发酵法制备沙光鱼多肽及其抗氧化活性

将米曲霉接种到pH5.0 的沙光鱼匀浆液中进行发酵培养,利用米曲霉产生的蛋白酶水解沙光鱼蛋白。研究发酵过程中蛋白酶的产生及沙光鱼蛋白的水解动态;对发酵液进行超滤,测定不同截留分子质量的发酵液清除自由基的活性及抗氧化活性。结果表明：随着发酵时间的延长,沙光鱼蛋白的水解度和多肽得率不断增加,多肽的平均链长度降低。发酵48h 后,多肽链平均长度为14,水解度为26.6%,多肽得率最高达到8.98%,抗氧化能力较强。不同截留分子质量的多肽液中,平均肽链长度为14 个氨基酸残基的多肽超滤液体外抗氧化能力较强。     

蚕蛹多肽制备工艺及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶水解蚕蛹蛋白,以水解度和清除DPPH·能力为指标对酶解过程进行分析,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶对蚕蛹蛋白具有较好的水解效果,其水解产物有较高抗氧化活性,对DPPH·、超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)都具有较强的清除能力。     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽

研究复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化活性多肽的最佳条件,并探究其体外抗氧化活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,以pH、温度、底物浓度、酶用量为实验因素,通过L₉(34)正交实验设计筛选出制备绿豆多肽的最佳水解条件,使用DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明:复合酶协同水解绿豆蛋白的最适反应条件为pH8.5,温度56 ℃,底物浓度8%,酶用量4%,水解度可达到33.95%。所得绿豆抗氧化多肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基清除率分别为82.8%、76.82%和56.85%,具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

罗非鱼内脏蛋白酶解超滤产物的抗氧化活性研究

将罗非鱼内脏蛋白水解得到可溶性多肽,利用超滤技术对水解产物进行分级分离,并检测酶解产物及其超滤产物的体外还原能力、清除DPPH自由基能力、清除超氧阴离子能力及抑制卵黄磷脂氧化能力。结果表明:酶解可以得到分子量范围宽、具有多种抗氧化能力的多肽;超滤分级后,分子量5kDa的多肽组分抗氧化能力最强,尤其是该组分清除超氧阴离子的能力及抑制脂质过氧化的能力接近VC,其IC50值与VC的IC50值处于同一个数量级。     

体外模拟消化芝麻蛋白产生多肽的抗氧化性分析

为证实芝麻蛋白在人体内消化可产生抗氧化肽,采用体外模拟消化芝麻蛋白,分析芝麻蛋白水解产生多肽的组成与抗氧化活性。结果显示:在体外模拟消化模型中,芝麻蛋白在1 h内丧失原有亚基结构,最终水解为相对分子质量在15 kDa以下的多肽;水解产生的多肽具有抗氧化性,其中胃蛋白酶水解产生的多肽具有较强的DPPH自由基清除能力,而胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶的水解有助于提升多肽的ABTS自由基清除能力。上述结果表明,芝麻蛋白在人体内消化会产生抗氧化肽,不同消化阶段的芝麻多肽组成有差异,从而造成抗氧化活性的差别。     

麦麸多肽的分离纯化及抗氧化功能研究

采用碱性蛋白酶Alcalase 水解麦麸蛋白制备麦麸多肽,利用SephadexG-25 和DEAE-32 对麦麸多肽进行纯化,醋酸纤维素薄膜电泳法测定麦麸多肽纯度,用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、脱氧核糖法检测其对超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)的清除能力,分光光度法测定小鼠红细胞溶血和肝线粒体膨胀程度。结果表明,分离纯化的麦麸多肽对O2·和·OH 的清除率别为53.16%、62.39%,并且具有明显抑制氧化溶血现象和·OH 诱导线粒体肿胀的作用,说明麦麸多肽具有较强的抗氧化功能。     

桃仁多肽的酶法制备及其抗氧化活性分析

以桃仁蛋白为原料,对响应面法优化多肽制备条件和酶解多肽各组分的抗氧化活性进行了研究。结果表明:以底物浓度3.5%、pH 10.4、加酶量4 200 U/g、酶解时间4.9 h条件下进行碱性蛋白酶酶解,可获得桃仁蛋白的最高水解度(61.12±0.7)%和多肽得率(67.91±0.5)%。桃仁蛋白及其酶解物的SDS-PAGE凝胶电泳图表明,酶解后的多肽分子质量大部分小于12 000 u。酶解液(PPH)及其超滤分离所得4组分分别采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、亚硝酸根离子清除能力和总抗氧化能力4个体外抗氧化活性测试,结果显示不同分子质量组分间的抗氧化活性存在显著性差异(P0.05),分子质量越小,其抗氧活性越强。RP-HPLC分析表明,抗氧化活性最强的P-IV组主要由9种具有一定疏水性的多肽组成。     

灵芝双向发酵液冻干粉抑制环氧化酶-2及抗氧化活性的研究

该研究通过液体深层发酵制备灵芝、灵芝-玉竹、灵芝-桦树茸、灵芝-人参以及灵芝-三七发酵液冻干粉，采用显色法结合紫外分光光度法测定发酵液冻干粉总糖、总皂苷及总多肽的含量，同时测定其对DPPH自由基及ABTS阳离子自由基清除能力以及环氧化酶-2(cyclooxygenase, COX-2)的抑制能力，评价其体外抗氧化及抑制COX-2的活性，以此筛选出抑制COX-2及抗氧化活性最优的灵芝发酵组合方式。研究结果表明，相较于灵芝发酵液冻干粉，灵芝-玉竹发酵液冻干粉的DPPH自由基及ABTS阳离子自由基清除能力及COX-2抑制能力最强，并且其总皂苷及总多肽的含量分别为灵芝发酵液冻干粉的1.26、1.27倍，含量显著升高(P<0.05)。因此该研究得出结论，灵芝-玉竹发酵液冻干粉抑制COX-2及抗氧化活性能力的显著增强，与其总皂苷及总多肽含量的显著升高存在一定的关系，通过添加玉竹进行灵芝发酵为最优的抑制COX-2及抗氧化发酵组合方式，这为灵芝双向发酵工业化生产提供了思路，也为进一步研究发酵液各个成分含量与其活性的关系奠定了基础。     

甘蔗醋发酵产物在体外及模拟人体肠胃环境中的抗氧化活性

甘蔗中含有丰富的多酚和黄酮类物质,本研究以总酚含量、黄酮含量、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基能力、清除羟自由基（·OH）能力、总还原能力为指标,探讨由甘蔗汁发酵而成的甘蔗酒、甘蔗醋在体外及模拟人体消化环境整个过程中抗氧化活性的变化。结果表明,在酒精发酵阶段酒精对多酚和黄酮具有一定的提取作用;在醋酸发酵阶段多酚和黄酮含量呈现波动状态,这可能和发酵过程中的氧化、水解作用有关。甘蔗醋发酵产物在体外具有极强的清除DPPH自由基能力,同时甘蔗酒还具有较强清除·OH的能力。多酚和黄酮经过模拟人体肠胃消化环境后发生了一系列反应：多酚和黄酮在胃液环境中的含量极显著下降（P＜0.01）,而在肠液环境中含量略有上升。通过对不同发酵产物在体外及模拟人体肠胃消化环境下清除DPPH自由基能力、清除·OH能力、总还原能力的比较,表明人体肠胃环境中的抗氧化活性不仅受食物中抗氧化物质的影响,而且受消化液中pH值、蛋白酶、磷酸盐等多种生理因素的影响。     

大豆β-伴球蛋白多肽抗氧化活性研究

以大豆β-伴球蛋白为原料,利用枯草芽孢杆菌进行发酵制备抗氧化肽,研究发酵时间和浓度对大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活性影响。结果表明,发酵40 h时,大豆β-伴球蛋白肽抗氧化活力最高,抑制自由基能力最强;在此最佳发酵时间下,当大豆β-伴球蛋白肽浓度为1.6 mg/mL时,对羟自由基清除率最大;浓度为2 mg/mL时,对超氧阴离子自由基清除能力最强。     

Flaxseed protein-derived peptide fractions: Antioxidant properties and inhibition of lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in murine macrophages

A protein isolate was produced from cellulase-treated defatted flaxseed meal followed by hydrolysis with seven proteases and evaluation of the hydrolysates for antioxidant and anti-inflammatory properties. The flaxseed protein hydrolysates (FPH) were processed by ultrafiltration and ion-exchange chromatography to isolate low molecular weight (LMW) and cationic peptide fractions, respectively. The peptides showed antioxidant properties in scavenging 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical, superoxide anion radical, electron-spin resonance-detected hydroxyl radical and nitric oxide. In addition, all peptide fractions inhibited semicarbazide-sensitive amine oxidase activity. Antioxidant activities of these peptides were dependent on the specificity of proteases and size of the resulting peptides. The LMW fractions from pepsin, ficin and papain FPH also inhibited lipopolysaccharide-induced nitric oxide productions in RAW 264.7 macrophages without apparent cytotoxicity; thus, these peptides may act as anti-inflammatory agents. Thus, flaxseed protein hydrolysates may serve as potential ingredients for the formulation of therapeutic products.     

草鱼蛋白源抗氧化肽的分离及鉴定

利用超滤、离子交换色谱、高效逆流色谱以及凝胶过滤色谱等系列分离纯化技术从草鱼蛋白酶解产物中分离纯化抗氧化活性肽,分离过程中发现相对分子质量1～3kD 的组分抗氧化活性最强,且碱性肽组分的抗氧化活性强于酸性或中性肽组分、疏水性肽组分的抗氧化活性强于亲水性肽组分。最终借助反相高效液相色谱在线连接的电喷雾质谱结合氨基酸分析鉴定出一种抗氧化肽,一级结构序列为Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val,相对分子质量为966.3D。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

Purification and identification of antioxidant peptides from grass carp muscle hydrolysates by consecutive chromatography and electrospray ionization-mass spectrometry

Grass carp muscles were hydrolyzed with various proteases (papain, bovine pancreatin 6.0, bromelain, neutrase 1.5MG and alcalase 2.4L) to extract antioxidant peptides. The hydrolysates were assessed using methods of hydroxyl radical scavenging ability and lipid peroxidation inhibition activity. Hydrolysate prepared with alcalase 2.4L was found to have the highest antioxidant activity. It was purified using ultrafiltration and consecutive chromatographic methods including ion-exchange chromatography, multilayer coil high-speed counter-current chromatography, and gel filtration chromatography. The purified peptide, as a potent antioxidant, was identified as Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val (966.3 Da) using RP-HPLC connected on-line to an electrospray ionization mass spectrometry. As well, it was found that basic peptides had greater capacity to scavenge hydroxyl radical than acidic or neutral peptides and that hydrophobic peptides contributed more to the antioxidant activities of hydrolysates than the hydrophilic peptides. In addition, the amino acid sequence of the peptide might play an important role on its antioxidant activity.     

4 种乳酸菌体外抗氧化能力的比较研究

通过抗脂质过氧化、清除DPPH自由基、清除超氧阴离子自由基(O2－ ·)、还原力、清除羟自由基实验对发酵乳杆菌、乳酸乳球菌、嗜酸乳杆菌和瑞士乳杆菌4种乳酸菌发酵上清液和胞内提取物的抗氧化能力进行研究。结果表明：4种乳酸菌的具有不同的抗氧化能力,其中瑞士乳杆菌的羟自由基清除能力、DPPH自由基清除能力和还原能力相对较高,乳酸乳球菌和嗜酸乳杆菌清除O2－ ·能力相对较强,发酵乳杆菌抗脂质过氧化能力为最强。实验还初步研究乳酸菌的抗氧化机理,显示乳酸菌存在SOD和GSH-Px,这可能与乳酸菌的抗氧化作用有一定相关性。     

Influence of the degree of hydrolysis (DH) on antioxidant properties and radical-scavenging activities of peanut peptides prepared from fermented peanut meal

To study the influence of degree of hydrolysis (DH) on antioxidant properties of peanut peptides, the peanut meal was fermented by Bacillus subtilis. The fermentation time was 48, 72, and 96 h, respectively, to prepare peanut peptides at different degree of hydrolysis. The peanut peptides (11.18, 16.20, and 21.41% of DH, respectively) were extracted from fermentation liquid. The antioxidant properties of these peanut peptides were evaluated based on DPPH^· radical (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical) scavenging activity, superoxide anion-scavenging activity, reducing power, metal-chelating activity, and inhibition of linoleic acid autooxidation. Peanut peptides (21.41% of DH) at 1 mg/mL exhibited 80.86 and 29.35% of scavenging concentration percent on DPPH^· and superoxide anion radical, respectively. In addition, the reducing power of peanut peptides was 0.368 at 2 mg/mL, and they possessed 76.32% of Fe²⁺-chelation ability at 2 mg/mL and 63.75% of inhibition of linoleic acid autooxidation at 0.8 mg/mL. The antioxidant activities of the peanut peptides (21.41% of DH) were stronger compared with others (11.18 and 16.20% of DH), and this indicated the antioxidant activities of peanut peptides increased with increasing DH (p < 0.05). To know much about the peanut peptides, they were subjected to amino acid analysis and determination of molecular weight distribution. Some acidic amino acids and essential amino acids were found, and the average molecular weight distributions were concentrated in <1,400 Da (86.96%). Combined with the results of the amino acid profiles, the peanut peptides were believed to have high nutritive value besides antioxidant activities.     

合浦珠母贝抗氧化肽的性质及应用研究

以合浦珠母贝肉抗氧化肽为原料,研究其抗氧化活性、DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力、羟自由基清除能力、亚油酸过氧化反应、红细胞溶血实验、保湿活性及添加到化妆品中的抗氧化效果。结果表明：合浦珠母贝肉抗氧化肽具有较强的抗氧化能力,DPPH自由基清除率为77.7%;超氧阴离子清除率为46.3%;羟自由基清除率为33.5%;抗亚油酸过氧化能力和抑制膜脂质过氧化能力均较强;具有良好的吸湿及保湿能力。合浦珠母贝抗氧化肽在营养霜中的最佳添加量为1%,此时DPPH自由基清除率和羟自由基清除率分别为48.34%±2.96%、33.52%±2.34%,具有良好的抗氧化活性和稳定性,为合浦珠母贝抗氧化肽在化妆品种的应用提供了理论基础。     

Isolation And Identification Of An Antioxidant Peptide Prepared From Fermented Peanut Meal Using Bacillus Subtilis Fermentation

In order to recover and utilize peanut protein resource, peanut meal was fermented using Bacillus subtilis to prepare antioxidant peptides in this study. The antioxidant activities of the peanut peptides were evaluated via six in vitro tests, namely, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging activity, 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) scavenging activity, inhibition of linoleic acid autoxidation, reducing power, and metal chelating capacity. The peanut peptides showed 63.28% of scavenging effect on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical, 70.67% of scavenging effect on 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) and 39.32% of superoxide anion radical scavenging activity at 1.0 mg/ml, and 62.69% of inhibition on linoleic acid autooxidation at 0.8 mg/ml. Besides, the peanut peptides exhibited 32.8% of reducing power and 60.44% of Fe²⁺-chelating capacity at 2 mg/ml. Then the peanut peptides were desalted with macroporous resin; the fraction eluted with 75% ethanol showed the highest scavenging activity on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical. This fraction was subject to further purification using gel filtration chromatography and reverse phase-high performance liquid chromatography. At last, a peptide was gained, and it was identified to be Tyr-Pro with matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight mass spectrometry. The results indicated that it is feasible to prepare natural antioxidants from peanut meal using B. subtilis fermentation.     

不同益生菌液态发酵牡蛎制品的体外抗氧化活性的比较

该试验选用鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、肠膜明串珠菌及布拉酵母菌液态发酵牡蛎,比较其总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、羟自由基及超氧阴离子自由基清除能力和总肽含量。结果表明,4株益生菌发酵牡蛎制品组的总抗氧化能力与空白组相比均显著提升,其中鼠李糖乳杆菌组最高,为（4.04±0.05）U/m L;4组均具有自由基清除能力,其中鼠李糖乳杆菌组的DPPH自由基清除能力最强,羟自由基清除能力与其他组相近,但超氧阴离子自由基清除能力最低;总肽含量由高到低排序的发酵牡蛎制品组为肠膜明串珠菌组>干酪乳杆菌组>鼠李糖乳杆菌组>布拉酵母菌组。初步确定鼠李糖乳杆菌为适用于发酵牡蛎制备活性肽的优良菌株,可为海洋食药资源高值化利用提供可借鉴的技术途径。