酱香型大曲中蛋白酶产生菌的分离鉴定及产酶条件研究

对酱香型大曲中蛋白酶产生菌进行分离鉴定,并对其最适产酶条件进行研究.采用酪素培养基,从大曲中分离出3株蛋白酶产生菌,筛选出酶活力最高的菌株,经16S rRNA同源序列分析并结合其形态学特征鉴定为枯草孢杆菌(Bacillus Subfilis).以小麦为固体培养基,从温度、初始pH值、培养基水分含量、环境湿度等方面研究其最适发酵条件.最终结果为在培养温度为45℃、初始pH值为5.0、培养基内水分的含量为55％、环境湿度为80％条件下培养72h,其酶活力可达1717.5U/g.     

浓香型大曲中蛋白酶产生细菌的分离鉴定

从浓香型大曲中分离纯化得到5株产蛋白酶细菌,对其进行了生化分析,结合《伯杰细菌鉴定手册》对这5株细菌的鉴定。鉴定结果为：A苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）;B枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）;C蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）;D多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）;E枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对产酶能力最强的C菌株用Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,鉴定结果与生化鉴定结果相符合。     

浓香型酒大曲中细菌的分布及主要产酸细菌的鉴定

本实验对大曲中的细菌类群进行了剖析，并对芽孢杆菌和非芽孢杆菌在大曲中的量比关系进行了探讨。同时，也对主要产酸细菌进行了分类鉴定。     

浓香型大曲中酯化酶细菌的分离鉴定及产酶条件研究

从浓香型大曲中分离得到1株产酯化酶细菌,经Biolog微生物自动分析系统鉴定为血红鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas Saltguinis).在液体发酵培养基中,37℃、150r/min恒温振荡培养48h,发酵液酶活可达15.35U/mL.对该菌株产酯化酶的培养条件进行研究,结果表明:以黄豆粉为氮源,玉米粉为碳源,初始pH值为7.0,32℃下培养48h,酶活可达18.26U/mL.     

浓香型大曲中一株产红色素细菌的分离和初步鉴定

从浓香型曲药中分离得1株产红色素的菌株。该菌株经初步鉴定为枯草芽孢杆菌,经革兰氏染色为阳性菌,呈短杆状,好氧,能在较广泛的温度和酸度下生长,能分解淀粉和液化明胶。     

浓香型大曲中蛋白酶菌株的分离及酶学性质研究

从浓香型大曲中分离得到1株产蛋白酶优势菌株,并将该菌所产蛋白酶经硫酸铵分级沉淀、透析、吸附树脂处理,得到蛋白酶粗酶。对该酶的最适pH值、pH值稳定性、最适温度、温度稳定性、金属离子影响等进行研究。结果表明,该菌株产蛋白酶的最适pH值为7,pH值稳定性较差;最适温度为40℃,热稳定性随温度增加而降低;金属离子Li+和螯合剂EDTA对该酶具有抑制作用,金属离子Mn2+、Fe3+、Cu2+、K+、Zn2+、Mg2+、Ca2+等均对该酶具有激活作用,其中Zn2+对该酶的激活作用最强。     

酱香型高温大曲中高产蛋白酶细菌的分离及鉴定

用检测蛋白酶透明圈和蛋白酶活性测定相结合的方法,从酱香型高温大曲中筛选出1株高产蛋白酶细菌,并通过生理生化特征实验及16S r DNA序列同源性分析,鉴定该高产蛋白酶菌株为解淀粉芽孢杆菌。     

浓香型大曲发酵力测定条件探讨

本文探讨了用ＣＯ２失重法测定浓香大曲发酵力的影响因素，试验表明：培养基种类、糖度、体积、曲药接种量、发酵温度、发酵时间等因素都对大曲发酵力结果有增大增；初步提出了测定大曲发酵力的最适条件；用高梁粉糖化液作培养基，糖度７Ｂｅ、体积５０ｍｌ，大曲接种量０．８％（０．４ｇ），温度３０℃时间７２小时，用ＣＯ２生成量表示发酵车强弱，其结果准确可靠，符合实际。     

酱香大曲中产香细菌发酵产蛋白酶的条件优化

从茅台酱香型白酒生产用大曲中分离的一株细菌HMZ-D,对固态发酵产蛋白酶的发酵温度、pH值、水分含量、接种量、发酵时间、原料配比等影响因素进行研究.结果表明,对菌株发酵产蛋白酶影响因素大小顺序为发酵时间(D)＞水分含量(C)＞温度(B)＞接种量(A);正交试验结果所得到的菌株产酶最优方案为10％接种量、发酵温度35℃、含水量40％、发酵时间6d,在此发酵条件下蛋白酶酶活为2901.3U/g醅.     

酱香型大曲中产蛋白酶放线菌的分离及产酶条件研究

对酱香型大曲中高产蛋白酶的放线菌进行分离鉴定,并对其产酶特性进行研究。通过稀释涂布划线法和平皿生化反应法对目的菌株进行分离纯化,并运用形态学特征和遗传学特征对目的菌株进行鉴定。并对目的菌株的产酶条件进行优化。结果显示,分离出的菌株经分子生物学鉴定为娄彻氏链霉菌（Streptomyces rochei）,经单因素与正交试验优化得出的最佳发酵条件为pH值9.0,发酵温度35 ℃,转速180 r/min,此时酶活力最高为28.62 U/mL。     

浓香型(泸型)大曲的研究及其应用

大曲的质量对曲酒的质量和出酒率都有极大的影响。大曲作为大曲酒生产的糖化剂、发酵剂，含有多种微生物及其产生的多种酶类。传统制曲采用自然接种，不同发酵阶段其微生物类群亦不同。整个发酵过程中，曲皮微生物的数量均高于曲心，因此，曲皮的糖化酶、液化酶活力始终高于曲心。总观发酵全过程，微生物的活动规律与酶类的变化规律是一致的。大曲生产工艺的发展过程：(1)传统发酵工艺——地面堆积发酵，制曲坯的过程也是自然接种的过程，发酵期间通过人工翻动、堆烧、开启门窗等过程来控制发酵过程中对温度和湿度的要求。(2)大曲强化发酵技术，制曲时，只需在拌料时加入0．5％～1．0％的优质种曲，按常规制曲，成曲即为强化大曲。(3)大曲架式发酵微机控制系统及制曲工艺，采用了自动控制系统。大曲质量的好坏，取决于生产过程各步工序的质量。传统浓香型(泸型)白酒采用中温曲生产，现也有厂家把高温曲、中温曲混合使用，把酯化曲与中温曲混合使用的，目的是使白酒产品更贴近市场。     

浓香型成品大曲中三类水解酶的分离纯化研究

采用盐析、离子交换、分子筛筛选等方法分离、纯化浓香型大曲中糖化淀粉酶、液化淀粉酶和酸性蛋白酶,研究了3种酶的相关酶学特性。结果表明,成品浓香型大曲中,糖化淀粉酶活力均值为441.0 U/g干曲,液化淀粉酶活力为5.68 U/g干曲,酸性蛋白酶活力均值达51.2 U/g干曲。糖化淀粉酶纯化倍数平均达2.44倍,酶活回收率为2.51%,表观分子量2.5×104,液化淀粉酶的纯化倍数平均达3.24倍,酶活回收率28.28%。酸性蛋白酶纯化倍数平均达4.05倍,酶活回收率可达35.62%。     

浓香型大曲中可培养真菌的分离鉴定与系统发育学分析

采用传统微生物分离手段从浓香型大曲中分离纯化得到69株真菌。通过形态学观察、分子生物学鉴定以及系统发育学分析其分类地位。结果表明:采用ITS区序列进行真菌的分子鉴定可将大多数的真菌鉴定到属,部分真菌甚至能够鉴定到种;浓香型大曲内分离获得的真菌类群主要包括曲霉属(Aspergillus)、红曲霉属(Monascus)、根毛霉属(Rhizomucor)、横梗霉属(Lichtheimia)、青霉属(Penicillium)、拟青霉属(Paecilomyces)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)、异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomala)、锁掷酵母(Sporidiobolus pararoseus)等目前已报道的大曲真菌类群,同时也发现了Merimbla ingelheimensis、踝节菌属(Talaromyces),尾孢菌属(Cercospora)、枝孢菌属(Cladosporium)、Acremonium impicatum、脉孢菌属(Neurospora)等霉菌类群在大曲中分布。其中曲霉属是优势种群,其菌株数目和种类最多,分别占43.48%和20.69%。本研究极大地丰富了对浓香型大曲中真菌种群的认识。     

浓香型大曲酒酒精发酵的主要影响因素

浓香型大曲酒酒精发酵的主要影响因素有养分、温度、氧气、酸度，这些因素的控制是酒精发酵好与坏的关键。糖主要为酵母提供能源进行能量代谢，代谢产物为酒精；窖池内氧含量的高低直接影响酵母的生长和代谢途径，酒精发酵是酵母在无氧条件下的代谢途径；温度、pH直接影响微生物的生长及其酶的活性。     

偏高温大曲发酵过程中芽孢杆菌的演替

采用经典微生物学方法和16S rRNA基因系统发育分析的方法,对偏高温大曲发酵过程中的芽孢杆菌类群及其演替情况进行了分析。结果表明,在偏高温大曲发酵过程中,芽孢杆菌数量从拌料的6.0×105个/g曲快速上升到最大值3.2×107个/g曲（第一次翻曲,4 d）,最后降低到1.1×106个/g曲;芽孢杆菌类群从最初的3种增加到10种后减少至第一次翻曲时（4 d）的9种,随后多样性持续下降,到收曲时仅检测到6种。同时发现,在整个发酵过程中Bacillus licheniformis为绝对优势种,在整个发酵环节中均存在。Bacillus产芽孢的特性保证了其种群的延续性。     

洋河酒厂成品大曲水解酶系研究

采用盐析、离子交换、分子筛筛选等方法分离、纯化洋河大曲中糖化淀粉酶、液化淀粉酶和酸性蛋白酶,并研究了3种酶的相关酶学特性。研究结果表明,成品洋河大曲中,糖化淀粉酶活力均值为441.0u/g干曲,液化淀粉酶活力为5.68u/g干曲,酸性蛋白酶活力均值达51.2u/g干曲。糖化淀粉酶纯化倍数平均达2.44倍,酶活回收率2.51%,表观分子量2.5×104,液化淀粉酶的纯化倍数平均达3.24倍,酶活回收率28.28%。酸性蛋白酶纯化倍数平均达4.05倍,酶活回收率可达35.62%。     

浓香型大曲糖化酶特性研究

大曲作为大曲酒生产的糖化剂、发酵剂,含有多种微生物及其产生的多种酶类。研究表明,大曲糖化酶的最适温度为50℃,最适pH值为6.0;低浓度(0～2 mg/L)的Cu2+对大曲糖化酶有激活作用,高浓度(2～12 mg/L)的Cu2+对糖化酶有抑制作用。     

浓香型大曲酒中异杂味的产生与防止措施

白酒的主要成分是乙醇和水、约占总重量的98％，然而决定白酒风格香气和口味的却是仅占白酒重量2％左右的微量成分，其中也包括构成白酒的杂味物质，主要有臭味，苦味，酸味，辣味，涩味，油味，辅料味等，由于这些异杂味的存在不仅破坏了浓香型大曲酒的风格，而且也影响了香气，干扰了口味，破坏了酒体，是名优山酒之大敌。因而，掌握异杂味的来源和防止措施，是提高浓香型大曲酒质量的重要保证。