subtilisin FS33的培养条件

从中国传统豆豉中分离筛选出一株高产纤溶酶菌株Bacillus subtilis DC33,并研究营养和环境因素条件对 DC33产酶的影响.在单因素水平试验基础上,选择对 DC33产纤溶酶影响较大的聚蛋白胨、半乳糖、硫酸镁、硫酸锂和吐温 80五因素,通过正交旋转组合设计得到DC33产酶活力与营养因素水平的回归方程,极值分析得DC33优化发酵培养基(g/L):聚蛋白胨22,半乳糖1.56,硫酸镁0.5,硫酸锂0.01,K2HPO4 2.0,NaH2PO4 1.0,CaCO3 2.0,吐温80 0.33 mL.在此条件下,DC33产纤溶酶达到780 U/mL,较优化前提高86.7%.     

一株产纤溶酶的耐盐微生物的筛选及发酵条件研究

用海水配制培养基,先用酪蛋白培养基富集和筛选高蛋白酶活力菌株,再经过粗纤维蛋白平板初筛定向分离、纤维蛋白平板上复筛纤溶酶产生菌,比常规方法更简便,成本更低,得到更多的有用微生物菌株。利用该方法从广西壮族自治区北海市的红树林滩涂海泥中,获得稳定产生纤溶酶的GXF-18菌株,在初始pH7.9、38℃、160 r/min、装液量50mL(500 mL三角瓶)的条件下,GXF-18产生的纤溶酶活力稳定在1500 U/mL以上。该GXF-18具有耐受高盐的特性,在微碱性下能产生较高活力的纤溶酶,是研究和开发利用微生物来源纤溶酶的新材料。     

产纤溶酶菌株根霉12~#的诱变育种及固态发酵培养基的优化

以产纤溶酶的菌株根霉 12 # 为出发菌株 ,对其进行紫外线 氯化锂复合诱变 ,筛选到74株制霉素抗性突变株。所有抗性突变株经进一步固态发酵筛选 ,获得了 4株稳定高产纤溶酶的正突变株 ,其纤溶酶产量分别比出发菌株提高 3 2 9%、2 1 5 %、2 2 3 %和 18 0 %。以其中的 1株为菌种 ,研究了固态发酵产生纤溶酶的培养基组成。采用单因素试验、均匀设计方法对固态发酵培养基的碳源、氮源、碳氮比、初始pH、加水量、无机盐加量进行了优化。结果表明 ,实验范围内根霉 12 # 固态发酵产生纤溶酶的适宜培养基组成为 :m (麸皮 )∶m (豆粕 )=1∶2 ,初始 pH5 0 ,加水量 0 75mL/g物料 ,MnSO4·H2 O和 (NH4) 2 SO4加量分别为 0 2 5 %和1 42 % (对物料 )。优化条件下的固态发酵纤溶酶产量平均达 744 5 7U/g物料。     

根霉产纤溶酶液体发酵培养基的优化

通过单因素,均匀设计和正交试验,从碳氮比、无机氮源、胰蛋白胨、pH值方面优化了根霉液体发酵产生纤溶酶的培养基组成.试验结果表明,试验范围内菌株液体发酵产纤溶酶的适宜培养基组成为:麸皮水5.6%,豆粕水解液5.3%,二者体积比为2∶3,磷酸氢二铵0.4%,硝酸钠0.5%,pH值自然.优化培养基的纤溶酶酶活力为140.00U/mL.     

胞外纤溶酶产生菌的筛选及其产酶条件研究

从豆豉、酱豆和纳豆样品中分离筛选到一株具强力纤溶活性的细菌 ,编号为NK—5,经鉴定为芽孢杆菌属枯草杆菌群细菌。该菌在固态基质及液体培养基中均产生大量胞外纤溶酶。摇瓶发酵试验表明 ,其最适产酶碳源和氮源分别为蔗糖和蛋白胨。通过正交试验确定最适产酶培养基为 :豆粕粉 2 0 %、麸皮 0 5%、玉米淀粉 0 5%、KH2 PO4 0 2 %、K2 HPO40 4 %、MgSO4 0 0 5%、CaCl2 0 0 2 % ,pH7 0。在优化条件下 ,发酵液酶活达 6 83 3IU/mL     

产酱香细菌中高活性纤溶酶菌株的筛选

以酱香型酒生产所使用的高温大曲、酒糟、窖泥为样品,经分离筛选获得24 株产酱香结果优良的细菌及16 株产酱香结果较好的细菌。对产酱香细菌进行纤溶酶活性筛选,得到一株高产纤溶酶菌株GZJSⅠ-2,经初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),测得其发酵液酶活力(相当尿激酶酶活力单位)为1479.11U/mL,酶比活力为21751.62U/mg。以pH7.4 的生理盐水作阴性对照,以尿激酶作阳性对照,在体外研究菌株GZJSⅠ-2 发酵液上清液的抗凝集和血栓溶解作用,结果表明该菌株发酵上清液具有显著的体外血栓溶解作用,及一定的抗凝血效果,具有潜在的应用价值。     

产低温蛋白酶酵母菌株的筛选及发酵培养基优化

该研究从新疆本地分离获得的200株酵母菌中筛选产低温蛋白酶的菌株,并通过形态观察、生理生化试验及分子生物学方法 对菌株WLY1、WLY2和MLY1进行鉴定,最后通过响应面法对20 ℃条件下蛋白酶活力高的菌株的发酵培养基配方优化。 结果表明, 共筛选到14株产低温蛋白酶菌株,其中3株（WLY1、WLY2和MLY1）于20 ℃条件下仍具有较强的产低温蛋白酶能力,其蛋白酶酶活 力依次为69.03 U/mL、34.20 U/mL、29.70 U/mL;鉴定菌株WLY1、WLY2和MLY1分别为双倒卵形红冬孢酵母（Rhodosporidium diobo- vatum）、Cryptococcus adeliensis、Barnettozyma californica;其中菌株WLY1产低温蛋白酶能力强,且其最佳产蛋白酶培养基配方为酵 母浸粉1.64%、蛋白胨1.21%、干酪素1.48%。在此最优条件下,菌株WLY1的蛋白酶活力达到251.51U/mL,约为优化前的4倍,同比其 他产蛋白酶功能菌具有较大的工业应用潜力。     

Effect of high-pressure processing on strains of Enterobacter sakazakii

Four strains of Enterobacter sakazakii were inoculated into tryptic soy broth and reconstituted powdered infant formula and exposed to high-pressure processing. Pressures of 200, 400, and 600 MPa were used for each medium for 1 min. E. sakazakii was reduced by more than 6 log (strains A and B) in both media at 600 MPa. Strain B was significantly (P < or = 0.05) more pressure resistant than the other strains, with just more than a 3-log reduction at 600 MPa in both media. The reconstituted infant formula has a significant (P < or = 0.05) protective effect for certain strains and pressures (strain B at 400 MPa and strain D at 400 and 600 MPa). Differences in log reductions between media (milk and broth) were also observed for certain strains and specific pressures (strain B at 400 MPa and strain D at 400 and 600 MPa; P < or = 0.05). This research showed that E. sakazakii, when present in reconstituted powdered infant formula, can be submitted to high-pressure processing (600 MPa for 1 min) and achieve log reductions ranging from 3 to 6.84, depending on the strain.     

荧光酶免疫分析仪-微生物鉴定仪在水产品沙门氏菌检测中的应用

采用全自动荧光酶免疫分析仪进行初筛,全自动微生物鉴定仪进行阳性菌株的生化性状鉴定,建立了水产品沙门氏菌的快速检测方法。经过48h增菌之后,VIDAS法可在45min之内出具结果,阳性菌株经选择性培养基分离及纯化后根据VITEK检测结果判定是否属于沙门氏菌。联用法的灵敏度为菌悬液浓度≥103cfu/mL,一般染菌样品经48h增菌之后菌悬液浓度均能达到106cfu/mL以上。采用联用法与国标法对参考菌株和124种水产品进行检测,结果完全一致。联用法快捷、有效,适用于水产品沙门氏菌的检测。     

清香型白酒大曲中高产四甲基吡嗪菌株的筛选、鉴定及发酵培养基优化

为通过生物法改善并提高清香型白酒酿造中功能性成分四甲基吡嗪的含量,该研究采用传统分离方法从清香型白酒大曲中分离纯化芽孢杆菌（Bacillus sp.）,通过气相色谱（GC）法筛选高产四甲基吡嗪的菌株,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并对其产四甲基吡嗪发酵培养基配方进行研究。结果表明,共分离得到31株芽孢杆菌,从中筛选得到7株产四甲基吡嗪的芽孢杆菌,其中菌株q94的四甲基吡嗪产量最高,为（0.36±0.01）g/L,其被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。菌株q94产四甲基吡嗪的最优培养基组成为：蔗糖80 g/L,蛋白胨10 g/L、酵母浸粉20 g/L、磷酸氢二铵30 g/L、磷酸二氢钾15 g/L,在此优化条件下,菌株q94的四甲基吡嗪产量可达（3.32±0.18）g/L。     

海洋源纤溶酶高产菌株的诱变育种及液体培养基优化

为获得纤溶酶高产菌株及其最优发酵条件,以海洋环境来源的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）H-A-03为出发菌株,经过60Co辐射诱变获得了一株遗传稳定性好的纤溶酶高产菌株F8-C,其酶活力较出发菌株提高28.78%。采用统计学优化方法获得了组分更简单、用量更少、更利于菌株产酶的培养基：可溶性淀粉41.6 g/L、黄豆粕粉26.2 g/L、CaCl2 1.0 g/L,KH2PO4 2.0 g/L。在此基础上,3 L摇瓶放大试验结果显示,菌株F8-C的产酶量达到（3 231±21） U/mL,较出发菌株H-A-3提高44.8%。结果表明利用60Co辐射诱变育种,并采用统计学方法优化培养基,对于提高枯草芽孢杆菌纤溶酶的产酶量是一种有效策略。该研究结果也将为下一步发酵罐扩大试验奠定基础。     

引起陈酿黄酒酸败乳酸杆菌的检测方法和培养基研究及初步鉴定

通过加可溶性淀粉的量、培养温度、加"X"物质的量三因素三水平对酸败成品黄酒中乳酸杆菌培养基配方和培养方法的正交试验研究,性能的测定和初步鉴定研究,以及对原酒培养基(加饭酒培养基:坛装加饭酒加水稀释至酒精度17.0%vol或不稀释)培养、检测试验研究,结果表明:酸败成品黄酒中乳酸杆菌培养、分离的培养基配方和培养方法为:加饭酒稀释至酒精度17.0%voL、加"X"物质的量0.3%、加可溶性淀粉0.5%或不加、培养温度18℃或30℃、压盖密封培养;酸败成品黄酒主要菌种,在上述培养基中18℃生长良好,25℃以上生长不良或生长极慢,初步鉴定为乳酸杆菌的新种,命名为黄酒乳酸杆菌Ⅲ-1(Lactobacillus chinese-rice-wineⅢ-1)。酸败成品黄酒的部分菌种,在上述培养基中30℃生长良好,20℃或以下生长缓慢,初步鉴定为乳酸杆菌的新种,命名为黄酒乳酸杆菌Ⅲ-2(Lactobacillus chinese-rice-wineⅢ-2)。原酒培养基(加饭酒培养基)也能检测部分贮存黄酒酸败乳酸杆菌。     

旱生植物内生细菌的分离及耐旱菌株的筛选鉴定

为筛选耐旱内生细菌,并对其进行鉴定,以典型耐旱植物为材料,分离纯化出142株内生细菌。采用液体培养基中添加聚乙二醇6000降低渗透势的方法分析内生细菌的耐旱情况。从中筛选出1株能够耐受质量浓度为60g/100mL聚乙二醇6000的内生细菌PB14。对该菌株进行形态学观察,生理生化和16S rDNA序列鉴定,判定菌株PB14为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。