米酵菌酸检测方法研究进展

米酵菌酸是一种毒性极强的真菌毒素,近年来,米酵菌酸中毒时有发生,其致死率极高.因此米酵菌酸的检测也备受关注,本文总结了米酵菌酸的检测方法,以为米酵菌酸的检测和新的检测方法开发提供参考.     

米酵菌酸的相关检测方法研究进展

米酵菌酸是一种由唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰酵亚种产生的生物毒素,该毒素结构稳定,一般烹调方法不会破坏其毒性,摄入后通常引起人体器官损害甚至死亡.谷类发酵食品(河粉、发酵米粉、玉米面等)、薯类食品(马铃薯粉条、甘薯面)、变质银耳和黑木耳、椰子制品等均易受唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰酵亚种污染.米酵菌酸中毒事件常见于东南亚地区和印度...     

胶体金免疫层析法快速检测食品中的米酵菌酸

制备特异性识别米酵菌酸的单克隆抗体,并以胶体金标记用作示踪物,建立胶体金免疫层析快速检测方法。研究胶体金标记体系pH值、抗原、抗体质量浓度、离子强度、表面活性剂以及样品前处理方法等对胶体金层析卡性能的影响。结果表明:在最适条件下,所建立的胶体金免疫层析方法对米酵菌酸的定量检出限为1.2 μg/kg,线性范围1.8~7.2 μg/kg,定性检出限16.0 μg/kg。该方法特异性良好,与食品中常见的毒素无交叉反应,对银耳、木耳和米粉等样品的添加回收率在80.2%~101.2%之间,相对标准偏差小于6.4%,且结果与LC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速和低成本等特点,可以满足食品中米酵菌酸现场大批量筛查的需求。     

广东省首起米粉米酵菌酸中毒病原菌鉴定研究

目的对广东省首次因食用河粉引起米酵菌酸中毒的病原菌进行检测、鉴定和分析。方法病原菌的分离和鉴定参照GB/T 4789.29—2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》,同时采用16S rDNA序列测序进行分子鉴定。结果 31份食物中毒相关食品样品中有10份检出伯克霍尔德菌(28株),包括唐菖蒲伯克霍尔德菌(15株)、洋葱伯克霍尔德菌(3株)、越南伯克霍尔德菌(3株)等,经16S rDNA的序列测定、产毒培养、米酵菌酸测定、毒力试验等分析,在3份样品中检出14株可产生米酵菌酸的唐菖蒲伯克霍尔德菌。结论采用生化并结合16S rDNA序列测定鉴定唐菖蒲伯克霍尔德菌,结合产毒试验可确定为引起米酵菌酸食物中毒的是唐菖蒲伯克霍尔德椰毒致病种。     

紫外光对米酵菌酸的降解效果及动力学分析

米酵菌酸(BA)具有剧烈毒性,为了研究BA经紫外照射后的降解效果,以BA-甲醇水为研究模型,考察紫外照射强度、BA初始浓度、液层厚度对BA的降解效果,并对其降解曲线和降解方程进行拟合.结果表明,紫外光照射能有效降解BA,且降解过程符合一级动力学方程;紫外强度越强、BA初始越低、液层厚度越薄,BA的降解速率越快.在紫外强...     

异丙威单克隆抗体的制备及鉴定

异丙威是我国农业生产中常见的杀虫剂,在果蔬、粮食和烟草等中都有广泛应用,然而这类农药也具有较强生物毒性。为了制备异丙威单克隆抗体,以实现对农药异丙威药物的快速检测。本文以2-异丙基苯酚等为原料,合成异丙威半抗原及人工抗原,并通过免疫小鼠、细胞融合、克隆、筛选获得单克隆抗体细胞株,经腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法制得异丙威单克隆抗体,通过间接竞争ELISA法对抗体的特异性进行鉴定。结果表明,制备的异丙威单克隆抗体检测范围为1.88~82.80 ng/m L,抗体的IC50为11.70ng/m L,最低检测限为0.54 ng/m L,抗体与克百威、西维因、涕灭威、灭多威、2-异丙基苯酚5种异丙威结构类似物均无明显交叉反应,具有高特异性,能够满足农产品中异丙威残留检测的要求。异丙威单克隆抗体的制备为异丙威快速检测产品的开发奠定了基础。     

一起米酵菌酸食物中毒致死事件的调查

目的 调查米酵菌酸食物中毒发生的原因,为预防和控制由此引发的食物中毒提供科学依据。方法 通过实验室快速检测确定致病因子,根据致病因子发病潜伏期推断可疑餐次及食物,结合流行病学调查、食品/环境卫生学调查、采样及检测结果,判定中毒餐次及食物。结果 流行病学调查提示食物与发病之间存在关联,病例发病潜伏期及临床表现符合米酵菌酸食物中毒发病特点,留样食物和病例血液检出米酵菌酸。结论 中毒餐次为2020年7月19日晚餐,中毒食物为炒河粉,原因是某食品厂在生产、运输等环节存在违规操作,使河粉受到细菌污染,细菌增殖并产毒,导致此次食物中毒。     

一起米酵菌酸中毒事件的病因学诊断

目的 调查深圳市一起食用黑木耳引起的中毒事件,鉴定病原菌种类,追溯产毒菌株来源,研究米酵菌酸在体内的分布和代谢情况,为此类中毒事件的处置提供借鉴。方法 病原菌的分离和鉴定参照GB/T 4789.29—2003,同时采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对病原菌种类进行鉴定。采用超高效液相色谱-复合线性离子阱串联质谱技术（UPLC-QTRAP-MS/MS）对黑木耳以及患者血液、肝脏和尿液、菌悬液等样品中的米酵菌酸进行检测。结果 在残留食材黑木耳、患者血液和尿液中均检出不同浓度的米酵菌酸。患者中毒5 d后进行了肝移植,坏死的肝脏中检出高浓度米酵菌酸。患者中毒9 d后,跟踪监测显示患者血液、尿液中仍然含有一定浓度的米酵菌酸。从患者采摘的干木耳及泡发的湿木耳中均分离出唐菖蒲伯克霍尔德菌,经实验室培养后,两株菌株均产出米酵菌酸。结论 本次事件是因患者采摘的干木耳带有病原菌,在长时间泡发过程中细菌产毒,患者食用含高浓度米酵菌酸的木耳后,毒素广泛分布于患者各个器官,导致多器官衰竭死亡。     

米酵菌酸荧光定量检测卡的开发和应用

目的开发一种快速定量检测米面等食品中米酵菌酸的方法。方法首先,制备米酵菌酸-牛血清白蛋白偶联物(bongkrekic acid-bovine serum albumin, BA-BSA),作为检测卡的包被原料包被至硝酸纤维素膜上,用本公司自制BA单克隆抗体与时间分辨微球标记放入微孔中,然后将包被后的膜和标记后的微孔组装成快速检测卡。结果快速检测卡的线性范围为1～100 ng/mL,前处理采用碱性甲醇水溶液提取样本中米酵菌酸。结论本方法快速、准确、灵敏度高,适合样品中米酵菌酸的检测。     

植物乳杆菌对米酵菌酸的吸附特性研究

为了探究植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）X1对米酵菌酸（Bongkrekic acid,BA）的吸附特性及其影响因素。本文采用高效液相色谱（High performance liquid chromatography,HPLC）的方法测定菌体对米酵菌酸吸附率。实验考察了时间、温度、pH、菌体浓度、米酵菌酸浓度及在模拟胃肠道环境下对米酵菌酸吸附效果的影响,并对吸附过程进行热力学与动力学拟合。结果表明,菌株吸附米酵菌酸短时高效,1 h后达到饱和;温度、菌体浓度与米酵菌酸浓度升高均促进吸附进行且吸附后不易解吸。温度37℃、菌体浓度6 g·L-1与米酵菌酸浓度10 mg·L-1为最佳吸附条件,其吸附率分别为52.70%、54.12%与48.53%;酸性环境有利于米酵菌酸的吸附,pH为3时,吸附率与单位吸附量最高;在模拟胃液与肠液环境中吸附效果减弱。吸附过程符合Langmuir方程和准二级动力学方程,且为单分子层吸附。综合热力学与动力学分析可得,吸附为自发、放热的过程,并且同时存在物理吸附与化学吸附。因此,植物乳杆菌X1作为米酵菌酸吸附剂有潜在的应用潜力。     

苏丹红Ⅰ酶联免疫吸附检测方法的建立

应用抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体12D8建立了间接竞争ELISA方法,用于检测辣椒粉中的苏丹红Ⅰ,最低检出限为4.22 ng/mL,检测范围为7.8～125 ng/mL.用体积分数70%甲醇水溶液提取辣椒粉中的苏丹红Ⅰ(80～4 000 ng/g),回收率为52.3%～110%,变异系数为3.2 %～8.9%.     

SM_2单克隆抗体的初步应用研究

以磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)为免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)为包被抗原。制备SM2单克隆抗体;利用杂交瘤技术和有限稀释法经亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的杂交瘤细胞,与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。利用本试验制备的单克隆抗体初步建立了动物组织中检测SM2的间接竞争ELISA方法。最低检出限为9.95 ng/mL,灵敏度为47.12 ng/mL。     

牛奶过敏原β-乳球蛋白抗体的制备及免疫检测方法的建立

本文将牛奶过敏原β-乳球蛋白抗原分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠制备其多克隆抗体和单克隆抗体,并对所获得的抗体进行了效价等特性测定;采用蛋白A亲和层析法将多克隆抗体进行了纯化,采用辛酸-硫酸铵法对单抗细胞株3A7进行了纯化;实验建立了双抗体夹心的ELISA检测方法,并对一些蛋白样品进行了初步的检测。实验结果表明,所制备的抗β-乳球蛋白兔多克隆抗体效价达到了1:6.56×106;Western-blotting鉴定结果显示所制备的多克隆抗体能够与β-乳球蛋白特异性反应;3株单抗的效价均在106以上,纯化后多抗仅与酪蛋白有一定的交叉反应,而纯化后单抗与乳中主要蛋白及其它过敏原蛋白基本没有交叉反应,特异性很好;利用所建立的方法对一些蛋白样品进行检测,准确率100%。     

ELISA方法与国标法在检测鲜奶中沙门氏菌的比较研究

应用直接ＥＬＩＳＡ方法对３５０份奶样进行沙门氏菌的检测，其阳性检出率为１．４％；同时采用常规方法检测，其阳性检测率为１．２％。与常规方法相比，该法的敏感性和特异性分别为１００％和９９．７％（３５０份奶样）。结果表明，该法具有快速、准确等特点，２￣３天即可完成样品筛选。     

地西泮单克隆抗体的制备及其酶联 免疫吸附检测方法的建立

目的 制备地西泮(Diazepam DZP)单克隆抗体,并且对制备的抗体进行一系列性质鉴定。方法 利用EDC法合成免疫原和包被原,用免疫原免疫Balb/C小鼠,当效价到1:16000以后取小鼠脾脏与SP2/0进行细胞融合。然后采用竞争结合双阳性两步筛选法,筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,并且利用有限稀释亚克隆方法得到单株细胞,采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。接着利用辛酸-饱和硫酸铵法对腹水型抗体进行纯化,利用酶联免疫吸附,SPR等方法对纯化后的抗体进行性质鉴定。结果 成功合成了地西泮免疫原和包被原,免疫Balb/C小鼠7次后效价达到1:16000,最终制备出单克隆抗体,抗体解离常数(KDs)为4.0985×10_-7M,且与大部分结构类似物没有明显的交叉反应。应用此抗体建立间接竞争ELISA法,抗体的IC₅₀=10.8ng/mL,检测范围为0.45ng/mL-862ng/mL。结论 制备出了地西泮单克隆抗体,为地西泮的免疫学检测提供了有力的支持。     

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

采用重氮法同时制备结合比分别为9.0、8.0、3.7 的3 种磺胺嘧啶免疫抗原,并将其免疫BALB/c 小鼠,其中结合比为8.0 的一组免疫效果最佳。获得一株稳定分泌抗磺胺嘧啶单克隆抗体的杂交瘤细胞(1F6),体内诱生法制备腹水。间接ELISA 测定腹水效价为1:1.28 × 106,建立间接竞争ELISA 标准曲线,其检测下限为10.4ng/mL,线性范围为14.8～421.5ng/mL,IC50 值为79.1ng/mL,与磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶交叉反应率分别为 0.3%、0.99%、4.5%,与磺胺甲噁唑、磺胺喹恶啉、对氨基苯甲酸、磺胺、对氨基苯磺酸未见有交叉反应。经鉴定,单克隆抗体免疫球蛋白为鼠IgG 的2b 亚类。     

苏丹红Ⅰ单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA 检测

重氮法合成苏丹红Ⅰ的结构类似物,通过活性酯法将苏丹红Ⅰ的结构类似物偶联到载体蛋白上制备人工抗原,用所制备的人工抗原免疫BALB/c 小鼠,采用细胞融合的方法制备苏丹红Ⅰ单克隆抗体,结果成功筛选到一株抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体,经鉴定为IgG2a 型,并建立间接竞争ELISA 检测方法,线性范围为0.5～10ng/mL,检测下限为0.1ng/mL,加标回收率为52.3%～110%,变异系数为3.2%～8.9%。     

酶联免疫法检测猪肉中的司帕沙星

为了建立一种检测猪肉中司帕沙星(SPFX)残留的方法,并且在检测时具有特异性高,背景低和无需样品预处理的特点.该研究制备了间接竞争性酶联免疫吸附剂和特异性抗司帕沙星单克隆抗体.结果表明,该抗体与氟甲喹(11.99％)、氟罗沙星(11.14％)、恩诺沙星(4.60％)、环丙沙星(0.31％)几乎没有交叉反应.该方法测定了...     

Indirect competitive enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA) for nitroimidazoles in food products

Ronidazole was used as the starting material to prepare an immunogen and coating antigen. An anti-nitroimidazole monoclonal antibody was produced and an indirect competitive ELISA was established to detect nitroimidazole compounds in food products. The IC₅₀ values were determined to be 0.20?ng/ml for metronidazole, 4.0?ng/ml for tinidazole, 0.17?ng/ml for dimetridazole and 0.24?ng/ml for ornidazole. Considering that nitroimidazoles were commonly used as veterinary drugs, nitroimidazole residues in food products of animal origin were detected by the method. The coefficient of variation for nitroimidazoles determination in contaminated chicken, chicken liver and shrimp were all <14% and the recovery rate was in the range 74.0–90.6%. The results proved that the developed method was successful in detecting nitroimidazoles in food products.