不补料连续酶解-膜分离耦合制备鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽的研究

以克服传统酶解技术存在的不足,提高酶解反应效率为目的,研究了鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽制备的不补料连续酶解-膜分离耦合反应技术.从实验得到的加酶量、底物浓度和循环泵转速时蛋白转化率的影响规律分析了酶膜耦合反应技术优于传统的酶解技术的原因.通过正交实验,得到最优的酶解工艺条件为:底物浓度4%(W/W)、加酶量1.5%、反应时间30min、反应温度60℃、循环泵转速120r/min和pH9.5,该条件下蛋白转化率高达97.56%.     

不补料连续酶解-膜分离耦合制备鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽的研究

以克服传统酶解技术存在的不足,提高酶解反应效率为目的,研究了鱼鳞胶原蛋白抗氧化肽制备的不补料连续酶解-膜分离耦合反应技术。从实验得到的加酶量、底物浓度和循环泵转速对蛋白转化率的影响规律分析了酶膜耦合反应技术优于传统的酶解技术的原因。通过正交实验,得到最优的酶解工艺条件为:底物浓度4%（W/W）、加酶量1.5%、反应时间30min、反应温度60℃、循环泵转速120r/min和pH9.5,该条件下蛋白转化率高达97.56%。      

酶解反应与膜分离耦合连续制备紫菜降血压肽

采用酶解反应与膜分离耦合连续制备紫菜降血压肽.研究反应过程中膜通量、蛋白转化率、截留液蛋白浓度的变化.测定连续补料酶膜耦合反应制备紫菜降血压肽的酶解效果和动力学参数,并与传统酶解反应的酶解效果和动力学参数进行比较.结果证明酶膜耦合反应通过消除产物抑制效应,较好地强化了反应过程;通过产物在线分离,有效地避免多肽的过度降解,有助于产物活性的提高;通过酶的循环利用,显著提高单位酶的产肽量.连续酶膜耦合反应为酶法制备紫菜降血压肽提供一种更有效的方法.     

体外酶法水解制备小分子透明质酸

为了制备分子量分布集中的小分子透明质酸,在6 g/L的高分子量透明质酸水溶液中加入一定梯度重组水蛭透明质酸酶,并控制水解时间。结果表明,通过控制加入重组水蛭HAase的量和水解时间,根据水解分子量下降规律,可以制备出分子量分布集中的小分子HA,包括水解终产物透明质酸四糖和六糖。同时,通过高效体积排阻色谱和琼脂糖凝胶电泳,可以证明水解产物的分子量分布集中。     

酶膜耦合法制备高聚合度壳寡糖

为了制备高聚合度壳聚糖,本研究通过对比分批酶解法和酶膜耦合法制备所得壳寡糖产物的聚合度差异,探索了利用酶膜耦合技术高效富集制备高聚合度壳寡糖的可行性。研究结果表明,酶膜耦合方法所得壳寡糖产物中DP 4~8壳寡糖的总收率高达78.1%,DP 4~8壳寡糖所占比例分别为16.5%、35.8%、18.9%、7.81%和5.12%。同时,以卷式膜系统代替板式膜系统,通过错流过滤的方式,可以有效降低实验过程中的不可逆膜污染(R_if=1.56×10⁶ m^-1),提高了料液底物浓度(30 g/L)。综上所述,本研究建立了一种基于酶膜耦合技术的高聚合度壳寡糖连续制备工艺,为高聚合度壳寡糖的应用和功能研究提供了基础。     

低分子量罗非鱼眼透明质酸的制备及其抗氧化性研究

本研究采用微波结合过氧化氢+抗坏血酸法降解罗非鱼眼透明质酸,通过改变降解条件制备相对分子量分别为小于5、5~10、10~30、30~60ku的低分子量透明质酸(LMWHA)。研究比较了不同分子量LMWHA对·OH、DPPH自由基的清除作用以及还原力的大小。结果显示,随着LMWHA分子量的降低其对DPPH的清除率以及还原力增大,而对·OH的清除率减小,这种现象可能与LMWHA清除自由基的作用机理有关,LMWHA清除DPPH自由基以及还原力的大小依赖于其双键的数量,而清除·OH能力的大小则依赖于LMWHA链上羟基以及其螯合过渡金属离子的能力。实验证明低分子量透明质酸具有良好的抗氧化性。     

低分子量罗非鱼眼透明质酸的制备及其抗氧化性研究

本研究采用微波结合过氧化氢+抗坏血酸法降解罗非鱼眼透明质酸,通过改变降解条件制备相对分子量分别为小于5、5¹0、10³0、30⁶0ku的低分子量透明质酸（LMWHA）。研究比较了不同分子量LMWHA对·OH、DPPH自由基的清除作用以及还原力的大小。结果显示,随着LMWHA分子量的降低其对DPPH的清除率以及还原力增大,而对·OH的清除率减小,这种现象可能与LMWHA清除自由基的作用机理有关,LMWHA清除DPPH自由基以及还原力的大小依赖于其双键的数量,而清除·OH能力的大小则依赖于LMWHA链上羟基以及其螯合过渡金属离子的能力。实验证明低分子量透明质酸具有良好的抗氧化性。      

萃取—反应耦合工艺制备硫酸钾的研究

对以硫酸亚铁和氯化钾为原料、采用萃取－反应耦合方法生产硫酸钾并副产Fe(OH)2的新工艺进行了研究。结果表明，三辛胺－磷酸三丁酯－异戊醇混合萃取剂对硫酸亚铁与氯化钾混合水溶液中的HCl有良好的萃取性能，经三级错流萃取后，Cl^-的萃取率达87．31％，产品硫酸钾中含氯量为0．65％。     

鱿鱼眼提取透明质酸去蛋白质酶解工艺研究

对鱿鱼眼提取透明质酸的初提取液的去蛋白酶解工艺进行了研究.分别对酶种类、酶用量、酶解温度、酶解时间进行单因素实验,得出初步结论后,再采用正交实验对酶解条件进行优化.结果显示,中性蛋白酶去蛋白效果好,且分子量损失最小.酶解温度对去蛋白率影响最大,酶用量对分子量损失率影响最大.鱼眼初提取液的去蛋白酶解最佳条件为:中性蛋白酶用量1.O%、酶解温度50℃、酶解时间6h.该条件下,透明质酸得率85.7%,分子量损失率10.6%,蛋白去除率91.1%.     

鱿鱼眼提取透明质酸去蛋白质酶解工艺研究

对鱿鱼眼提取透明质酸的初提取液的去蛋白酶解工艺进行了研究。分别对酶种类、酶用量、酶解温度、酶解时间进行单因素实验,得出初步结论后,再采用正交实验对酶解条件进行优化。结果显示,中性蛋白酶去蛋白效果好,且分子量损失最小。酶解温度对去蛋白率影响最大,酶用量对分子量损失率影响最大。鱼眼初提取液的去蛋白酶解最佳条件为:中性蛋白酶用量1.0%、酶解温度50℃、酶解时间6h。该条件下,透明质酸得率85.7%,分子量损失率10.6%,蛋白去除率91.1%。      

低分子量透明质酸的制备及其抗氧化活性的研究

首先研究了Fe2+-S2O2-8氧化体系硫酸根自由基(SO-4·)对透明质酸(HA)的氧化降解作用,初步确定了SO-4·氧化降解HA制备低分子量透明质酸(LMWHA)的实验条件。接着HA降解产物经过乙醇沉淀以及凝胶柱层析纯化,采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测得纯化后LMWHA分子量为1.45×105Da。最后采用不同的体外抗氧化实验,并以HA为对照,研究了LMWHA的抗氧化活性,发现SO-4·降解后生成的LMWHA的抗氧化活性高于降解前的。本实验说明用SO-4·降解HA制备具有抗氧化活性LMWHA是可行的,为LMWHA抗氧化药物的开发提供了理论依据。     

溶菌酶胁迫培养提高透明质酸分子量

以马疫链球菌生理特点为基础,采用溶菌酶胁迫手段提高透明质酸分子量。在单因素实验基础上选取实验因素与水平,根据Box-Benhnken中心组合设计四因素三水平的响应面分析法,进行回归方程分析,确定溶菌酶最佳胁迫条件。结果表明,最佳的透明质酸培养条件为:在种子培养阶段9.0h时加入0.2U/mL溶菌酶,发酵培养阶段7.0h时加入0.6U/mL溶菌酶。在最佳胁迫培养条件下可以获得分子量为2.44×106u的透明质酸,较对照组提高了34.1%。      

双酶复合法提取蛋壳膜中透明质酸的研究

利用双酶复合法,以胰蛋白酶、木瓜蛋白酶复合提取蛋壳膜中透明质酸,通过响应面试验确定双酶法提取透明质酸的最佳工艺条件:料液比1∶40(m∶V),木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的活性比1∶1,酶用量1 240U/g,温度50℃,pH值7.3,提取时间6h。该条件下,蛋壳膜中透明质酸的提取量为12.2mg/g.蛋壳膜。     

高分子量透明质酸生产菌SH0201的诱变选育

以Streptococcus equi SHO为出发菌,通过5-BU、X-射线辐照诱变选育到1株无溶血性和透明质酸裂解酶双缺陷型菌株X103;以NTG为诱变剂对该菌进行化学诱变,选育到遗传稳定性好,无溶血性,产高分子量透明质酸(HA)的突变菌SH0201,其摇瓶发酵生产HA相对分子量达2.06×106Da,较之出发菌,所产HA分子量有大幅度的提高.     

氧化胁迫联合UV、DES诱变选育高产、高分子量透明质酸菌株

本实验以马疫链球菌MF003为出发菌,通过H2O2氧化胁迫培养、紫外辐照（UV）和硫酸二乙酯（DES）对菌株进行复合诱变,获得一株高产、高分子量透明质酸酶缺陷菌株ZD-25。经摇瓶发酵培养,该菌株透明质酸产量达到1.61g/L,相对分子量达到2.13×106u,分别比原始菌株提高了120.5%,57.8%。经过多次传代后,菌株透明质酸产量及相对分子量具有较高的稳定性。经5L发酵罐初步发酵,突变株ZD-25的透明质酸产量达到4.26g/L,相对分子量达到2.90×106u,分别比原始菌株提高了166.3%,93.3%。      

Impact of a low molecular weight hyaluronic acid derivative on contact lens wettability

PurposeTo investigate the interaction of a novel low molecular weight hyaluronic acid derivative containing hydrophobic groups with soft contact lenses and its effect on lens hydrophilicity compared with a conventional form of hyaluronic acid.MethodsThis investigation studied the uptake of fluorescently-labelled hyaluronic acid and a low molecular weight hyaluronic acid derivative to four types of contact lenses using fluorescent microscopy and confocal laser scanning microscopy. Further, the four lens types were used to compare efficacy in improving hydrophilicity, as well as maintenance of contact angle measurements, in commercially available multipurpose solutions that contained either hyaluronic acid, the low molecular weight hyaluronic acid derivative, or an alternative wetting agent.ResultsThe low molecular weight hyaluronic acid derivative was found to sorb more readily to silicone hydrogel lenses and exhibit a greater accumulation over time than conventional hyaluronic acid. Multipurpose solutions containing the low molecular weight hyaluronic acid derivative showed an increase in lens hydrophilicity through decreases in contact angle measurements when compared with those obtained from lenses treated with multipurpose solutions containing conventional hyaluronic acid or alternative wetting agents. This increase in lens hydrophilicity associated with the low molecular weight hyaluronic acid derivative was also maintained over multiple cycles in phosphate buffered saline, while alternative solutions with conventional hyaluronic acid did not.ConclusionOverall, lens treatment using a low molecular weight hyaluronic acid derivative-based solution lead to improved in vitro lens hydrophilicity.     

水生生物来源透明质酸的生化特性及其制备的研究进展

透明质酸因其独特的生理生化特性在食品、医药及化妆品等领域得到广泛应用,本文论述了来源于水生生物透明质酸的基本特性以及提取纯化方法,为其部分取代陆生生物透明质酸及其在食品、医药工业中的利用提供了理论基础,并对水产透明质酸进一步的应用进行了展望。      

透明质酸产生菌摇瓶发酵工艺条件的研究

研究了透明质酸产生菌的摇瓶发酵条件。对摇瓶发酵条件进行了优化,确定了最佳发酵培养基、最适培养条件。结果表明:摇瓶发酵培养基的组成为4%的淀粉葡萄糖水解液,2%蛋白胨和酵母粉的混合有机氮源及0.5%硝酸钠为无机氮源,MgSO4·7H2O为0.1%,KH2PO4为0.2%。发酵温度为37℃,接种种龄为14~16h之间,摇瓶培养时,500mL三角烧瓶装液量为20mL时,可获得的产量最大。